人活(huo)性氧(yang) (ROS) 酶聯(lian)免(mian)疫(yi)分(fen)析試(shi)劑(ji)盒(he)使(shi)用(yong)說(shuo)明書(shu)

  本試劑(ji)盒僅(jin)供研究使(shi)用(yong)。

檢(jian)測(ce)範圍：0.3ng/mL - 8ng/mL

  規格(ge)：96T  貨號(hao)：BS-9689-A

使(shi)用(yong)目的：

本試劑(ji)盒用(yong)於測(ce)定(ding)人(ren)血(xue)清，血漿及相關(guan)液(ye)體(ti)樣本中活(huo)性氧(yang) (ROS) 含量(liang)。

實驗原(yuan)理(li)

本試劑(ji)盒應用(yong)雙抗(kang)體(ti)夾心(xin)法(fa)測(ce)定(ding)標(biao)本中人(ren)活性(xing)氧(ROS)水平(ping)。用(yong)純(chun)化(hua)的人活(huo)性氧(yang)(ROS) 抗(kang)體(ti)包被微(wei)孔(kong)板，制成(cheng)固(gu)相(xiang)抗(kang)體(ti)，往包被單(dan)抗(kang)的微(wei)孔(kong)中依(yi)次(ci)加(jia)入(ru)活(huo)性(xing)氧(yang) (ROS)，再與(yu) HRP  標(biao)記的活性(xing)氧 (ROS) 抗(kang)體(ti)結合(he)，形(xing)成(cheng)抗(kang)體(ti)-抗(kang)原(yuan)-酶標(biao)抗(kang)體(ti)復合(he)物(wu)，經過洗(xi)滌後(hou)加(jia)底(di)物(wu) TMB 顯色(se)。TMB 在 HRP 酶的催化(hua)下轉化(hua)成(cheng)藍(lan)色，並(bing)在酸(suan)的作用(yong)下轉(zhuan)化(hua)成(cheng)最終的黃色(se)。顏 色的深(shen)淺和(he)樣品(pin)中的活性(xing)氧 (ROS) 呈正(zheng)相(xiang)關(guan)。用(yong)酶標(biao)儀(yi)在 450nm波(bo)長下測(ce)定(ding)吸(xi)光(guang)度 (OD  值)，通(tong)過標(biao)準(zhun)曲線(xian)計(ji)算(suan)樣(yang)品(pin)中人(ren)活性(xing)氧 (ROS) 濃(nong)度(du)。

試劑(ji)盒組(zu)成(cheng)：

標(biao)本要(yao)求(qiu)：

1 ．標(biao)本采集(ji)後(hou)盡早進行(xing)提(ti)取(qu)，提(ti)取(qu)按相(xiang)關(guan)文(wen)獻(xian)進行(xing)，提(ti)取(qu)後(hou)應盡快進行(xing)實(shi)驗。若不能(neng) 馬上進行(xing)試(shi)驗，可(ke)將(jiang)標(biao)本放(fang)於(yu)-20℃保存(cun)，但(dan)應避免(mian)反(fan)復凍(dong)融

2．不能(neng)檢(jian)測(ce)含NaN3 的樣品(pin)，因 NaN3 抑制(zhi)辣根過氧(yang)化(hua)物酶的 (HRP) 活性(xing)。

操(cao)作步(bu)驟：

1.     標(biao)準(zhun)品的稀釋(shi)：本試劑(ji)盒提(ti)供原(yuan)倍標(biao)準(zhun)品壹(yi)支，用(yong)戶可按照(zhao)下列圖表在小(xiao)試(shi)管(guan)中進行(xing)稀(xi) 釋(shi)。

2.     加(jia)樣(yang)：分(fen)別(bie)設(she)空(kong)白(bai)孔(kong) (空(kong)白(bai)對(dui)照(zhao)孔(kong)不加(jia)樣(yang)品(pin)及酶標(biao)試(shi)劑，其(qi)余(yu)各(ge)步(bu)操(cao)作相(xiang)同)、標(biao)準(zhun)孔、 待(dai)測(ce)樣(yang)品(pin)孔(kong)。在酶標(biao)包被板上標(biao)準(zhun)品準確(que)加(jia)樣(yang) 50μl，待(dai)測(ce)樣(yang)品(pin)孔(kong)中先(xian)加(jia)樣(yang)品(pin)稀(xi)釋(shi)液(ye) 40μl，

