本(ben)生解(jie)析：操(cao)作細胞系(xi)步(bu)驟(zhou)以(yi)及小技(ji)巧

　　脂(zhi)質(zhi)體作為(wei)體內和(he)體外輸送載(zai)體的工具(ju)，已經研(yan)究(jiu)的十(shi)分廣(guang)泛，中(zhong)性(xing)脂(zhi)質(zhi)體是(shi)利用(yong)脂(zhi)質(zhi)膜(mo)包(bao)裹(guo)DNA，借(jie)助(zhu)脂(zhi)質(zhi)膜(mo)將DNA導入細胞膜(mo)內。帶正(zheng)電(dian)的陽(yang)離(li)子(zi)脂(zhi)質(zhi)體，DNA並沒有(you)預先包(bao)埋(mai)在脂(zhi)質(zhi)體中(zhong)，而(er)是(shi)帶(dai)負電(dian)的DNA自動結合(he)到帶正(zheng)電(dian)的脂(zhi)質(zhi)體上，形成(cheng)DNA-陽(yang)離(li)子(zi)脂(zhi)質(zhi)體復合物(wu)，從(cong)而(er)吸(xi)附(fu)到帶負電(dian)的細胞膜(mo)表(biao)面，經(jing)過(guo)內吞被(bei)導入細胞。

　　壹、細胞系(xi)方(fang)法原(yuan)理

　　細胞系(xi)方(fang)法主要包(bao)括(kuo)：電穿孔法、磷酸(suan)鈣沈(chen)澱法、脂(zhi)質(zhi)體轉(zhuan)染法、病毒(du)介(jie)導的轉(zhuan)染等(deng)，理想(xiang)的細胞轉(zhuan)染方法是(shi)具(ju)有(you)高轉(zhuan)染效率、對細胞的毒(du)性(xing)作用小(xiao)等(deng)，本文主要介(jie)紹細胞轉(zhuan)染常(chang)用的方(fang)法(fa)-脂(zhi)質(zhi)體轉(zhuan)染的原(yuan)理和(he)操(cao)作步(bu)驟(zhou)等(deng)。

　　優點(dian): 與其(qi)它(ta)方法(fa)相(xiang)比(bi)，有(you)較高的效率和(he)較好(hao)的重(zhong)復(fu)性(xing)，它(ta)適(shi)用於(yu)把(ba)DNA轉(zhuan)染入懸(xuan)浮或(huo)貼壁培(pei)養(yang)細胞中(zhong)，是(shi)目前條(tiao)件下蕞(zui)方(fang)便的轉(zhuan)染方法之(zhi)壹。

　　二、細胞系(xi)操(cao)作步(bu)驟(zhou)

　　(1) 細胞系(xi)培(pei)養(yang)：取(qu)6cm細胞皿(min)，向每(mei)孔(kong)中(zhong)加(jia)入2mL含1~2×105個細胞培(pei)養(yang)液(ye)，37℃ CO2培(pei)養(yang)密(mi)度(du)至40%~60%，密(mi)度(du)過(guo)大(da)，轉(zhuan)染後(hou)不利篩(shai)選細胞。

　　(2) 轉(zhuan)染液制備：在(zai)EP管(guan)中(zhong)制(zhi)備以(yi)下(xia)兩液(ye)(為(wei)轉(zhuan)染每(mei)壹個孔細胞所(suo)用(yong)的量)

　　A液：用不含血清(qing)培(pei)養(yang)基稀(xi)釋1ug 質(zhi)粒DNA。

　　B液：用不含血清(qing)培(pei)養(yang)基稀(xi)釋2ul脂(zhi)質(zhi)體。

　　分別(bie)將(jiang)A液(ye)與(yu)B液輕(qing)彈(dan)混勻，靜(jing)置(zhi)5分鐘(zhong)。

　　(3) 吸(xi)取(qu)B液(ye)加(jia)入(ru)至A液中(zhong)，輕(qing)彈(dan)混勻。室溫(wen)中(zhong)置(zhi)10-15分鐘(zhong)。

　　(4) 轉(zhuan)染準備：用(yong)1mL不含血清(qing)培(pei)養(yang)液(ye)漂(piao)洗(xi)兩次(ci)，再加入(ru)4mL不含血清(qing)培(pei)養(yang)液(ye)。

　　(5) 轉(zhuan)染：把(ba)A/B復(fu)合物緩緩加(jia)入培(pei)養(yang)液(ye)中(zhong)，搖勻，37℃溫(wen)箱(xiang)置6~24小(xiao)時(shi)，吸(xi)除(chu)無(wu)血清(qing)轉(zhuan)染液，換入(ru)正(zheng)常(chang)培(pei)養(yang)液(ye)繼(ji)續(xu)培(pei)養(yang)。

　　(6) 瞬(shun)時(shi)轉(zhuan)染後(hou)，可(ke)在48h-72h細胞長滿(man)之(zhi)後(hou)，提(ti)取(qu)細胞蛋(dan)白或者(zhe)RNA，驗證(zheng)敲(qiao)減(jian)/過(guo)表(biao)達效率。

　　ELISA試(shi)劑(ji)盒本(ben)生壹直(zhi)視質(zhi)量控制為(wei)企業的生命，追求(qiu)企(qi)業競(jing)爭力(li)的不斷(duan)提(ti)升(sheng)。公司在經營(ying)中(zhong)始(shi)終秉(bing)承：遵(zun)紀(ji)守法(fa)，嚴於(yu)律己(ji)，寬(kuan)仁以(yi)待，敢(gan)於承擔的企(qi)業精(jing)神(shen)作為(wei)標準，以(yi)過(guo)硬(ying)的質(zhi)量和(he)優良(liang)的服務來維護和(he)拓展(zhan)市(shi)場，較(jiao)大(da)限(xian)度(du)的滿(man)足客(ke)戶的需(xu)求。與(yu)客(ke)戶的共贏，是(shi)我們(men)的發(fa)展(zhan)目標。本生!您(nin)信(xin)任(ren)的合(he)作夥伴(ban)。我們(men)願(yuan)與您(nin)真(zhen)誠(cheng)合(he)作，共創(chuang)美(mei)好的未來。