細胞培(pei)養(yang)過程中(zhong)常見問(wen)題及解(jie)決(jue)方(fang)案(an)

　　細胞培(pei)養(yang)是生(sheng)命(ming)科學實驗中的(de)基(ji)礎實驗，在細胞生(sheng)長(chang)過程中(zhong)，很(hen)多因素(su)都(dou)會(hui)造成(cheng)細胞生(sheng)長(chang)不(bu)良。下面BUNSEN本(ben)生(sheng)簡單歸(gui)納(na)壹下(xia)細胞生(sheng)長(chang)不(bu)良的(de)原因(yin)及對(dui)應(ying)的(de)解(jie)決(jue)方(fang)案(an)。

　　常見問(wen)題壹：為(wei)什(shen)麽(me)細胞解(jie)凍後缺(que)少(shao)活(huo)力，活(huo)細胞占比(bi)較(jiao)低?

　　這種現象可能主(zhu)要由(you)以(yi)下(xia)幾(ji)種原因(yin)所導(dao)致：

　　1.培(pei)養(yang)物(wu)凍存(cun)液(ye)等質(zhi)量(liang)欠(qian)缺(que)。

　　解(jie)決(jue)方(fang)案(an)：

　　a.確(que)保用(yong)來制(zhi)備(bei)儲存(cun)物(凍存(cun)液(ye))的(de)起(qi)始培(pei)養(yang)物(wu)需要保(bao)證(zheng)其健康(kang)、無微生物(wu)汙染(ran)、處於生(sheng)長(chang)對(dui)數期後期狀(zhuang)態(tai)。

　　b.收(shou)獲細胞時(shi)需要小心翼翼，避(bi)免細胞損(sun)傷(shang)。

　　2.儲存(cun)物凍存(cun)方(fang)法不(bu)當(dang)

　　解(jie)決(jue)方(fang)案(an)：

　　a.在液(ye)氮冷(leng)凍細胞時(shi)，確(que)保細胞、培(pei)養(yang)基(ji)和其他試(shi)劑(ji)的(de)濃(nong)度，以(yi)及凍存(cun)實驗步驟(zhou)依照供應(ying)商的(de)建議。壹(yi)般來說(shuo)，凍存(cun)應(ying)該緩(huan)慢，大(da)約(yue)1-3° C/min以(yi)減(jian)少(shao)冰(bing)晶形(xing)成(cheng)。

　　b.使(shi)用(yong)電(dian)子可編程或機械(xie)冷(leng)凍裝(zhuang)置(zhi)以確(que)保壹(yi)致的(de)、適當(dang)速率(lv)的(de)冷(leng)凍。

　　c.選(xuan)擇最(zui)合(he)適的(de)細胞冷(leng)凍保(bao)護(hu)劑。如(ru)果(guo)使(shi)用(yong)甘(gan)油(you)，不要將(jiang)其存儲在(zai)光照下，因(yin)為(wei)曝(pu)光會(hui)使甘(gan)油(you)轉化(hua)為(wei)有(you)對(dui)細胞毒(du)性的(de)。

　　3.儲存(cun)物保存(cun)不(bu)當(dang)

　　解(jie)決(jue)方(fang)案(an)：

　　a.儲存(cun)物應(ying)時刻(ke)保(bao)持(chi)在(zai)-130℃，理想情況(kuang)是置(zhi)於(yu)液(ye)氮中，以(yi)確(que)保較(jiao)大的(de)細胞活(huo)性。

　　b.如(ru)果(guo)將(jiang)細胞直(zhi)接浸入液(ye)氮中，容易造(zao)成(cheng)液(ye)氮泄露(lu)到(dao)凍存(cun)管內(nei)，解(jie)凍時(shi)會(hui)有(you)凍存(cun)管爆(bao)炸的(de)風(feng)險(xian)。所以(yi)壹(yi)般儲(chu)存在液(ye)氮上方(fang)的(de)氣相(xiang)環(huan)境中。

　　4.細胞解(jie)凍方(fang)法(fa)不當(dang)

　　解(jie)決(jue)方(fang)案(an)：

　　a.壹般來說(shuo)，細胞應(ying)該快(kuai)速解(jie)凍、使(shi)用(yong)預熱(re)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)、盡(jin)快(kuai)移除(chu)含有(you)冷(leng)凍保(bao)護(hu)劑的(de)培(pei)養(yang)基(ji)防(fang)止(zhi)細胞活(huo)力下(xia)降。

　　b.確(que)保小心操作(zuo)細胞。不(bu)要渦旋(xuan)或(huo)高速離(li)心，因為(wei)低(di)溫(wen)保(bao)存(cun)後的(de)特別(bie)容易受(shou)到損傷(shang)。

　　常見問(wen)題二：細胞進(jin)行(xing)解(jie)凍或(huo)傳代後細胞的(de)附(fu)著力偏低?

