Elisa實驗(yan)：樣(yang)本收(shou)集及保(bao)存如(ru)操作不當會(hui)影(ying)響(xiang)ELISA實驗(yan)結(jie)果？

　　ELISA(酶(mei)聯(lian)免疫(yi)試驗(yan))以(yi)其(qi)靈(ling)敏度(du)較(jiao)高(gao)、特異(yi)性好的特點已(yi)廣(guang)泛(fan)用於科(ke)研實驗(yan)及臨床，越來越(yue)多(duo)科(ke)研單(dan)位(wei)選(xuan)擇(ze)用(yong)ELISA實驗(yan)方(fang)法(fa)完成(cheng)研(yan)究(jiu)課題。優質的(de)試(shi)劑、好的儀(yi)器(qi)和(he)正確(que)的(de)操作是保證(zheng)ELISA試劑(ji)盒檢(jian)測(ce)結(jie)果準確(que)可(ke)靠(kao)的(de)必要條件，但樣(yang)本的收(shou)集及保(bao)存操作不當也會(hui)影(ying)響(xiang)ELISA實驗(yan)結(jie)果。樣(yang)本的收(shou)集跟保(bao)存聽(ting)上去(qu)貌(mao)似很簡單，但(dan)不乏有(you)許多(duo)科(ke)研工(gong)作者(zhe)因(yin)為(wei)樣(yang)本的收(shou)集跟保(bao)存沒做好而影(ying)響(xiang)實驗(yan)結(jie)果。BUNSEN本生技(ji)術小編(bian)詳解(jie)如(ru)下(xia)：

　　下面(mian)針對(dui)樣(yang)本收(shou)集及保(bao)存BUNSEN本生提幾點建(jian)議(yi)：

　　1.嚴重溶血，以(yi)HRP為(wei)標記的ELISA測定中(zhong)，殘(can)留在孔內(nei)的(de)血紅蛋白具(ju)有(you)過(guo)氧化(hua)物(wu)酶(mei)樣(yang)活性(xing)，催(cui)化(hua)底(di)物(wu)顯色造成(cheng)假(jia)陽(yang)性;

　　2.混(hun)有(you)紅細胞(bao)的血清易沈(chen)澱(dian)或(huo)附著在聚(ju)乙(yi)烯(xi)孔(kong)內(nei)不易洗(xi)凈(jing);如(ru)有(you)細菌汙染(ran)，菌體中(zhong)可(ke)能(neng)含(han)有(you)內(nei)源(yuan)性(xing)HRP，也會(hui)產生假(jia)陽(yang)性反(fan)應：

　　3.標本凝固不全，有(you)時為了爭取時間快(kuai)速(su)檢(jian)測(ce)，常(chang)在血液還(hai)未開(kai)始(shi)凝固時即強行離心(xin)分離血清，使(shi)血清中(zhong)仍殘(can)留部分纖(xian)維(wei)蛋(dan)白原(yuan)，在(zai)ELISA測(ce)定(ding)過(guo)程(cheng)中(zhong)可(ke)以(yi)形(xing)成(cheng)肉(rou)眼可(ke)見的(de)纖(xian)維(wei)蛋(dan)白塊，易造成(cheng)假(jia)陽(yang)性結(jie)果;

　　4.采血試管(guan)洗滌(di)不幹凈(jing)、反(fan)復(fu)使(shi)用(yong)易交(jiao)叉汙染(ran)：塑料(liao)試管(guan)能吸附(fu)抗原物(wu)質(zhi)，樣(yang)本久置(zhi)在塑料(liao)管(guan)內(nei)會(hui)使(shi)樣(yang)本內(nei)抗(kang)原(yuan)含(han)量(liang)下降(jiang)造成(cheng)假(jia)陰性。

