elisa實(shi)驗：直(zhi)接(jie)法(fa)、間(jian)接(jie)法(fa)、夾心法 和(he) 競爭法四(si)種(zhong)方法比(bi)較詳解(jie)

　　ELISA(酶聯免(mian)疫吸附(fu)測定)是(shi)壹(yi)種(zhong)廣泛應(ying)用於生(sheng)物(wu)學、醫(yi)學(xue)和(he)食(shi)品科(ke)學等(deng)領(ling)域(yu)的(de)高(gao)靈(ling)敏(min)度、高(gao)特(te)異性的免(mian)疫分(fen)析(xi)技術(shu)。其(qi)核(he)心原理是(shi)利(li)用抗原與抗體之(zhi)間(jian)特(te)異性結合的(de)特(te)性，並(bing)通(tong)過酶標記(ji)物與底(di)物反應(ying)產(chan)生可(ke)檢(jian)測信號(hao)(通(tong)常(chang)是(shi)顏(yan)色(se)變(bian)化(hua))來(lai)對目標分子進行定(ding)性或定(ding)量(liang)分(fen)析(xi)。

　　根據(ju)實(shi)驗步(bu)驟(zhou)和(he)原理(li)的(de)不同(tong)，主要(yao)分為(wei)四(si)種(zhong)類(lei)型(xing)：直(zhi)接(jie)法(fa)、間(jian)接(jie)法(fa)、夾心法 和(he) 競爭法。其(qi)中(zhong)夾心法(fa)又可(ke)分(fen)為(wei)直(zhi)接(jie)夾(jia)心法和(he)間(jian)接(jie)夾(jia)心法。

　　下(xia)面(mian)我(wo)們將對(dui)這(zhe)四(si)種(zhong)方法進(jin)行詳(xiang)細(xi)的(de)比較。

　　壹、 直(zhi)接(jie)ELISA

　　1. 原(yuan)理簡述：

　　將(jiang)待(dai)測抗原直(zhi)接(jie)吸附(fu)(包被(bei))在固相(xiang)載(zai)體(如酶標板(ban))上。

　　加入酶標記(ji)的檢(jian)測抗體，該抗體直(zhi)接(jie)與抗原結合。

　　洗(xi)滌去(qu)除未結(jie)合的(de)酶標抗體。

　　加入酶底物(wu)，產(chan)生信號(hao)進行檢(jian)測。

　　2. 流(liu)程圖解(jie)：

　　包(bao)被(bei)抗原 → 加入酶標壹抗 → 洗(xi)滌 → 加入底物(wu) → 檢測信號(hao)

　　3. 優點：

　　步(bu)驟(zhou)簡單(dan)，耗(hao)時(shi)短(duan)： 只(zhi)需(xu)壹(yi)種(zhong)酶標抗體，操作(zuo)步(bu)驟(zhou)少，整(zheng)個(ge)流(liu)程速(su)度快(kuai)。

　　交叉反應(ying)性低： 避免(mian)了(le)二抗可(ke)能(neng)引(yin)起(qi)的(de)非特(te)異性交叉反應(ying)。

　　4. 缺(que)點：

　　靈(ling)敏(min)度較低： 信號(hao)沒(mei)有經過放(fang)大步驟(zhou)。

　　靈(ling)活(huo)性差： 每種(zhong)待(dai)測抗原都需(xu)要(yao)特(te)定的(de)酶標壹抗，抗體標記(ji)過程繁瑣且(qie)成(cheng)本(ben)高(gao)。

　　信號(hao)強度弱： 每個(ge)抗原分子上只結合壹(yi)個(ge)酶分子。

　　5. 主要(yao)應用：

　　適用於快(kuai)速(su)篩(shai)查、對抗原進行初(chu)步(bu)定(ding)性分析(xi)，或當(dang)檢(jian)測抗體有限且(qie)易(yi)於(yu)標記(ji)時。

　　二、 間(jian)接(jie)ELISA

　　1. 原(yuan)理簡述：

　　將(jiang)抗原包被(bei)在固相(xiang)載(zai)體上。

　　加入未標記(ji)的壹(yi)抗，與抗原結合。

　　洗(xi)滌後(hou)，加入酶標記(ji)的二抗，該二抗能與壹(yi)抗的Fc段特(te)異性結合。

　　洗(xi)滌去(qu)除未結(jie)合的(de)酶標二抗。

　　加入底物(wu)，產生(sheng)信(xin)號(hao)進行檢(jian)測。

　　2. 流(liu)程圖解(jie)：

　　包(bao)被(bei)抗原 → 加入壹抗 → 洗(xi)滌 → 加入酶標二抗 → 洗(xi)滌 → 加入底物(wu) → 檢測信號(hao)

