本(ben)生快訊——ELISA檢測(ce)需(xu)做(zuo)好(hao)那幾點(dian)，可得(de)出(chu)正(zheng)確結果
 

　　ELISA檢測(ce)系(xi)統可謂是免疫學(xue)反(fan)應(ying)應(ying)用(yong)到(dao)科(ke)研(yan)生產(chan)中(zhong)最(zui)為廣(guang)泛(fan)最(zui)為靈(ling)敏的(de)技術手段(duan)。可是在新老(lao)手操(cao)作過(guo)程中(zhong)總是會出(chu)現(xian)或大(da)或小的(de)問題，比如(ru)說(shuo)花(hua)板(ban)，假陽性，全(quan)顯色，全(quan)部(bu)顯色，顯色比(bi)空(kong)白還(hai)低.....。天(tian)津(jin)本(ben)生技術小編(bian)為(wei)您(nin)總結7步(bu)ELISA檢測(ce)實(shi)驗經驗，做(zuo)好(hao)這(zhe)7步(bu)您就(jiu)能得(de)出(chu)的(de)實驗(yan)結果。

　　1、包被(bei)原的(de)性質很(hen)重要，蛋(dan)白濃(nong)度，是否(fou)降(jiang)解，這(zhe)關系到(dao)妳(ni)做(zuo)出(chu)的(de)抗體(ti)可不(bu)可以被(bei)其識別，所以保(bao)存抗原很(hen)重要，我(wo)做(zuo)重組蛋(dan)白時(shi)，老師(shi)嚴(yan)格警告(gao)我(wo)壹(yi)定要在冰浴(yu)下緩慢融(rong)化(hua)就是這(zhe)個道理。還有(you)有(you)的(de)包被(bei)原可能不(bu)是蛋(dan)白，對(dui)於(yu)生物素和脂(zhi)類物(wu)質(zhi)或小分子(zi)物質(zhi)我(wo)們要(yao)事先對(dui)其改(gai)造(zao)再(zai)加以包被(bei)，方法(fa)簡(jian)要(yao)的(de)列(lie)出(chu)如(ru)下:

　　①親(qin)和素生物素:先親(qin)和素先包(bao)被(bei)載(zai)體(ti)，加入生物素化的(de)DNA，這(zhe)種包被(bei)方法(fa)均勻(yun)、牢固(gu)，已(yi)擴(kuo)大(da)應(ying)用(yong)於(yu)各(ge)種抗原(yuan)物(wu)質的(de)定量測定。

　　②脂(zhi)類物(wu)質(zhi):可將其在有(you)機(ji)溶劑(例(li)如(ru)乙(yi)醇(chun))中(zhong)溶解後加入ELISA板孔(kong)中(zhong)，開蓋置(zhi)冰箱過夜(ye)或冷風(feng)吹(chui)幹(gan)，待(dai)酒(jiu)精(jing)揮發後，讓脂(zhi)質自(zi)然(ran)幹(gan)固(gu)在固(gu)相(xiang)表(biao)面(mian)。

　　③小(xiao)分子(zi)必(bi)須依(yi)靠(kao)和(he)大(da)的(de)蛋(dan)白載(zai)體(ti)偶(ou)聯後才能固(gu)定在固(gu)相(xiang)載(zai)體(ti)上。

　　2、包(bao)被(bei)液的(de)選(xuan)擇，壹(yi)般(ban)選(xuan)擇ph9.6的(de)碳酸鹽(yan)緩沖(chong)液(ye)。但有時(shi)由於(yu)試驗(yan)的(de)需要(yao)，包被(bei)原的(de)特(te)殊(shu)性也可能采(cai)用中(zhong)性的(de)緩沖(chong)溶液來(lai)包(bao)。應(ying)註意以(yi)下原理：由於(yu)蛋(dan)白質(zhi)與聚苯(ben)乙(yi)xi固(gu)相(xiang)載(zai)體(ti)是通(tong)過(guo)物(wu)理吸附(fu)結合的(de)，靠(kao)的(de)是蛋(dan)白質(zhi)分(fen)子(zi)結構(gou)上(shang)的(de)疏水基(ji)團(tuan)與固(gu)相(xiang)載(zai)體(ti)表面(mian)的(de)疏水基(ji)團(tuan)間(jian)的(de)作用(yong)，這(zhe)種物理吸附(fu)是非(fei)特(te)異性的(de)，受(shou)蛋(dan)白質(zhi)的(de)分子(zi)量、等電(dian)點、濃(nong)度等的(de)影響(xiang)，大(da)分(fen)子(zi)蛋(dan)白質(zhi)較小分子(zi)蛋(dan)白質(zhi)通(tong)常(chang)含(han)有更多(duo)的(de)疏水基(ji)團(tuan)，故(gu)更(geng)易(yi)吸附(fu)到(dao)固(gu)相(xiang)載(zai)體(ti)表面(mian)。具體(ti)的(de)試驗(yan)還要(yao)有(you)堅(jian)固(gu)的(de)理論(lun)外(wai)也要(yao)實踐(jian)，看(kan)壹(yi)下最(zui)終可不(bu)可以應(ying)用(yong)到(dao)自(zi)己(ji)試驗(yan)當中(zhong)去。常(chang)用(yong)的(de)包被(bei)液除(chu)了(le)剛才提(ti)到(dao)的(de)pH9.6碳酸鹽(yan)緩沖(chong)液(ye)，還(hai)有pH7.2的(de)磷酸鹽(yan)緩沖(chong)液(ye)和(he)pH7-8的(de)Tris-HCL緩沖(chong)液(ye)等(deng)等。