　　這種情況(kuang)主(zhu)要是因(yin)為(wei)濕度過低致(zhi)使(shi)培(pei)養(yang)容器上(shang)集(ji)聚靜電(dian)所致(zhi)。

　　可以(yi)通過適當(dang)增加(jia)房(fang)間濕度，使(shi)用(yong)防(fang)靜電(dian)裝置(zhi)或者用(yong)消(xiao)毒(du)過的(de)濕毛(mao)巾(jin)擦(ca)拭培(pei)養(yang)容器外(wai)側(ce)，來減(jian)低(di)靜電(dian)產生(sheng)。另外(wai)試(shi)劑(ji)混合不均勻(yun)，培(pei)養(yang)瓶(ping)轉速等因素(su)也(ye)可(ke)導(dao)致此現象發生。所(suo)以(yi)在進(jin)行(xing)細胞培(pei)養(yang)時(shi)，要確(que)保細胞和所(suo)有(you)試(shi)劑(ji)的(de)溶(rong)液(ye)混合(he)充(chong)分(fen)。在使(shi)用(yong)振(zhen)蕩培(pei)養(yang)箱(xiang)進(jin)行(xing)細胞培(pei)養(yang)時(shi)，註(zhu)意(yi)設(she)置適宜(yi)的(de)轉(zhuan)速。

　　常見問(wen)題三：為(wei)什(shen)麽(me)細胞生(sheng)長(chang)速度緩(huan)慢?

　　細胞生(sheng)長(chang)過慢有(you)很(hen)多原因(yin)，其主(zhu)要原因(yin)如(ru)下(xia)：

　　1.細胞的(de)傳代次(ci)數太(tai)多，所以(yi)獲(huo)得壹個新的(de)、亞(ya)培(pei)養(yang)次(ci)數較(jiao)少(shao)的(de)細胞儲(chu)存液(ye)很有(you)必(bi)要。

　　2.未(wei)選(xuan)擇合(he)適的(de)細胞收(shou)獲時(shi)機。

　　在(zai)使用(yong)新(xin)的(de)細胞儲(chu)存液(ye)的(de)同(tong)時，也(ye)要把(ba)我好適宜(yi)的(de)細胞收(shou)獲時(shi)機，壹(yi)般在(zai)對(dui)數生(sheng)長(chang)期的(de)後期是細胞收(shou)獲時(shi)間當(dang)細胞達(da)到*融合後，由(you)於(yu)生(sheng)長(chang)過於擁(yong)擠，會(hui)逐漸(jian)進(jin)入緩(huan)慢生(sheng)長(chang)階段(duan)，此時，細胞的(de)活(huo)躍度也(ye)會(hui)隨之(zhi)下降(jiang)。

　　培(pei)養(yang)基(ji)、血清(qing)、緩(huan)沖(chong)液(ye)等質(zhi)量(liang)差(cha)，或者配(pei)方不合理。培(pei)養(yang)基(ji)、血清(qing)等培(pei)養(yang)物(wu)質(zhi)是細胞生(sheng)長(chang)的(de)主(zhu)要營養(yang)來源，所(suo)以(yi)其質(zhi)量(liang)直(zhi)接會(hui)影響到(dao)細胞的(de)生(sheng)長(chang)狀(zhuang)態(tai)。所(suo)以(yi)高(gao)質(zhi)量(liang)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)及合理的(de)試(shi)劑(ji)配方維持(chi)細胞的(de)良好生長(chang)具有(you)決(jue)定的(de)作(zuo)用(yong)。