　　血清標本宜在(zai)新鮮時檢測，嚴重溶血標本禁用(yong)。壹(yi)般說來，在(zai)5天內(nei)測(ce)定(ding)的(de)血清標本可(ke)放(fang)置(zhi)於4℃，標本在冰(bing)箱中(zhong)保存時間過(guo)長導(dao)致血清IgG聚(ju)合(he)，使(shi)間接(jie)法的(de)試(shi)劑(ji)本底(di)加深。超(chao)過(guo)壹(yi)周(zhou)測(ce)定(ding)的需-20℃保(bao)存。凍結(jie)血清融解後，蛋白質(zhi)局部(bu)濃縮，分布(bu)不均，應(ying)充(chong)分混勻(yun)並避免產生氣(qi)泡。混濁或(huo)有(you)沈(chen)澱(dian)的血清標本應先離心(xin)或(huo)過(guo)濾，澄(cheng)清後再(zai)檢測(ce)。反復(fu)凍融會(hui)使(shi)抗(kang)體效價(jia)跌(die)落，所(suo)以(yi)測(ce)抗(kang)體的血清標本如(ru)需(xu)保存作多次(ci)檢測(ce)，宜(yi)少量分裝冰(bing)存;使(shi)用(yong)壹(yi)次(ci)性玻(bo)璃(li)試(shi)管(guan)或(huo)真(zhen)空(kong)管(guan)采血管(guan);並使(shi)用(yong)非抗(kang)凝標本，肝(gan)素抗凝血漿(jiang)會(hui)增(zeng)加OD值(zhi)，可(ke)能(neng)與(yu)高濃度肝(gan)素具有(you)強大(da)的負電荷(he)能吸(xi)附酶(mei)標記物不易洗(xi)脫(tuo)有(you)關(guan);EDTA、酶(mei)抑制劑(如(ru)NaN3)可(ke)抑制ELISA系統中(zhong)辣根(gen)過(guo)氧化(hua)物(wu)酶(mei)活性(xing);血液標本采集後必(bi)須(xu)使(shi)其(qi)充(chong)分(fen)凝固後再(zai)分離血清，或(huo)標本采集時用帶分(fen)離膠(jiao)的(de)采血管(guan)或(huo)於采血管(guan)中(zhong)加入(ru)適(shi)當的(de)促凝劑。

　　被(bei)檢血清或(huo)血漿(jiang)標本，可(ke)用(yong)含(han)保護(hu)性封阻劑(吐(tu)溫(wen)-20)或(huo)稱(cheng)濕潤(run)劑(ji)的緩(huan)沖液來稀(xi)釋。也可(ke)加入(ru)壹(yi)些(xie)蛋(dan)白質(zhi)，如(ru)1%牛血清白蛋(dan)白等(deng)來稀(xi)釋。然(ran)後再(zai)加到已(yi)經(jing)用抗原或(huo)抗體包被(bei)的固相載體中(zhong)進(jin)行孵育(yu)。此種被(bei)試標本可(ke)作壹(yi)系(xi)列(lie)稀(xi)釋度測定，也可(ke)用(yong)壹(yi)個稀釋度測定。對(dui)於作某(mou)壹(yi)個傳(chuan)染(ran)病的診(zhen)斷來說(shuo)，最好先用壹(yi)系(xi)列(lie)稀(xi)釋度作壹(yi)批(pi)標本測定(ding)，求出(chu)對(dui)診(zhen)斷(duan)有(you)意(yi)義(yi)的壹(yi)個稀釋度(即測定(ding)劑(ji)量(liang)反應(ying)曲線)，然(ran)後用(yong)壹(yi)個稀釋測定即可(ke)。最適(shi)稀釋度和(he)孵育(yu)時間均(jun)需從(cong)實踐中(zhong)摸索出(chu)來，對(dui)壹(yi)般病原微(wei)生物(wu)所(suo)引(yin)起(qi)的(de)傳(chuan)染(ran)病的血清學診斷(duan)，以(yi)1：200稀(xi)釋度測定比較(jiao)適(shi)當，而(er)試驗(yan)標本的(即(ji)含抗(kang)體)作用時間壹(yi)般為室溫(wen)或(huo)37℃ 1-2小時。但現(xian)在(zai)對(dui)有(you)些(xie)標本(如(ru)流腦(nao)抗(kang)原(yuan))測定(ding)時，僅用37℃ 5分(fen)鐘(zhong)。對(dui)單(dan)克(ke)隆(long)抗體檢測(ce)也可(ke)縮(suo)短作用時間。

　　ELISA(酶(mei)聯(lian)免疫(yi)試驗(yan)) 本生壹(yi)直(zhi)視(shi)質(zhi)量控制為(wei)企(qi)業的(de)生命(ming)，追求(qiu)企(qi)業競爭力的不斷提升。公司在(zai)經(jing)營中(zhong)始終(zhong)秉(bing)承：遵紀守(shou)法(fa)，嚴於律(lv)己(ji)，寬仁(ren)以(yi)待(dai)，敢(gan)於承擔的企(qi)業精(jing)神作為標準，以(yi)過(guo)硬的(de)質(zhi)量(liang)和(he)優良的服(fu)務(wu)來維(wei)護(hu)和(he)拓展市場，較(jiao)大(da)限度的(de)滿足客(ke)戶(hu)的需(xu)求(qiu)。與(yu)客(ke)戶(hu)的共(gong)贏(ying)，是我們的(de)發(fa)展目(mu)標。本生!您信(xin)任(ren)的合(he)作夥(huo)伴。我們願(yuan)與您真(zhen)誠合(he)作，共創(chuang)美(mei)好的未來。