elisa試(shi)劑(ji)盒(he)的功(gong)能(neng)及(ji)原理

ELISA檢測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)應(ying)用定(ding)性(xing)夾(jia)心(xin)免(mian)疫檢(jian)測(ce)技術(shu)，用合(he)成(cheng)的HEV多肽抗(kang)原包(bao)被(bei)微孔(kong)板(ban)板(ban)條(tiao)，這(zhe)些(xie)多肽是(shi)中國(guo)型HEV毒(du)株(zhu)核(he)心(xin)氨基(ji)酸(suan)序列(lie)中(zhong)抗(kang)原(yuan)性(xing)強的(de)肽(tai)段，分(fen)別(bie)來自於該(gai)毒(du)株(zhu)的(de)開(kai)放閱讀框(kuang)2和(he)開(kai)放閱讀框(kuang)3。將樣(yang)品(pin)或標準品(pin)加(jia)入孔(kong)中(zhong)並(bing)孵育，如果(guo)其(qi)中存在(zai)HEV IgM抗體(ti)，這(zhe)些(xie)抗(kang)體就會(hui)與HEV 的多肽抗(kang)原結合(he)，並(bing)固定(ding)在(zai)上面，洗(xi)板(ban)除去(qu)其(qi)它非(fei)特異(yi)性抗(kang)體(ti)和(he)樣(yang)品(pin)中(zhong)的(de)其(qi)它成(cheng)份(fen)。然後(hou)加(jia)入羊(yang)抗(kang)人(ren)IgM-HRP（辣根過氧(yang)化物(wu)酶）酶(mei)結合(he)物(wu)，經第二(er)次(ci)孵育後(hou)，酶(mei)結合(he)物(wu)就會(hui)與第1次(ci)孵育結合(he)上(shang)的HEV IgM抗體相結合(he)，洗(xi)板(ban)除去(qu)未(wei)結合(he)的(de)酶結合(he)物(wu)，加(jia)入TMB底物(wu)溶液(ye)，在(zai)第三(san)次(ci)孵育時會(hui)發(fa)生酶-底物(wu)反應(ying)，只有(you)那些(xie)含(han)有(you)HEV IgM抗(kang)體和(he)酶(mei)結合(he)物(wu)所形(xing)成的復合(he)物(wu)的孔(kong)才(cai)會(hui)發(fa)生顏色(se)變(bian)化，加(jia)入硫(liu)酸(suan)溶液(ye)終(zhong)止(zhi)酶(mei)和(he)底物(wu)間的反(fan)應(ying)，並(bing)在(zai)波長: 450nm處測量(liang)O.D.值,按(an)照本HEV IgM抗(kang)體elisa試(shi)劑(ji)盒(he)的測(ce)試(shi)標準, O.D.值大於(yu)或等於Cut-Off值的(de)樣(yang)品(pin)被(bei)認(ren)為(wei)是(shi)初試(shi)陽(yang)性(xing)。

免(mian)疫測(ce)定(ding)技(ji)術(shu)的(de)基(ji)礎在(zai)於抗(kang)原抗(kang)體之(zhi)間的特異(yi)結合(he)反(fan)應(ying)，所以(yi)任何(he)優質的診斷試(shi)劑(ji)離(li)不(bu)開優質的原料(liao)，如(ru)抗(kang)原抗(kang)體，酶(mei)等。以(yi)前(qian)用於(yu)免(mian)疫測(ce)定(ding)的(de)抗(kang)原(yuan)通(tong)常為(wei)各種純(chun)化抗原，而抗(kang)體(ti)則(ze)為(wei)純(chun)化抗原免(mian)疫動物(wu)後(hou)獲(huo)得(de)的(de)多克隆(long)抗體(ti)和(he)使(shi)用雜(za)交(jiao)瘤技(ji)術(shu)得(de)到(dao)的(de)單(dan)克隆抗體，而抗原(yuan)或抗體(ti)的(de)標記物(wu)如酶(mei)標結合(he)物(wu)則通(tong)過各種化學合(he)成(cheng)方法(fa)制備(bei)。近年來，隨著分(fen)子生物(wu)學的(de)發(fa)展，使(shi)用基(ji)因工程(cheng)方法(fa)制備(bei)各種特殊(shu)的抗(kang)原或抗體(ti)及(ji)其(qi)酶結合(he)物(wu)等免(mian)疫測(ce)定(ding)試(shi)劑(ji)幾(ji)成(cheng)為(wei)現(xian)實的(de)新(xin)壹代試(shi)劑(ji)，各種新(xin)型使用的(de)測定(ding)方法(fa)也(ye)不(bu)斷出(chu)現。

HBsAg試(shi)劑(ji)特點（檢(jian)測(ce)模(mo)式(shi)：臨(lin)床(chuang)抗(kang)體夾心法(fa)）：包(bao)被(bei)抗(kang)體(ti)為(wei)山(shan)羊多抗。多抗具有(you)高(gao)親和(he)性(xing)和(he)對抗(kang)原(yuan)各種表位(wei)的反應(ying)性(xing)。酶表抗(kang)體為(wei)與HBsAg有(you)不(bu)同結合(he)位(wei)點的(de)鼠復合(he)單(dan)位(wei)，可測得(de)HBsAg變(bian)異(yi)樣(yang)品(pin)，提高檢測的特異(yi)性（99.98%）提高檢測的靈(ling)敏度，應(ying)用Parl Ehrich 學(xue)說(shuo)（PEI）HBsAg標準品(pin)，對ad標準品(pin)的(de)靈(ling)敏度為(wei)0.05ng/ml對ay標準品(pin)靈(ling)敏度為(wei)0.025ng/ml