BUNSEN本(ben)生(sheng)：ELISA實(shi)驗(yan)操作的(de)顯(xian)色(se)和比色

　　(壹) 顯(xian)色(se)

　　顯(xian)色(se)是ELISA中(zhong)的(de)後壹(yi)步(bu)溫育反(fan)應(ying)，此時(shi)酶催(cui)化(hua)無色(se)的(de)底物(wu)生(sheng)成(cheng)有色的(de)產物(wu)。反(fan)應(ying)的(de)溫度和時(shi)間(jian)仍是影(ying)響顯(xian)色(se)的(de)因素。在壹定(ding)時(shi)間(jian)內(nei)，陰(yin)性孔(kong)可(ke)保(bao)持(chi)無色(se)，而(er)陽性孔(kong)則(ze)隨時(shi)間(jian)的(de)延(yan)長(chang)而(er)呈色加(jia)強。

　　適(shi)當提高溫度有助(zhu)於加(jia)速顯(xian)色(se)進行(xing)。在定(ding)量測定(ding)中，加(jia)入底(di)物(wu)後(hou)的(de)反(fan)應(ying)溫度和時(shi)間(jian)應(ying)按規(gui)定(ding)力求準確。定(ding)性測(ce)定(ding)的(de)顯(xian)色(se)可(ke)在室(shi)溫進行(xing)，時(shi)間(jian)壹(yi)般不(bu)需(xu)要嚴格控(kong)制，有時(shi)可(ke)根(gen)據陽(yang)性對(dui)照(zhao)孔(kong)和陰性對照(zhao)孔(kong)的(de)顯(xian)se情(qing)況(kuang)適(shi)當縮短或延(yan)長(chang)反(fan)應(ying)時(shi)間(jian)，及時(shi)判(pan)斷(duan)。

　　OPD底(di)物顯(xian)色(se)壹(yi)般在室(shi)外溫或37℃反(fan)應(ying)20-30分(fen)鐘後即(ji)不(bu)再加(jia)深，再(zai)延(yan)長(chang)反(fan)應(ying)時(shi)間(jian)，可(ke)使本(ben)底(di)值(zhi)增(zeng)高。OPD底(di)物液受(shou)光(guang)照會自(zi)行(xing)變色(se)，顯(xian)色(se)反(fan)應(ying)應(ying)避光(guang)進行(xing)，顯(xian)色(se)反(fan)應(ying)結束(shu)時(shi)加(jia)入終止(zhi)液終止(zhi)反(fan)應(ying)。OPD產物(wu)用硫(liu)酸終止(zhi)後，顯(xian)色(se)由橙(cheng)黃色(se)轉(zhuan)向(xiang)棕(zong)黃色(se)。

　　TMB受(shou)光(guang)照的(de)影響(xiang)不(bu)大，可(ke)在室(shi)溫中置於操(cao)作(zuo)臺上，邊反(fan)應(ying)觀察(cha)結(jie)果。但為(wei)保(bao)證實驗結果(guo)的(de)穩定(ding)性，宜(yi)在規(gui)定(ding)的(de)適當時(shi)間(jian)閱讀(du)結果。TMB經(jing)HRP作用後，約40分(fen)鐘顯(xian)色(se)達，隨即(ji)逐(zhu)漸減弱(ruo)，至2小(xiao)時(shi)後(hou)即(ji)可(ke)*消(xiao)退(tui)至無色。

　　TMB的(de)終止(zhi)液有多種(zhong)，疊(die)氮鈉和十(shi)二烷基(ji)硫(liu)酸鈉(SDS)等(deng)酶抑制劑均(jun)可(ke)使反(fan)應(ying)終止(zhi)。這類(lei)終止(zhi)劑尚能使(shi)藍色維持(chi)較長(chang)時(shi)間(jian)(12-24小(xiao)時(shi))不(bu)褪(tui)，是目視判斷的(de)良好終止(zhi)劑。此外，各類(lei)酸性終止(zhi)液則(ze)會使(shi)藍色轉(zhuan)變(bian)成(cheng)黃色(se)，此時(shi)可(ke)用特定(ding)的(de)波(bo)長(chang)(450nm)測讀(du)吸(xi)光(guang)值。

