ELISA實驗結果(guo)90%取(qu)決於(yu)它!樣本處(chu)理全(quan)攻略

　　ELISA實驗結果(guo)的(de)可靠性(xing)高(gao)度(du)依(yi)賴樣本(ben)處(chu)理的(de)規(gui)範(fan)性(xing)，以下(xia)是關鍵(jian)要(yao)點(dian)總結：

　　壹、樣本類(lei)型(xing)與(yu)處(chu)理原(yuan)則(ze)

　　血清/血漿(jiang)‌

　　血清需室溫靜置1-2小(xiao)時或(huo)4℃過(guo)夜(ye)後，3000×g離心15-20分(fen)鐘(zhong)，避免溶(rong)血和反(fan)復凍(dong)融‌。

　　血漿(jiang)需使用(yong)EDTA或(huo)肝素抗凝，采集(ji)後30分(fen)鐘(zhong)內(nei)離心，避免室溫放置過(guo)久(jiu)導(dao)致因子(zi)降(jiang)解(jie)‌。

　　細胞培(pei)養上(shang)清‌

　　1000×g離心20分(fen)鐘(zhong)去(qu)除(chu)碎(sui)片，建(jian)議(yi)分(fen)裝(zhuang)保(bao)存並避免凍(dong)融‌。若檢(jian)測低(di)豐度蛋白(bai)，可濃縮樣本(ben)。

　　組織(zhi)/細胞裂(lie)解(jie)液(ye)‌

　　組織(zhi)需按(an)1:9(w/v)加(jia)入(ru)含蛋白(bai)酶(mei)抑(yi)制(zhi)劑(ji)的PBS勻(yun)漿(jiang)，冰(bing)上(shang)超聲(sheng)或(huo)凍(dong)融裂(lie)解(jie)後5000×g離心‌。

　　貼(tie)壁細胞需胰酶(mei)消(xiao)化後PBS洗滌(di)，超(chao)聲裂(lie)解(jie)時建(jian)議(yi)3×5秒(miao)(冰(bing)上(shang)操作)‌。

　　二、關(guan)鍵(jian)註意事項(xiang)

　　避免假陽性(xing)‌：樣(yang)本(ben)需嚴格無(wu)菌(jun)，防(fang)止(zhi)細菌汙染(含內(nei)源性(xing)HRP)或(huo)纖(xian)維(wei)蛋白(bai)原(yuan)幹擾(rao)‌。

　　防(fang)止(zhi)假陰(yin)性(xing)‌：目(mu)標(biao)蛋白(bai)易(yi)降解(jie)時需添加(jia)蛋白(bai)酶(mei)抑(yi)制(zhi)劑(ji)，避免使(shi)用(yong)含NaN3或高(gao)濃度(du)EDTA的保存液(ye)‌。

　　標準(zhun)化操作‌：離心參(can)數(shu)、凍融次數(shu)需統壹(yi)，不同(tong)批(pi)次樣(yang)本處(chu)理條件(jian)需壹致(zhi)‌。

　　三(san)、特殊(shu)樣(yang)本(ben)處(chu)理

　　腦(nao)脊液(ye)/尿(niao)液(ye)‌：需5000-6000×g離心去(qu)除(chu)沈澱(dian)，分(fen)裝(zhuang)後-80℃保存。

　　酸化樣本(ben)‌：部(bu)分(fen)樣(yang)本(ben)需用(yong)HCl中和後檢(jian)測(如某(mou)些(xie)細胞因子(zi))‌。

　　四(si)、常(chang)見錯誤(wu)與(yu)優化

　　高背景(jing)‌：可能(neng)因封閉(bi)不充(chong)分(fen)或(huo)洗(xi)滌(di)不凈，建(jian)議(yi)使用(yong)5%脫(tuo)脂牛奶+0.05% Tween-20封閉(bi)液(ye)‌。

　　重復(fu)性(xing)差‌：建(jian)議(yi)預實驗確(que)定(ding)樣(yang)本稀釋(shi)倍(bei)數，確保OD值在(zai)標準(zhun)曲線線性(xing)範(fan)圍(wei)內(nei)。

　　通過(guo)規(gui)範(fan)樣本(ben)處(chu)理流(liu)程，可顯著(zhu)提(ti)升ELISA數據(ju)的(de)準(zhun)確性(xing)和重復性(xing)‌。

　　註(zhu)：以上(shang)僅供參考，不作(zuo)為(wei)實際(ji)數據，實驗需嚴格遵(zun)循(xun)說(shuo)明或咨(zi)詢技(ji)術(shu)老師。

　　天(tian)津(jin)本生壹(yi)直視(shi)質量控制(zhi)為(wei)企(qi)業(ye)的生命，追求企(qi)業(ye)競爭力的(de)不斷(duan)提(ti)升。公司(si)在(zai)經營(ying)中始終秉承：遵紀(ji)守(shou)法(fa)，嚴於(yu)律(lv)己，寬(kuan)仁(ren)以待，敢於(yu)承擔的(de)企(qi)業(ye)精(jing)神作(zuo)為(wei)標準(zhun)，以過(guo)硬的質量和優良的服(fu)務(wu)來(lai)維(wei)護和拓展市場，較大(da)限(xian)度的滿足(zu)客(ke)戶的需求。與(yu)客(ke)戶的共(gong)贏(ying)，是我們(men)的(de)發展目(mu)標，本(ben)生，您(nin)信任(ren)的合作(zuo)夥伴(ban)!