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本生闡述(shu):ELISA方(fang)法(fa)如何檢測帶抗(kang)體(ti)的(de)相(xiang)關(guan)指(zhi)標(biao)
在(zai)運(yun)用ELISA方(fang)法(fa)測定抗(kang)體(ti)方(fang)面,通(tong)常所用的(de)方(fang)法(fa)稱(cheng)為(wei)間(jian)接(jie)法,也(ye)是(shi)目前(qian)常用的(de)方(fang)法(fa),其(qi)原(yuan)理(li):間(jian)接(jie)法首(shou)先用抗(kang)原(yuan)包(bao)被(bei)於(yu)固(gu)相載(zai)體(ti),這些(xie)包(bao)被(bei)的(de)抗(kang)原(yuan)必(bi)須(xu)是(shi)可溶性的(de),或者(zhe)至少(shao)是(shi)極微(wei)小的(de)顆(ke)粒(li),經洗(xi)滌,加入(ru)含(han)有被(bei)測抗(kang)體(ti)之標(biao)本,再(zai)經(jing)孵(fu)育(yu)洗(xi)滌後,加入(ru)酶(mei)標(biao)記抗(kang)抗(kang)體(ti),(對(dui)人(ren)的(de)標(biao)本來(lai)說即加酶(mei)標(biao)抗(kang)人(ren)球蛋白(bai)IgG、IgM),再(zai)經(jing)孵(fu)育(yu)洗(xi)滌後,加底物顯色(se),底物降(jiang)解(jie)的(de)量(liang),即(ji)為欲測抗(kang)體(ti)的(de)量(liang),其(qi)結果可用目(mu)測或用分(fen)光光(guang)度(du)計(ji)定量(liang)測定。

ELISA試劑(ji)盒(he)操(cao)作(zuo)步(bu)驟(zhou):
1. 將(jiang)抗(kang)原(yuan)按5μg/ml稀釋(shi)於(yu)碳(tan)酸(suan)鹽緩沖(chong)液(ye)(pH 9.6),100μl /孔,4℃過(guo)夜(ye)。
2. 次(ci)日(ri)PBS-T清(qing)洗(xi)4次(ci)(快(kuai)1慢3,間(jian)隔(ge)5分(fen)鐘)。
3. 加2%BSA封閉(bi)室(shi)溫1h,200μl /孔(kong)。
4. 陽性(xing)對(dui)照(zhao)從10ug/ml,做(zuo)倍必(bi)稀釋(shi),待(dai)測血清從1:50做(zuo)倍比稀釋(shi),預(yu)試驗後確(que)定稀釋(shi)倍數(shu)及(ji)陽性(xing)對(dui)照(zhao)的(de)起(qi)始(shi)濃(nong)度及(ji)稀釋(shi)數(shu)量(liang)(以可以做標(biao)準曲(qu)線為(wei)參數(shu)),室(shi)溫1h。
5. PBS-T清(qing)洗(xi)4次(ci)(快(kuai)1慢3,間(jian)隔(ge)5分(fen)鐘)。
6. 加入(ru)1:3000(不(bu)同(tong)公司(si)有不(bu)同(tong)的(de)推薦稀釋(shi)度(du))PBS-T稀釋(shi)的(de)HRP標(biao)記的(de)山(shan)羊(yang)抗(kang)人(ren)IgG,100μl /孔(kong),室(shi)溫1h。
7. PBS-T清(qing)洗(xi)4次(ci)(快(kuai)1慢3,間(jian)隔(ge)5分(fen)鐘)。
8. 顯色(se),100μl /孔,顏(yan)色(se)變深(shen)後(hou)中止顯色(se),2M硫(liu)酸(suan)在(zai)BIO-RAD酶(mei)標(biao)儀上(shang)讀數(shu),可用ABTS,OPD,TMB等(deng)。
ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) 本生壹直視(shi)質量(liang)控(kong)制為企(qi)業(ye)的(de)生命,追求(qiu)企(qi)業(ye)競(jing)爭(zheng)力(li)的(de)不(bu)斷(duan)提(ti)升(sheng)。公司(si)在(zai)經營(ying)中(zhong)始(shi)終秉(bing)承(cheng):遵紀(ji)守法,嚴(yan)於(yu)律己,寬仁以待(dai),敢(gan)於(yu)承擔的(de)企(qi)業(ye)精神作(zuo)為標(biao)準,以過(guo)硬(ying)的(de)質量(liang)和(he)優良的(de)服務來維(wei)護和拓(tuo)展市(shi)場(chang),較(jiao)大限度(du)的(de)滿(man)足(zu)客戶(hu)的(de)需求(qiu)。與(yu)客戶(hu)的(de)共(gong)贏(ying),是(shi)我(wo)們的(de)發(fa)展目標(biao)。本生!您(nin)信(xin)任的(de)合(he)作(zuo)夥伴(ban)。我(wo)們願(yuan)與(yu)您(nin)真誠合作(zuo),共創(chuang)美好(hao)的(de)未(wei)來(lai)。
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