　　3.CO2濃(nong)度與(yu)緩(huan)沖(chong)系(xi)統(tong)需求(qiu)不匹(pi)配，導(dao)致pH控制不(bu)足。

　　壹(yi)般來說(shuo)，細胞培(pei)養(yang)液(ye)中緩(huan)沖(chong)液(ye)中NaHCO3的(de)濃(nong)度與(yu)CO2濃(nong)度成(cheng)正(zheng)比例(li)關系。緩(huan)沖(chong)液(ye)中NaHCO3 的(de)濃(nong)度高(gao)，所(suo)需求(qiu)的(de)CO2濃(nong)度也(ye)較(jiao)高(gao);這(zhe)樣(yang)才(cai)能達到(dao)PH平(ping)衡(heng)。

　　4.微生物(wu)汙染(ran)，尤其是支(zhi)原體(ti)

　　及時檢查汙(wu)染，防(fang)止(zhi)微生物(wu)汙染(ran)，做好支原體(ti)、器皿(min)、環(huan)境消(xiao)毒(du)、支(zhi)原體(ti)清(qing)除(chu)等工(gong)作。

　　5.培(pei)養(yang)物(wu)光敏降解(jie)產生(sheng)細胞毒(du)性物(wu)質(zhi)。

　　如(ru)果(guo)培(pei)養(yang)基(ji)長(chang)時(shi)間暴(bao)露(lu)於(yu)熒(ying)光將會(hui)導(dao)致光敏感培(pei)養(yang)基(ji)組分(fen)轉化(hua)成(cheng)細胞毒(du)性自(zi)由(you)基(ji)和H2O2，從(cong)而影響到(dao)細胞生(sheng)長(chang)甚至細胞雕(diao)亡。所(suo)以(yi)平時要在(zai)暗(an)處保存(cun)細胞核(he)培(pei)養(yang)基(ji)，避(bi)免熒光暴露(lu)。

　　6.不(bu)精(jing)確(que)的(de)細胞計(ji)數方(fang)法(fa)將導(dao)致細胞生(sheng)長(chang)不(bu)良

　　a.確(que)保計(ji)數樣(yang)本(ben)充(chong)分(fen)混合(he)，避(bi)免局(ju)部(bu)細胞密度差(cha)異影響精(jing)確(que)計數(shu)

　　b.再(zai)次(ci)檢查使(shi)用(yong)血(xue)球(qiu)計(ji)數(shu)板(ban)進(jin)行(xing)細胞計(ji)數的(de)所(suo)有(you)運算(suan)

　　常見問(wen)題四(si)：為(wei)什(shen)麽(me)細胞生(sheng)長(chang)會(hui)不均勻(yun)?

　　1.細胞或(huo)培(pei)養(yang)基(ji)的(de)混(hun)合不充分(fen)：在培(pei)養(yang)基(ji)中接入細胞後應(ying)當(dang)輕(qing)搖(yao)混勻(yun)，在進(jin)入振(zhen)蕩培(pei)養(yang)箱(xiang)後，保(bao)證持(chi)續(xu)穩定的(de)振(zhen)幅頻(pin)率(lv)，避(bi)免局(ju)部(bu)濃(nong)度差(cha)異。

　　2.在(zai)細胞培(pei)養(yang)過程中(zhong)有(you)時(shi)候會(hui)出(chu)現(xian)同(tong)壹時期相(xiang)同(tong)器皿(min)之(zhi)間細胞生(sheng)長(chang)不(bu)平(ping)衡(heng)。

　　這(zhe)種情況(kuang)可(ke)能是由(you)於(yu)培(pei)養(yang)箱(xiang)內(nei)部(bu)的(de)溫(wen)度不(bu)均壹所(suo)導(dao)致。註(zhu)意(yi)做好以下(xia)兩(liang)點：

　　a.避(bi)免將培(pei)養(yang)器皿(min)疊放(fang)，因(yin)為(wei)底部(bu)的(de)培(pei)養(yang)器皿(min)最(zui)靠近(jin)金(jin)屬架(jia)可(ke)能加熱(re)最(zui)快(kuai)。

　　b.如(ru)果(guo)放(fang)在(zai)培(pei)養(yang)箱(xiang)前(qian)部(bu)的(de)培(pei)養(yang)器皿(min)比(bi)後面的(de)生(sheng)長(chang)慢(man)，要註(zhu)意(yi)保(bao)持(chi)培(pei)養(yang)箱(xiang)的(de)門(men)盡(jin)可能關嚴(yan)，並(bing)將前(qian)面的(de)培(pei)養(yang)器皿(min)移(yi)到後面。