由於制(zhi)備(bei)單(dan)克隆(long)抗體的實驗(yan)周(zhou)期長(chang)，環(huan)節多(duo)，所以影響因素(su)就比較多(duo)，稍不註(zhu)意(yi)就會造成(cheng)失敗(bai)。

其(qi)主(zhu)要失(shi)敗(bai)原(yuan)因和(he)影響因素(su)有(you)：

1、汙染

包括(kuo)細菌、黴菌(jun)和(he)支(zhi)原(yuan)體的汙染。這是(shi)單(dan)克隆(long)抗體制(zhi)備(bei)工(gong)作(zuo)中較(jiao)辣手(shou)的問(wen)題(ti)。壹旦發現有(you)黴菌(jun)汙染就應及早將(jiang)汙染板棄(qi)之(zhi)，以免(mian)汙染整個培養環(huan)境(jing)。支(zhi)原(yuan)體的汙染主(zhu)要來(lai)源於牛(niu)血(xue)清，此(ci)外，其(qi)它(ta)添(tian)加(jia)劑(ji)、實驗室工作人員(yuan)及環境(jing)也(ye)可(ke)能造成(cheng)支(zhi)原(yuan)體汙染。在(zai)有(you)條件的實(shi)驗(yan)室，要對(dui)每(mei)壹批(pi)小牛血(xue)清(qing)和(he)長(chang)期傳(chuan)代培(pei)養的(de)細胞系(xi)進行(xing)支(zhi)原(yuan)體的檢(jian)查，查出(chu)汙染源應及時采取(qu)措施(shi)處(chu)理。對(dui)於汙染的雜(za)交瘤細胞可(ke)以(yi)采取(qu)生物學的過(guo)濾(lv)方(fang)法(fa)，將(jiang)汙染的雜(za)交瘤細胞註(zhu)射於BALB/c小(xiao)鼠(shu)的(de)腹腔，待長(chang)出(chu)腹(fu)水或實(shi)體(ti)瘤時，取(qu)出(chu)分(fen)離(li)雜(za)交瘤細胞，壹(yi)般可(ke)除(chu)去(qu)支(zhi)原(yuan)體汙染。

2、融(rong)合(he)後雜(za)交瘤不生(sheng)長(chang)

在(zai)保(bao)證(zheng)融(rong)合(he)技(ji)術(shu)沒有(you)問題(ti)的前提下(xia)主(zhu)要考(kao)慮下(xia)列(lie)因素(su)：

(1)牛血(xue)清的(de)質(zhi)量太差(cha)，用前沒有(you)進行(xing)嚴格(ge)篩選;

(2)HAT有(you)問題(ti)，主(zhu)要是(shi)A含量過(guo)高或HT含量不足(zu);

(3)骨髓(sui)瘤細胞汙染了(le)支(zhi)原(yuan)體;

(4)EG有(you)毒(du)性或作(zuo)用時間(jian)過(guo)長(chang)。

3、雜(za)交瘤細胞不分(fen)泌抗體或停(ting)止(zhi)分(fen)泌抗體

融(rong)合(he)後有(you)細胞生(sheng)長(chang)，但(dan)無抗體產生，可能是(shi)HAT中(zhong)A失(shi)效(xiao)或骨髓(sui)瘤細胞發生突(tu)變(bian)，變成(cheng)A抵抗細胞所致。有(you)可能是(shi)免(mian)疫原(yuan)抗原(yuan)性弱(ruo)，免(mian)疫效(xiao)果(guo)不好。對(dui)於原(yuan)分(fen)泌抗體的雜(za)交瘤細胞變(bian)為(wei)陰(yin)性，可(ke)能是(shi)細胞支(zhi)原(yuan)體汙染，或非抗體分(fen)泌細胞克(ke)隆(long)競爭性生(sheng)長(chang)，從(cong)而(er)抑(yi)制(zhi)了(le)抗體分(fen)泌細胞的(de)生(sheng)長(chang)。也(ye)可(ke)能發生染色體(ti)丟失(shi)。之(zhi)前提出(chu)的(de)“三要”“三(san)不要”，可(ke)能是(shi)防(fang)止抗體停(ting)止(zhi)分(fen)泌的有(you)效措施(shi)。

三要：

要大量保(bao)持(chi)和(he)補充(chong)液氮凍(dong)存的細胞原(yuan)管。

要應用倒置(zhi)顯(xian)微鏡(jing)經(jing)常(chang)檢(jian)查細胞的(de)生(sheng)長(chang)狀(zhuang)況。

要定期進(jin)行(xing)再克隆(long)。

三不要：

不要讓(rang)細胞“過(guo)度生長(chang)”。因為(wei)非分(fen)泌的雜(za)交瘤細胞將(jiang)成(cheng)為(wei)優(you)勢(shi)，壓倒(dao)分(fen)泌抗體的雜(za)交瘤細胞。

不要讓(rang)培養物不加(jia)檢(jian)查地任其(qi)連(lian)續培養幾(ji)周(zhou)或幾(ji)個月。

不要不經(jing)克(ke)隆(long)化(hua)而(er)使(shi)雜(za)交瘤在(zai)機(ji)體內以腫瘤生長(chang)形(xing)式連(lian)續傳好幾(ji)代。

4、雜(za)交瘤細胞難(nan)以克(ke)隆(long)化(hua)

可(ke)能與(yu)小(xiao)牛(niu)血(xue)清質(zhi)量、雜(za)交瘤細胞的(de)活(huo)性狀(zhuang)態(tai)有(you)關，或由於細胞有(you)支(zhi)原(yuan)體汙染，使(shi)克隆(long)化(hua)難(nan)以成(cheng)功。若是(shi)融(rong)合(he)後的(de)早期克(ke)隆(long)化(hua)，應在(zai)培養液加(jia)HT。