　　3、封閉(bi)：繼包被(bei)之後用高(gao)濃(nong)度的(de)無(wu)關蛋(dan)白質(zhi)溶液再(zai)包被(bei)的(de)過程。封閉(bi)就是(shi)讓大(da)量不(bu)相關的(de)蛋(dan)白質(zhi)充填這(zhe)些(xie)空(kong)隙(xi)，從(cong)而排斥ELISA後的(de)步(bu)驟(zhou)中(zhong)幹(gan)擾(rao)物質的(de)再(zai)吸附(fu)。常(chang)用(yong)封閉(bi)劑有(you)：0.05%-0.5%的(de)BSA;10%的(de)小牛(niu)血清或1%明(ming)膠(jiao);脫(tuo)脂(zhi)奶(nai)粉(fen)，比(bi)較價廉，可以高(gao)濃(nong)度使用(yong)(5%-10%);還(hai)有壹(yi)些(xie)稀有用(yong)到(dao)的(de)各種動物(wu)血(xue)清(主要為(wei)了(le)排除相似(si)蛋(dan)白幹(gan)擾(rao))和酪(lao)蛋(dan)白等(deng)等(deng)。但最(zui)終選(xuan)用什(shen)麽，要依(yi)據(ju)試驗(yan)具體(ti)來(lai)實(shi)踐(jian)。

　　4、洗(xi)滌(di)板(ban)：可以說在ELISA操(cao)作中(zhong)，洗(xi)滌(di)是(shi)最(zui)主要的(de)關鍵(jian)技(ji)術。因為聚苯(ben)乙(yi)x等塑料(liao)對(dui)蛋(dan)白質(zhi)的(de)吸附(fu)是普(pu)遍性的(de)，為達(da)到(dao)分(fen)離遊(you)離的(de)和結(jie)合的(de)酶標記(ji)物(wu)的(de)目的(de)，清除(chu)殘留(liu)在板(ban)孔(kong)中(zhong)遊離的(de)物質(zhi)，以及(ji)非(fei)特(te)異性地吸附(fu)的(de)幹(gan)擾(rao)物質，在洗(xi)滌(di)時(shi)又應(ying)把這(zhe)種非特(te)異性吸附(fu)的(de)幹(gan)擾(rao)物質洗(xi)滌(di)下來(lai)。所以在洗(xi)板(ban)時(shi)會有(you)壹(yi)定誤(wu)差，人(ren)為因素很(hen)大(da)(當(dang)然(ran)有(you)條件的(de)用洗(xi)板(ban)機(ji)除外(wai))，洗(xi)的(de)不(bu)或串了孔(kong)，對(dui)如(ru)此(ci)靈(ling)敏的(de)ELISA系統可是不(bu)小的(de)影響(xiang)。

　　5、加抗體(ti)標本(ben)(和(he)二(er)抗):註意該換槍頭時(shi)換槍頭。標本稀釋壹(yi)般(ban)可用PBS稀釋，也可用封閉(bi)液去稀釋。如(ru)需(xu)加二抗，還要註意二(er)抗(kang)的(de)工作(zuo)濃度，太高(gao)浪(lang)費，太(tai)低則(ze)著色淺(qian)。

　　6、顯色：顯色系(xi)統又很(hen)多，我(wo)們壹(yi)開始做(zuo)的(de)時(shi)候(hou)，要(yao)選(xuan)擇適宜(yi)的(de)顯色系(xi)統。註意顯色系(xi)統酶活性底(di)物的(de)保存(cun)HRP結合物(wu)加硫柳泵(beng)，AP結合物(wu)可加疊(die)氮鈉。

　　7、每(mei)次做(zuo)盡(jin)量要把陰陽(yang)空(kong)三(san)個對(dui)照(zhao)做(zuo)好(hao)，如(ru)出(chu)現(xian)問(wen)題也好(hao)分析(xi)。

　　ELISA試劑(ji)盒(he)本生壹(yi)直視(shi)質(zhi)量控制(zhi)為企業的(de)生命，追(zhui)求(qiu)企業競(jing)爭(zheng)力的(de)不(bu)斷提(ti)升(sheng)。公(gong)司(si)在經營中(zhong)始終(zhong)秉承：遵紀(ji)守法(fa)，嚴(yan)於(yu)律(lv)己(ji)，寬仁以(yi)待(dai)，敢於(yu)承擔(dan)的(de)企業精(jing)神(shen)作為(wei)標(biao)準(zhun)，以(yi)過(guo)硬的(de)質量和優(you)良的(de)服務(wu)來(lai)維(wei)護(hu)和拓展市(shi)場，較大(da)限(xian)度的(de)滿足客(ke)戶的(de)需求(qiu)。與客(ke)戶的(de)共(gong)贏，是我(wo)們的(de)發展目標。本生!您信(xin)任的(de)合作(zuo)夥(huo)伴。我(wo)們願(yuan)與您真(zhen)誠合作(zuo)，共(gong)創(chuang)美(mei)好(hao)的(de)未來(lai)。