然後(hou)再加(jia)待(dai)測(ce)樣(yang)品(pin) 10μl  (樣品(pin)最終稀釋(shi)度(du)為(wei) 5 倍) 。加(jia)樣(yang)將(jiang)樣(yang)品加(jia)於(yu)酶(mei)標(biao)板孔底(di)部(bu)，盡 量不(bu)觸及孔壁(bi)，輕輕晃(huang)動混勻(yun)。

3.     溫育(yu)：用(yong)封板膜封板後(hou)置 37℃溫育(yu) 30 分(fen)鐘(zhong)。

4.     配液(ye)：將(jiang) 30 倍濃(nong)縮(suo)洗(xi)滌液(ye)用(yong)蒸餾(liu)水(shui) 30 倍稀(xi)釋(shi)後(hou)備(bei)用(yong)5.     洗滌：小(xiao)心(xin)揭掉封板膜，棄(qi)去(qu)液體(ti)，甩幹(gan)，每孔(kong)加(jia)滿(man)洗(xi)滌液(ye)，靜置(zhi) 30 秒(miao)後(hou)棄去(qu)，如(ru)此(ci) 重(zhong)復

5 次，拍(pai)幹(gan)。

6.     加(jia)酶(mei)：每孔(kong)加(jia)入(ru)酶(mei)標(biao)試(shi)劑 50μl ，空(kong)白(bai)孔(kong)除外(wai)。

7.     溫育(yu)：操(cao)作同(tong) 3。

8.     洗滌：操(cao)作同(tong) 5。

9.     顯色(se)：每孔(kong)先加(jia)入(ru)顯(xian)色(se)劑(ji) A50μl ，再加(jia)入(ru)顯(xian)色(se)劑(ji) B50μl ，輕輕震(zhen)蕩(dang)混(hun)勻，37℃避光(guang)顯色(se)10 分(fen)鐘(zhong).

10.   終止：每孔(kong)加(jia)終(zhong)止液 50μl ，終止反(fan)應 (此時藍(lan)色立(li)轉黃色(se))。

11.   測(ce)定(ding)：以(yi)空(kong)白(bai)孔(kong)調(tiao)零(ling)，450nm 波(bo)長依(yi)序(xu)測(ce)量(liang)各(ge)孔(kong)的吸(xi)光(guang)度 (OD 值) 。  測(ce)定(ding)應在加(jia)終止

液後(hou) 15 分(fen)鐘(zhong)以(yi)內(nei)進行(xing)。

操(cao)作程(cheng)序(xu)總(zong)結(jie)：

計算(suan)：

以標(biao)準(zhun)物的濃(nong)度(du)為(wei)橫(heng)坐(zuo)標(biao)，OD 值為(wei)縱(zong)坐(zuo)標(biao)，在(zai)坐(zuo)標(biao)紙上繪(hui)出標(biao)準(zhun)曲線(xian)，根(gen)據(ju)樣(yang)品(pin)的 OD 值由(you)標(biao)準(zhun)曲線(xian)查(zha)出(chu)相(xiang)應的濃(nong)度(du)；再(zai)乘(cheng)以(yi)稀(xi)釋(shi)倍(bei)數(shu)；或(huo)用(yong)標(biao)準(zhun)物的濃(nong)度(du)與(yu)OD 值計(ji)算出(chu)標(biao) 準曲線(xian)的直線(xian)回(hui)歸(gui)方(fang)程(cheng)式(shi)，將(jiang)樣(yang)品的 OD 值代入(ru)方(fang)程(cheng)式(shi)，計算出(chu)樣(yang)品濃(nong)度(du)，再(zai)乘(cheng)以(yi)稀(xi)釋(shi)倍(bei)數，即(ji)為樣(yang)品的實際(ji)濃(nong)度(du)。

