ELISA操(cao)作(zuo)指(zhi)南：從板(ban)子(zi)準(zhun)備(bei)到結果分(fen)析

　　以(yi)下(xia)是(shi)ELISA實(shi)驗從板(ban)子(zi)準(zhun)備(bei)到結果分(fen)析的(de)完整(zheng)操作(zuo)指(zhi)南(nan)，結合高可信度來源(yuan)和(he)富媒(mei)體資(zi)源(yuan)整(zheng)理(li)：

　　壹(yi)、實(shi)驗前準(zhun)備

　　試(shi)劑(ji)與(yu)耗材(cai)‌

　　需(xu)準(zhun)備包(bao)被(bei)板(ban)、標(biao)準(zhun)品(pin)、生(sheng)物素(su)化(hua)抗(kang)體、酶(mei)標(biao)二(er)抗(kang)、TMB顯色(se)液及(ji)終(zhong)止液等‌

　　試劑(ji)需(xu)室(shi)溫平(ping)衡1小(xiao)時，凍(dong)存樣(yang)本(ben)需(xu)4℃緩慢解(jie)凍(dong)‌

　　樣(yang)本(ben)處理(li)‌

　　血(xue)清(qing)/血漿需(xu)3000×g離(li)心15分鐘去(qu)除纖(xian)維蛋白，細(xi)胞(bao)上清需(xu)0.22μm過濾(lv)‌

　　建(jian)議(yi)進(jin)行預實(shi)驗確定最佳稀(xi)釋比例(li)(通(tong)常5-10倍梯度(du)稀(xi)釋)‌

　　二、實(shi)驗操作(zuo)流(liu)程(cheng)

　　包(bao)板(ban)與(yu)封(feng)閉(bi)‌

　　用碳(tan)酸鹽(yan)緩沖(chong)液(pH 9.6)稀(xi)釋抗(kang)原/抗(kang)體(1-10 μg/mL)，每(mei)孔加(jia)100μL，4℃過夜或37℃孵育(yu)2小(xiao)時‌

　　封(feng)閉液推薦(jian)5% BSA或脫(tuo)脂奶粉(fen)，室(shi)溫孵育(yu)1-2小(xiao)時‌

　　加(jia)樣與(yu)孵育(yu)‌

　　標(biao)準(zhun)品需(xu)2倍稀(xi)釋系列(lie)(如(ru)640pg/ml至0pg/ml)，每濃度設(she)2個(ge)復孔

　　樣(yang)本(ben)與(yu)標(biao)準(zhun)品(pin)加(jia)樣需(xu)在(zai)15分鐘內(nei)完成(cheng)，37℃孵育(yu)30-60分(fen)鐘‌

　　洗(xi)滌關鍵(jian)步(bu)驟‌

　　每孔(kong)加(jia)300μL洗(xi)滌液，震蕩浸泡1-2分鐘，重復3-5次(ci)，拍(pai)幹(gan)時避免液體殘留‌

　　三(san)、顯色(se)與(yu)讀(du)數(shu)

　　顯(xian)色(se)反(fan)應‌

　　每孔(kong)加(jia)100μL TMB底物，避光(guang)孵育(yu)5-30分(fen)鐘(顯色(se)梯(ti)度(du)需(xu)肉(rou)眼(yan)觀(guan)察)‌

　　終止(zhi)液(如2M硫酸(suan))加(jia)入(ru)後(hou)15分鐘內(nei)用酶(mei)標(biao)儀(yi)測(ce)450nm吸光(guang)值(zhi)‌

　　結(jie)果分析‌

　　標(biao)準(zhun)曲(qu)線(xian)需(xu)R²>0.99，樣(yang)本(ben)OD值(zhi)需(xu)在(zai)標準曲線(xian)線(xian)性(xing)範圍(wei)內(nei)‌

　　陽性(xing)判定：樣本(ben)OD值(zhi)>陰(yin)性(xing)對(dui)照2.1倍‌

　　常見問(wen)題處理(li)

　　高(gao)背(bei)景‌：可能因洗(xi)滌不充分或封(feng)閉(bi)不足，需(xu)增(zeng)加(jia)洗(xi)滌次(ci)數(shu)或更(geng)換(huan)封(feng)閉液‌

　　顯色(se)異常‌：檢查底物有效(xiao)期或孵育(yu)時間(jian)，避免氣泡幹(gan)擾(rao)‌

　　註(zhu)：以(yi)上僅(jin)供(gong)參考(kao)，不作為實(shi)際(ji)數據，實(shi)驗需(xu)嚴(yan)格(ge)遵(zun)循(xun)說(shuo)明(ming)或咨(zi)詢技(ji)術老師。

　　天津本(ben)生(sheng)壹(yi)直視(shi)質(zhi)量(liang)控(kong)制(zhi)為(wei)企(qi)業(ye)的(de)生(sheng)命，追(zhui)求(qiu)企(qi)業(ye)競(jing)爭(zheng)力的(de)不斷(duan)提(ti)升。公司(si)在(zai)經營中始終秉(bing)承(cheng)：遵紀(ji)守法，嚴(yan)於(yu)律己，寬仁以(yi)待(dai)，敢(gan)於承(cheng)擔的(de)企(qi)業(ye)精(jing)神作為標(biao)準，以(yi)過硬(ying)的(de)質(zhi)量(liang)和(he)優良(liang)的(de)服(fu)務來維護(hu)和(he)拓(tuo)展(zhan)市場(chang)，較(jiao)大限(xian)度的(de)滿(man)足客(ke)戶(hu)的(de)需(xu)求(qiu)。與(yu)客(ke)戶(hu)的(de)共(gong)贏，是(shi)我們的(de)發展(zhan)目(mu)標(biao)，本(ben)生(sheng)，您信任(ren)的(de)合(he)作(zuo)夥(huo)伴!