小鼠ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)的(de)操作(zuo)要點

　　ELISA的(de)操作(zuo)因(yin)固相(xiang)載體(ti)的(de)形成不同(tong)而(er)有所(suo)差(cha)異，良(liang)好的(de)儀器(qi)和正確的(de)操作(zuo)是保(bao)證ELISA檢(jian)測結(jie)果(guo)準確(que)可靠(kao)的(de)必要(yao)條(tiao)件(jian)。國內(nei)醫(yi)學檢驗(yan)壹(yi)般均用板(ban)式點。本(ben)生(sheng)技(ji)術(shu)小編將敘(xu)述板(ban)式ELISA各個(ge)操(cao)作(zuo)步驟(zhou)的(de)註意要(yao)點，珠(zhu)式、管式及磁(ci)性球(qiu)ELSIA，國外(wai)試劑(ji)均與(yu)特(te)殊儀(yi)器(qi)配合(he)應用(yong)，兩(liang)者均(jun)有詳細(xi)的(de)使用說(shuo)明(ming)，嚴(yan)格遵照規定操(cao)作(zuo)，必(bi)能(neng)得(de)出(chu)準(zhun)確(que)的(de)結果(guo)。

　　小鼠ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)操作步驟(zhou)：

　　方(fang)法壹 用(yong)於(yu)檢(jian)測未(wei)知抗原(yuan)的(de)雙抗體(ti)夾(jia)心法:

　　1. 包(bao)被(bei)：用(yong)0.05M PH9.牰(牰)碳(tan)酸(suan)鹽(yan)包(bao)被(bei)緩(huan)沖液(ye)將(jiang)抗體(ti)稀釋至蛋(dan)白質含量(liang)為1～10μg/ml。在(zai)每(mei)個(ge)聚(ju)苯(ben)乙(yi)烯板(ban)的(de)反應孔(kong)中加(jia)0.1ml，4℃過(guo)夜。次日，棄(qi)去(qu)孔內(nei)溶(rong)液(ye)，用洗滌緩(huan)沖液(ye)洗3次，每(mei)次3分鐘(zhong)。(簡(jian)稱洗滌，下(xia)同(tong))。

　　2. 加(jia)樣(yang)：加(jia)壹(yi)定稀釋的(de)待檢(jian)樣品(pin)0.1ml於(yu)上(shang)述(shu)已(yi)包(bao)被(bei)之(zhi)反(fan)應孔(kong)中，置37℃孵(fu)育1小時(shi)。然後(hou)洗滌。(同(tong)時(shi)做空白孔，陰性對照孔(kong)及陽(yang)性對照孔(kong))。

　　3. 加(jia)酶標抗體：於各反應孔(kong)中，加(jia)入新鮮(xian)稀釋的(de)酶標抗體(經滴(di)定後(hou)的(de)稀釋度(du))0.1ml。37℃孵(fu)育0.5～1小時(shi)，洗滌。

　　4. 加(jia)底(di)物(wu)液(ye)顯(xian)色(se)：於各反應孔(kong)中加(jia)入臨時(shi)配制(zhi)的(de)TMB底物(wu)溶(rong)液(ye)0.1ml，37℃10～30分鐘(zhong)。

　　5. 終(zhong)止(zhi)反應：於(yu)各反應孔(kong)中加(jia)入2M硫酸(suan)0.05ml。

　　6. 結果(guo)判定：可(ke)於(yu)白色(se)背景上(shang)，直(zhi)接(jie)用(yong)肉(rou)眼觀察結果(guo)：小鼠ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)反應孔(kong)內(nei)顏色(se)越(yue)深(shen)，陽(yang)性程度(du)越(yue)強，陰性反應為無(wu)色(se)或極淺，依據(ju)所(suo)呈(cheng)顏色(se)的(de)深(shen)淺(qian)，以(yi)“+"、“-"號表(biao)示(shi)。也可測O·D值(zhi)：在(zai)ELISA檢測(ce)儀(yi)上(shang)，於(yu)450nm(若(ruo)以(yi)ABTS顯(xian)色(se)，則410nm)處(chu)，以(yi)空白對照孔(kong)調零(ling)後測(ce)各孔O·D值(zhi)，若大於(yu)規定的(de)陰性對照OD值(zhi)的(de)2.1倍，即為陽(yang)性。