註意事(shi)項

1 ．試劑(ji)盒從冷藏(zang)環(huan)境(jing)中取(qu)出(chu)應在室(shi)溫(wen)平(ping)衡(heng) 15-30 分(fen)鐘(zhong)後(hou)方可(ke)使(shi)用(yong)，酶標(biao)包被板開封後(hou)如(ru)未(wei) 用(yong)完，板條應裝(zhuang)入(ru)密(mi)封袋(dai)中保存(cun)。

    2 ．濃(nong)洗(xi)滌液(ye)可(ke)能(neng)會有(you)結晶(jing)析出(chu)，稀(xi)釋(shi)時可在(zai)水浴中加(jia)溫(wen)助溶，洗(xi)滌時不影(ying)響(xiang)結果(guo)。

3 ．各(ge)步(bu)加(jia)樣(yang)均(jun)應使(shi)用(yong)加(jia)樣(yang)器(qi)，並(bing)經常(chang)校(xiao)對(dui)其(qi)準(zhun)確(que)性(xing)，以避免(mian)試驗誤差。壹(yi)次加(jia)樣(yang)時間最好(hao) 控(kong)制在(zai) 5 分(fen)鐘(zhong)內(nei)，如(ru)標(biao)本數量(liang)多，推(tui)薦(jian)使(shi)用(yong)排槍加(jia)樣(yang)。

4 ．  請每次(ci)測(ce)定(ding)的同時做(zuo)標(biao)準(zhun)曲線(xian)，最好(hao)做(zuo)復孔。如(ru)標(biao)本中待(dai)測(ce)物(wu)質(zhi)含量(liang)過高(gao) (樣(yang)本 OD 值 大於標(biao)準(zhun)品孔第壹(yi)孔的OD 值)，請先(xian)用(yong)樣品(pin)稀釋(shi)液(ye)稀(xi)釋(shi)壹(yi)定倍(bei)數 (n 倍) 後(hou)再測(ce)定(ding)，計(ji) 算時請最後(hou)乘(cheng)以(yi)總(zong)稀(xi)釋(shi)倍(bei)數(shu) ( ×n×5)。

   5 ．  封板膜只(zhi)限(xian)壹(yi)次性(xing)使(shi)用(yong)，以避(bi)免(mian)交叉汙染。

   6 ．底物(wu)請避(bi)光(guang)保存(cun)。

  7 ．嚴(yan)格(ge)按照(zhao)說(shuo)明書(shu)的操(cao)作進行(xing)，試(shi)驗結(jie)果(guo)判定(ding)必須(xu)以(yi)酶標(biao)儀(yi)讀數(shu)為(wei)準(zhun).

  8 ．所有(you)樣品(pin)，洗滌液(ye)和(he)各(ge)種(zhong)廢(fei)棄物(wu)都(dou)應按傳染(ran)物(wu)處(chu)理(li)。

   9 ．本試劑(ji)不同(tong)批號組(zu)分(fen)不(bu)得(de)混(hun)用(yong)。

保存(cun)條件(jian)及有(you)效期(qi)

1 ．試劑(ji)盒保存(cun)：；2-8℃。

2 ．有(you)效期(qi)：6 個月

  人活(huo)性氧(yang) (ROS) 酶聯(lian)免(mian)疫(yi)分(fen)析試(shi)劑(ji)盒(he)本生壹(yi)直視(shi)質(zhi)量控(kong)制為(wei)企(qi)業的生命，追求(qiu)企(qi)業競爭(zheng)力的不斷(duan)提升(sheng)。公(gong)司在經營(ying)中始(shi)終秉(bing)承：遵紀守法(fa)，嚴(yan)於律(lv)己(ji)，寬仁以(yi)待(dai)，敢(gan)於承擔(dan)的企(qi)業精(jing)神(shen)作(zuo)為(wei)標(biao)準(zhun)，以過硬的質(zhi)量和(he)優良(liang)的服務(wu)來(lai)維護和(he)拓展市(shi)場(chang)，較(jiao)大限(xian)度的滿足客(ke)戶的需求(qiu)。與客(ke)戶的共(gong)贏，是(shi)我(wo)們(men)的發(fa)展目標(biao)。本生!您(nin)信任(ren)的合(he)作(zuo)夥伴(ban)。我們(men)願與您(nin)真(zhen)誠合(he)作(zuo)，共(gong)創美好(hao)的未來(lai)。