　　3. 優點：

　　靈(ling)敏(min)度高(gao)： 壹個(ge)壹(yi)抗分子可(ke)以(yi)結(jie)合多(duo)個(ge)酶標二抗分子，實(shi)現了(le)信號(hao)放(fang)大。

　　靈(ling)活(huo)性好(hao)，成(cheng)本(ben)低： 壹種(zhong)酶標二抗可(ke)以(yi)用於多(duo)種(zhong)不同(tong)的壹(yi)抗(只要(yao)壹抗來(lai)自同(tong)壹種(zhong)屬)，無需(xu)對(dui)每種(zhong)壹(yi)抗進行單(dan)獨(du)的酶標記(ji)。

　　信號(hao)強： 信號(hao)放(fang)大效應使(shi)得檢(jian)測下(xia)限更(geng)低。

　　4. 缺點：

　　步(bu)驟(zhou)更(geng)多(duo)，耗(hao)時(shi)較長。

　　潛(qian)在(zai)交叉反應(ying)風(feng)險： 二抗可(ke)能(neng)與包(bao)被(bei)的抗原或其(qi)他(ta)成分發(fa)生非特(te)異性結合。

　　5. 主要(yao)應用：

　　這(zhe)是(shi)常(chang)用的ELISA類(lei)型(xing)之(zhi)壹(yi)，特(te)別(bie)適用於抗體檢測，如血(xue)清(qing)中(zhong)特(te)定抗體(如自身抗體、病毒抗體)的滴(di)度測定。

　　三(san)、 夾(jia)心(xin)ELISA

　　夾(jia)心(xin)ELISA是(shi)檢(jian)測抗原常(chang)用、靈(ling)敏(min)的(de)方法之(zhi)壹(yi)。它需(xu)要(yao)兩(liang)個(ge)抗體，分別(bie)識別(bie)目標抗原的不(bu)同(tong)表位。

　　3.1 直(zhi)接(jie)夾(jia)心法

　　原理(li)簡(jian)述(shu)：

　　將捕(bu)獲(huo)抗體包被(bei)在固相(xiang)載(zai)體上。

　　加入樣(yang)本(ben)，其(qi)中的(de)抗原與捕(bu)獲(huo)抗體結合。

　　洗(xi)滌後(hou)，加入酶標記(ji)的檢(jian)測抗體，該抗體與抗原的另(ling)壹(yi)個(ge)表位結合，形(xing)成(cheng)“捕(bu)獲(huo)抗體-抗原-檢測抗體"三(san)明(ming)治(zhi)結(jie)構(gou)。

　　洗(xi)滌後(hou)，加入底物(wu)進行檢(jian)測。

　　優點： 靈(ling)敏(min)度高(gao)，特(te)異性強(使用兩(liang)個(ge)抗體)。

　　缺點： 檢(jian)測抗體需(xu)要(yao)自己進行酶標記(ji)。

　　3.2 間(jian)接(jie)夾(jia)心法(更(geng)常(chang)用)

　　原理(li)簡(jian)述：

　　前(qian)兩(liang)步(bu)與直(zhi)接(jie)夾(jia)心法相(xiang)同(tong)。

　　洗(xi)滌後(hou)，加入未標記(ji)的檢(jian)測抗體。

　　再次(ci)洗(xi)滌，加入酶標二抗(該二抗針對檢(jian)測抗體的種(zhong)屬(shu))。

　　洗(xi)滌後(hou)，加入底物(wu)檢測。

　　優點： 結(jie)合了(le)夾心(xin)法(fa)的(de)高(gao)特(te)異性/靈(ling)敏(min)度和(he)間(jian)接(jie)法(fa)的信號(hao)放(fang)大與靈(ling)活(huo)性。

　　缺點： 步(bu)驟(zhou)更(geng)多(duo)，耗(hao)時(shi)最長。

　　2. 流(liu)程圖解(jie)(以(yi)間(jian)接(jie)夾(jia)心法為(wei)例)：

　　包被(bei)捕(bu)獲(huo)抗體 → 加入樣(yang)本(ben)(含抗原) → 洗(xi)滌 → 加入檢測抗體 → 洗(xi)滌 → 加入酶標二抗 → 洗(xi)滌 → 加入底物(wu) → 檢測信號(hao)

　　3. 優點：

　　高(gao)的靈(ling)敏(min)度和(he)特(te)異性： 雙(shuang)抗體識別(bie)確保(bao)了(le)高(gao)特(te)異性，且非(fei)常(chang)適(shi)合於(yu)復(fu)雜(za)樣(yang)本(ben)(如血(xue)清(qing)、細(xi)胞(bao)培養(yang)上清)中低濃(nong)度抗原的檢(jian)測。