　　方(fang)法二 用(yong)於(yu)檢(jian)測未(wei)知抗體的(de)間接(jie)法：

　　用(yong)包(bao)被(bei)緩(huan)沖液(ye)將(jiang)已(yi)知(zhi)抗原(yuan)稀釋至1～10μg/ml，每(mei)孔加(jia)0.1ml，4℃過(guo)夜。次日洗滌3次。加(jia)壹(yi)定稀釋的(de)待檢(jian)樣品(pin)(未(wei)知抗體)0.1ml於上(shang)述(shu)已(yi)包(bao)被(bei)之(zhi)反(fan)應孔(kong)中,置37℃孵(fu)育1小時(shi),洗滌。(同(tong)時(shi)做空白、陰性及陽性孔對照)於(yu)反應孔(kong)中，加(jia)入新鮮(xian)稀釋的(de)酶標第二抗體(抗抗(kang)體)0.1ml，37℃孵(fu)育30-60分鐘(zhong)，洗滌,zui後(hou)壹(yi)遍用DDW洗滌。其余(yu)步驟(zhou)同“雙抗體(ti)夾(jia)心法"的(de)4、5、6。

　　洗滌：

　　洗滌在(zai)ELISA過(guo)程(cheng)中雖不(bu)是(shi)壹個(ge)反(fan)應步驟(zhou)，小鼠ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)但卻(que)也決(jue)定著實驗的(de)成敗。ELSIA就(jiu)是(shi)靠(kao)洗滌來(lai)達(da)到分(fen)離(li)遊離(li)的(de)和結(jie)合(he)的(de)酶標記物(wu)的(de)目的(de)。通過(guo)洗滌以(yi)清除(chu)殘(can)留(liu)在(zai)板(ban)孔中沒能(neng)與(yu)固相(xiang)抗原(yuan)或抗(kang)體結合(he)的(de)物(wu)質(zhi)，以(yi)及在(zai)反應過(guo)程(cheng)中非特(te)異性地吸附(fu)於(yu)固相(xiang)載體的(de)幹擾(rao)物(wu)質(zhi)。聚(ju)苯(ben)乙(yi)烯等塑(su)料對蛋(dan)白質的(de)吸附(fu)是(shi)普遍性的(de)，而(er)在(zai)洗滌時(shi)又應把(ba)這(zhe)種(zhong)非(fei)特(te)異性吸附(fu)的(de)幹擾(rao)物(wu)質(zhi)洗滌下(xia)來(lai)。可(ke)以(yi)說在(zai)ELISA操作(zuo)中，洗滌是(shi)zui主(zhu)要(yao)的(de)關鍵(jian)技術(shu)，應引(yin)起(qi)操作者的(de)高度(du)重(zhong)視(shi)，操(cao)作者應嚴(yan)格按要(yao)求(qiu)洗滌，不(bu)得(de)馬(ma)虎。

　　小鼠ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)本生(sheng)壹(yi)直(zhi)視(shi)質(zhi)量控制為企(qi)業(ye)的(de)生(sheng)命(ming)，追(zhui)求(qiu)企業(ye)競爭力(li)的(de)不斷(duan)提(ti)升(sheng)。公司在(zai)經營中始終(zhong)秉(bing)承：遵(zun)紀守法(fa)，嚴(yan)於律(lv)己，寬(kuan)仁以(yi)待，敢(gan)於(yu)承擔(dan)的(de)企業(ye)精神作為標準，以(yi)過(guo)硬(ying)的(de)質量(liang)和優良(liang)的(de)服(fu)務(wu)來(lai)維(wei)護(hu)和拓(tuo)展(zhan)市(shi)場(chang)，較大限(xian)度(du)的(de)滿足(zu)客戶的(de)需求(qiu)。與(yu)客戶的(de)共(gong)贏(ying)，是我(wo)們的(de)發展(zhan)目(mu)標。本生(sheng)!您(nin)信(xin)任的(de)合(he)作(zuo)夥伴。我(wo)們願(yuan)與(yu)您真(zhen)誠合(he)作(zuo)，共(gong)創(chuang)美(mei)好的(de)未(wei)來(lai)。