BUNSEN本生小建(jian)議(yi)：冷凍管的使(shi)用要(yao)點(dian)

　　【概(gai)述】冷凍管的安(an)全使(shi)用建(jian)議(yi)：

　　1.使(shi)用低(di)溫恒溫器儲(chu)存樣(yang)品(pin)時(shi)，嚴(yan)格(ge)要(yao)求低(di)溫恒溫器應(ying)儲(chu)存在液(ye)氮(dan)的(de)氣(qi)相中(zhong)或(huo)冰箱(xiang)中!如(ru)果將冷凍管保(bao)存在液(ye)氮(dan)中(zhong)，液氮(dan)會(hui)以壹(yi)定概(gai)率滲入(ru)冷凍管內(nei)，復(fu)蘇(su)時(shi)由(you)於(yu)液氮(dan)氣(qi)化，管內(nei)外(wai)壓(ya)力不(bu)平衡(heng)，容易(yi)造(zao)成(cheng)冷凍管爆(bao)裂，具有(you)生物危害性(xing)。

　　冷凍管的使(shi)用要(yao)點(dian)

　　冷凍管的安(an)全使(shi)用建(jian)議(yi)：

　　1.使(shi)用低(di)溫恒溫器儲(chu)存樣(yang)品(pin)時(shi)，嚴(yan)格(ge)要(yao)求低(di)溫恒溫器應(ying)儲(chu)存在液(ye)氮(dan)的(de)氣(qi)相中(zhong)或(huo)冰箱(xiang)中!如(ru)果將冷凍管保(bao)存在液(ye)氮(dan)中(zhong)，液氮(dan)會(hui)以壹(yi)定概(gai)率滲入(ru)冷凍管內(nei)，復(fu)蘇(su)時(shi)由(you)於(yu)液氮(dan)氣(qi)化，管內(nei)外(wai)壓(ya)力不(bu)平衡(heng)，容易(yi)造(zao)成(cheng)冷凍管爆(bao)裂，具有(you)生物危害性(xing)。

　　2.操(cao)作(zuo)冷凍管復(fu)蘇(su)，全程使(shi)用安(an)全防護設(she)備。建(jian)議(yi)穿實(shi)驗(yan)服(fu)，戴棉手(shou)套(tao)，在(zai)安全的(de)實(shi)驗(yan)臺(tai)上操(cao)作(zuo)。如(ru)有(you)可(ke)能(neng)，請(qing)佩戴護目鏡(jing)或(huo)防護面罩(zhao)。請格(ge)外(wai)小(xiao)心，因為夏天(tian)的(de)室(shi)內(nei)溫度(du)會比(bi)冬(dong)天(tian)高(gao)。

　　3.冷凍管廠家(jia)認(ren)為在(zai)冷凍保(bao)存細胞的(de)儲(chu)存過程中，冷凍管的冷凍溫度(du)需要(yao)均勻。凍結(jie)不(bu)均勻會導(dao)致(zhi)冰塞的(de)產(chan)生，冰塞會(hui)壓(ya)制兩(liang)側(ce)液(ye)體(ti)的(de)溫度(du)傳(chuan)遞(di)，進而產(chan)生危險(xian)的高(gao)壓(ya)，損(sun)壞(huai)冷凍管。

　　4.冷凍樣(yang)本(ben)量不(bu)應(ying)超過冷凍儲(chu)存管所需的(de)工作(zuo)體積(ji)。

　　冷凍管廠家(jia)認(ren)為細胞的(de)冷凍保(bao)存過程;

　　1.用預(yu)熱(re)的(de)PBS沖洗細胞。棄(qi)去(qu)PBS後(hou)，加入含(han)有(you)EDTA的(de)胰(yi)蛋(dan)白(bai)酶(mei)消化液消化細胞(消(xiao)化液可以薄薄地覆(fu)蓋(gai)細胞表(biao)面，消(xiao)化液的濃(nong)度(du)要(yao)根據(ju)不(bu)同的(de)細胞系進行(xing)調整(zheng))。

　　2.在(zai)37度(du)的消(xiao)化細胞3-5分(fen)鐘(zhong)，不(bu)要(yao)過度(du)消化。

　　3.壹(yi)旦(dan)細胞從(cong)底(di)部(bu)分離出來，可(ke)以用含(han)血(xue)清(qing)的培(pei)養基(ji)停(ting)止消化，用吸管輕(qing)輕(qing)吹氣(qi)，細胞就可以(yi)重新(xin)懸(xuan)浮(fu)。

　　4.冷凍管廠家(jia)認(ren)為離心細胞再(zai)懸浮(fu)以沈澱(dian)細胞，棄(qi)去(qu)上清(qing)液，並用(yong)含血(xue)清(qing)的培(pei)養基(ji)再(zai)懸浮(fu)細胞沈澱(dian)。

　　5.計(ji)數(shu)細胞(建(jian)議(yi)使(shi)用紐(niu)鮑(bao)爾室(shi))。

　　6.離心(500 g，5分鐘(zhong))細胞再(zai)懸浮(fu)並丟(diu)棄上清(qing)液。用(yong)適(shi)當體積(ji)的含(han)血(xue)清(qing)培養基(ji)懸(xuan)浮(fu)細胞。