　　(二(er))比色

　　比(bi)色前(qian)應(ying)先(xian)用潔凈(jing)的(de)吸(xi)水紙(zhi)拭(shi)幹板(ban)底(di)附(fu)著(zhe)的(de)液體，然(ran)後(hou)將板(ban)正確放(fang)入酶標(biao)比(bi)色(se)儀(yi)的(de)比色(se)架(jia)中(zhong)。以軟板(ban)為(wei)載(zai)體的(de)試驗(yan)，需(xu)先(xian)將板(ban)置於標(biao)準96孔(kong)的(de)座(zuo)架(jia)中(zhong)，才(cai)可(ke)進行(xing)比色(se)。

　　在加(jia)底物(wu)液(ye)顯(xian)色(se)前(qian)，先(xian)將軟板(ban)邊(bian)緣剪(jian)凈(jing)，這樣，此板(ban)就(jiu)可(ke)*平(ping)妥(tuo)坐(zuo)入座(zuo)架(jia)中(zhong)。 比(bi)色(se)時(shi)應(ying)先(xian)以蒸(zheng)餾水校零點(dian)，測(ce)讀(du)底物孔(kong)(未(wei)經(jing)任(ren)何(he)反(fan)應(ying)僅加(jia)底物(wu)液(ye)的(de)孔(kong))和空白孔(kong)(以生(sheng)理(li)鹽(yan)水或稀(xi)釋(shi)液代替(ti)標(biao)本(ben)作(zuo)全(quan)過(guo)程(cheng)的(de)孔(kong))，以記(ji)錄本(ben)次試(shi)驗的(de)試劑(ji)狀(zhuang)況(kuang)。

　　其(qi)後(hou)可(ke)用空白(bai)孔(kong)以蒸(zheng)餾水校零點(dian)，以(yi)上各孔(kong)的(de)吸(xi)光(guang)度需(xu)減去(qu)空(kong)白(bai)孔(kong)的(de)吸(xi)光(guang)度，然後進行(xing)計算。

　　比色(se)結(jie)果(guo)的(de)表達以(yi)往通(tong)用光(guang)密度(oplical density，OD)，現(xian)按規(gui)定(ding)用吸(xi)光(guang)度(absorbence，A)，兩(liang)者(zhe)含義相(xiang)同(tong)。通常的(de)表示(shi)方法(fa)是，將吸(xi)收(shou)波(bo)長(chang)寫(xie)於A字母(mu)的(de)右下(xia)角，如OPD的(de)吸(xi)收(shou)波(bo)長(chang)為(wei)492nm，表示(shi)方法(fa)為(wei)"A492nm"或"OD492nm"。

　　ELISA試(shi)劑盒 本(ben)生(sheng)壹(yi)直(zhi)視(shi)質量控(kong)制為(wei)企業的(de)生命(ming)，追(zhui)求企業競(jing)爭(zheng)力的(de)不(bu)斷提(ti)升(sheng)。公司(si)在(zai)經(jing)營中(zhong)始(shi)終秉承(cheng)：遵(zun)紀(ji)守(shou)法(fa)，嚴於律(lv)己(ji)，寬(kuan)仁以待，敢(gan)於承(cheng)擔(dan)的(de)企業精(jing)神作為(wei)標準，以過(guo)硬的(de)質量和優良的(de)服務來(lai)維護和拓展市場(chang)，較大(da)限(xian)度的(de)滿足客(ke)戶(hu)的(de)需(xu)求。與客(ke)戶(hu)的(de)共贏，是我(wo)們的(de)發(fa)展目標。本(ben)生(sheng)!您信任(ren)的(de)合(he)作夥伴(ban)。我(wo)們願與您真(zhen)誠(cheng)合(he)作，共創美(mei)好的(de)未(wei)來(lai)。