　　適用範圍廣： 特(te)別(bie)適合檢(jian)測具有多個表位的大分子蛋白(bai)質。

　　4. 缺(que)點：

　　開(kai)發要(yao)求(qiu)高(gao)： 需(xu)要(yao)兩(liang)個(ge)能同(tong)時結(jie)合抗原且互(hu)不(bu)幹擾(rao)的(de)抗體(匹(pi)配(pei)對)。

　　步(bu)驟(zhou)最繁瑣，耗(hao)時(shi)最長(尤(you)其(qi)是(shi)間(jian)接(jie)法(fa))。

　　5. 主要(yao)應用：

　　檢測細(xi)胞(bao)因子、激素、腫瘤(liu)標誌(zhi)物(wu)、病毒抗原等各(ge)種(zhong)蛋(dan)白(bai)質生(sheng)物標誌(zhi)物(wu)。這(zhe)是(shi)目(mu)前(qian)科(ke)研和(he)臨床診(zhen)斷中最主流(liu)的ELISA形(xing)式(shi)。

　　四(si)、 競(jing)爭ELISA

　　1. 原理(li)簡(jian)述：

　　這(zhe)種方法適(shi)用於檢(jian)測小分(fen)子抗原(半(ban)抗原)，因為(wei)小分(fen)子通(tong)常(chang)無法同(tong)時結(jie)合兩(liang)個(ge)抗體。

　　其原(yuan)理(li)是(shi)讓(rang)樣(yang)本(ben)中(zhong)的抗原與標記(ji)的參考(kao)抗原競爭有限數(shu)量(liang)的(de)抗體結合位點。

　　有兩(liang)種(zhong)常(chang)見(jian)模(mo)式(shi)：

　　模(mo)式(shi)壹(競(jing)爭結合包(bao)被(bei)抗原)：

　　將已(yi)知(zhi)量的(de)抗原包被(bei)在板(ban)上。

　　同(tong)時加入樣(yang)本(ben)(含未知(zhi)抗原)和(he)壹定(ding)量(liang)的酶標抗體。

　　樣(yang)本(ben)中(zhong)的遊離(li)抗原和(he)包被(bei)抗原競爭結合酶標抗體。

　　洗(xi)滌後(hou)，結合的(de)酶標抗體越少，說明(ming)樣(yang)本(ben)中(zhong)抗原濃(nong)度越高(gao)。信號(hao)強度與樣(yang)本(ben)中(zhong)抗原濃(nong)度成反(fan)比。

　　模(mo)式(shi)二(競爭結合捕(bu)獲(huo)抗體)：

　　將捕(bu)獲(huo)抗體包被(bei)在板(ban)上。

　　同(tong)時加入樣(yang)本(ben)(含未知(zhi)抗原)和(he)壹定(ding)量(liang)的酶標抗原。

　　樣(yang)本(ben)中(zhong)的遊離(li)抗原和(he)酶標抗原競爭結合捕(bu)獲(huo)抗體。

　　洗(xi)滌後(hou)，結合的(de)酶標抗原越少，說明(ming)樣(yang)本(ben)中(zhong)抗原濃(nong)度越高(gao)。信號(hao)強度與樣(yang)本(ben)中(zhong)抗原濃(nong)度成反(fan)比。

　　2. 流(liu)程圖解(jie)(以(yi)模(mo)式(shi)壹為(wei)例)：

　　包被(bei)已知(zhi)抗原 → 同(tong)時加入樣(yang)本(ben)和(he)酶標抗體 → 洗(xi)滌 → 加入底物(wu) → 檢測信號(hao)(信號(hao)弱=樣(yang)本(ben)抗原濃(nong)度高(gao))

　　3. 優點：

　　適(shi)用於小分(fen)子檢測： 是(shi)檢(jian)測小分(fen)子(如藥(yao)物、激素、毒素)的可(ke)行ELISA方法。

　　抗幹擾(rao)能(neng)力強： 對樣(yang)本(ben)基質(zhi)的(de)要(yao)求(qiu)相(xiang)對(dui)較低。

　　操作(zuo)相(xiang)對(dui)簡(jian)單(dan)。

　　4. 缺(que)點：

　　靈(ling)敏(min)度相(xiang)對(dui)夾(jia)心(xin)法(fa)較低。

　　數(shu)據(ju)解釋需(xu)註意(yi)： 信(xin)號(hao)與濃(nong)度呈反(fan)比，容易(yi)混(hun)淆。

　　動態(tai)範圍可(ke)能(neng)較窄(zhai)。

　　5. 主要(yao)應用：

　　檢測農藥(yao)殘(can)留、獸(shou)藥殘(can)留、黃曲(qu)黴毒素等小分(fen)子化(hua)合物(wu)，以(yi)及(ji)壹(yi)些(xie)激素(如T3， T4)和(he)藥物(wu)。