　　7.將細胞重(zhong)懸(xuan)液與冷凍保(bao)存液(60%培(pei)養基(ji)，20%流(liu)式細胞儀(yi)，20%二甲(jia)基(ji)亞碸(feng))以(yi)1，333，601的比例(li)混(hun)合(he)，然(ran)後(hou)轉(zhuan)移(yi)到冷凍管中。冷凍試(shi)管中的(de)細胞濃(nong)度(du)應(ying)為15106個(ge)細胞/毫(hao)升(sheng)。

　　8.冷凍管廠家(jia)認(ren)為含(han)有(you)細胞的(de)冷凍管應(ying)以1 K/min的(de)冷卻(que)速(su)度(du)冷凍。上述要(yao)求可(ke)通(tong)過將冷凍管插入(ru)裝(zhuang)有(you)異(yi)丙(bing)醇的冷凍箱(xiang)室(shi)中，並將其放(fang)入(ru)70的(de)冰箱(xiang)中來實(shi)現。如(ru)果冷凍溶(rong)液(ye)中有(you)其他(ta)類(lei)型的樣(yang)品(pin)，冷凍管應(ying)直(zhi)接在20、70或(huo)液氮(dan)的(de)氣(qi)相中(zhong)冷凍。為了(le)保(bao)證每個(ge)樣(yang)品(pin)的(de)冷凍效(xiao)果均(jun)勻，4毫升(sheng)和(he)5毫(hao)升(sheng)的(de)Cryo.s管需要(yao)在20冷凍過(guo)夜(ye)，然後(hou)轉(zhuan)移(yi)到70或(huo)液氮(dan)的(de)氣(qi)體層(ceng)。

　　9.然後(hou)將冷凍儲(chu)存管轉移(yi)到液(ye)氮(dan)罐中。為了(le)避免(mian)汙(wu)染(如(ru)支原(yuan)體(ti))並考(kao)慮安(an)全預(yu)防措(cuo)施(shi)的要(yao)求，建(jian)議(yi)將Cryo.s冷凍管放置(zhi)在液氮(dan)上方的氣(qi)體層(ceng)中，而(er)不(bu)是液氮(dan)層(ceng)中。

　　冷凍管廠家(jia)認(ren)為細胞復(fu)蘇(su)過程：

　　1.從液(ye)氮(dan)罐中取(qu)出冷凍管後(hou)，立(li)即(ji)放(fang)入(ru)37的(de)水浴(yu)中解(jie)凍，解(jie)凍時(shi)間(jian)約(yue)為1-2分(fen)鐘(zhong)。解凍時(shi)，需要(yao)不(bu)斷搖(yao)動(dong)冷凍管，使(shi)其盡(jin)快(kuai)融化。這(zhe)壹(yi)步(bu)解(jie)凍過(guo)程越快(kuai)越(yue)好(hao)。

　　2.冷凍管廠家(jia)認(ren)為將解(jie)凍後(hou)的(de)細胞懸(xuan)液(ye)轉移到15 ml離心管中，需要(yao)立即(ji)加入壹(yi)定量的含血(xue)清(qing)培養基(ji)進行(xing)混(hun)合(he)。

　　3.離心(500 g，5分鐘(zhong))細胞再(zai)懸浮(fu)並丟(diu)棄上清(qing)液。用(yong)適(shi)當體積(ji)的含(han)血(xue)清(qing)培養基(ji)重(zhong)新(xin)懸(xuan)浮(fu)細胞沈澱(dian)，然後(hou)將其分(fen)裝(zhuang)到壹(yi)個(ge)或(huo)多個(ge)細胞培(pei)養瓶(ping)中(zhong)。

　　4.請遵(zun)循(xun)細胞接種的(de)推(tui)薦濃(nong)度(du)。

　　5.在接下(xia)來的(de)12小時(shi)內(nei)，細胞需要(yao)在靜(jing)止狀態下(xia)培(pei)養。

　　6.冷凍管廠家(jia)認(ren)為細胞更(geng)換可(ke)在(zai)24-48小時(shi)後(hou)進行(xing)。

　　本(ben)生壹(yi)直(zhi)視(shi)質(zhi)量控(kong)制為企(qi)業(ye)的(de)生命(ming)，追(zhui)求企(qi)業(ye)競爭(zheng)力的(de)不(bu)斷提(ti)升(sheng)。公司在經營中(zhong)始(shi)終秉(bing)承(cheng)：遵(zun)紀(ji)守法，嚴(yan)於(yu)律己，寬仁(ren)以待，敢(gan)於(yu)承(cheng)擔的企(qi)業(ye)精(jing)神(shen)作(zuo)為標(biao)準(zhun)，以(yi)過(guo)硬的(de)質(zhi)量和優(you)良(liang)的(de)服(fu)務(wu)來維(wei)護和拓展(zhan)市(shi)場(chang)，較大(da)限度(du)的滿足客戶的需求(qiu)。與客戶的共贏，是我們(men)的(de)發展(zhan)目(mu)標(biao)。本(ben)生!您信(xin)任的合(he)作(zuo)夥(huo)伴。我們(men)願與您真誠(cheng)合(he)作(zuo)，共創美好(hao)的(de)未(wei)來。本(ben)生實(shi)驗(yan)耗(hao)材(cai)