　　總(zong)結比(bi)較表

　　特(te)性直(zhi)接(jie)法(fa)間(jian)接(jie)法(fa)夾心法競(jing)爭法

　　原(yuan)理(li)酶標壹抗直(zhi)接(jie)結(jie)合包(bao)被(bei)抗原壹抗結合抗原，酶標二抗結合壹(yi)抗兩(liang)個(ge)抗體夾住(zhu)抗原樣(yang)本(ben)抗原與標記(ji)抗原競爭抗體

　　靈(ling)敏(min)度低高(gao)(信號(hao)放(fang)大)最高(gao)中-高(gao)

　　特(te)異性高(gao)中最高(gao)(雙(shuang)位點識別(bie))高(gao)

　　操作(zuo)步(bu)驟(zhou)簡單(dan)、快(kuai)簡(jian)單(dan)最復(fu)雜(za)、最慢(man)簡(jian)單

　　靈(ling)活(huo)性低(需(xu)標記(ji)每種(zhong)壹(yi)抗)高(gao)(通(tong)用二抗)中-高(gao)低

　　成本(ben)高(gao)(抗體標記(ji)成本(ben))低中中(zhong)

　　主要(yao)應用快(kuai)速(su)抗原篩查檢測抗體(如血(xue)清(qing)滴(di)度)檢測大分子抗原(如細(xi)胞(bao)因子)檢測小分(fen)子抗原/半(ban)抗原

　　信號(hao)與濃(nong)度關(guan)系正相(xiang)關(guan)正相(xiang)關(guan)正相(xiang)關(guan)負(fu)相(xiang)關(guan)

　　如何(he)選(xuan)擇?

　　要(yao)檢測什麽(me)?

　　檢測大分子蛋白(bai)質抗原(如細(xi)胞(bao)因子)：選(xuan)夾心ELISA。

　　檢(jian)測血(xue)清(qing)中(zhong)的(de)抗體(如抗體滴度)：選(xuan)間(jian)接(jie)ELISA。

　　檢(jian)測小分(fen)子化(hua)合物(wu)(如藥(yao)物、毒素)：必(bi)須(xu)使(shi)用競爭ELISA。

　　快(kuai)速(su)初(chu)步(bu)檢(jian)測已知(zhi)抗原：可(ke)考(kao)慮(lv)直(zhi)接(jie)ELISA。

　　對(dui)靈(ling)敏(min)度和(he)特(te)異性的要(yao)求(qiu)?

　　要(yao)求(qiu)最高(gao)：選(xuan)夾心ELISA。

　　要(yao)求(qiu)壹(yi)般：間(jian)接(jie)ELISA或(huo)競爭ELISA通(tong)常(chang)能(neng)滿(man)足。

　　時間(jian)和(he)預算(suan)?

　　時(shi)間(jian)緊(jin)，且(qie)不(bu)追求(qiu)最高(gao)靈(ling)敏(min)度：直(zhi)接(jie)ELISA。

　　預算(suan)有限，希(xi)望(wang)靈(ling)活(huo)：間(jian)接(jie)ELISA(可(ke)共(gong)用二抗)。

　　註：以(yi)上僅供參考(kao)，不(bu)作為(wei)實(shi)際(ji)數(shu)據(ju)，實(shi)驗需(xu)嚴(yan)格(ge)遵循(xun)說(shuo)明(ming)或(huo)咨詢技術(shu)老(lao)師(shi)。

　　天(tian)津本(ben)生(sheng)壹直(zhi)視質量(liang)控制(zhi)為(wei)企(qi)業(ye)的生(sheng)命(ming)，追求(qiu)企(qi)業(ye)競爭力的(de)不(bu)斷(duan)提(ti)升。公司在經營(ying)中(zhong)始(shi)終(zhong)秉(bing)承(cheng)：遵紀守法(fa)，嚴(yan)於律(lv)己(ji)，寬(kuan)仁以(yi)待(dai)，敢(gan)於(yu)承(cheng)擔(dan)的(de)企(qi)業(ye)精神作為(wei)標準(zhun)，以(yi)過硬(ying)的(de)質(zhi)量(liang)和(he)優良(liang)的服務(wu)來(lai)維護和(he)拓(tuo)展市場(chang)，較大限度的滿(man)足客(ke)戶(hu)的需(xu)求(qiu)。與客(ke)戶(hu)的共(gong)贏，是(shi)我(wo)們的發(fa)展目(mu)標，本(ben)生(sheng)，您信(xin)任(ren)的(de)合作(zuo)夥伴!