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如何正確(que)提取胎(tai)牛血(xue)清白蛋白呢?
胎(tai)牛血(xue)清白蛋白(BSA),又稱(cheng)第(di)五(wu)組(zu)分(fen),是(shi)牛(niu)血(xue)清(qing)中的壹種(zhong)白蛋白,包(bao)含(han)583個氨基酸(suan)殘(can)基,分子量(liang)為66.430 kDa,等電(dian)點為4.7。牛(niu)血(xue)清(qing)白蛋白在(zai)生(sheng)化實驗(yan)中有(you)廣(guang)泛(fan)的應用(yong),例如在(zai)western blot中作為Blocking agent;在(zai)酶(mei)切(qie)反(fan)應緩(huan)沖液中加入(ru)BSA,通過提高溶(rong)液中蛋白質的濃(nong)度,對酶(mei)起保(bao)護作(zuo)用(yong)。防(fang)止(zhi)酶(mei)的分(fen)解(jie)和非(fei)特(te)異(yi)性(xing)吸附,能減輕(qing)有(you)些(xie)酶(mei)的變(bian)性(xing),能減輕(qing)有(you)些(xie)不利(li)環境因素(su)如加熱(re),表面(mian)張(zhang)力(li)及(ji)化學(xue)因素(su)引起的變性(xing)。是(shi)胎(tai)牛血(xue)清中的壹種(zhong)球(qiu)蛋(dan)白,壹般(ban)獲取胎(tai)牛血(xue)清白蛋白,常(chang)常(chang)運(yun)用(yong)的方法是(shi)加熱(re)法。

下面壹起來看(kan)看(kan)是(shi)怎(zen)樣(yang)獲(huo)取胎(tai)牛血(xue)清白蛋白的!
壹、所需(xu)材(cai)料(liao)
胎(tai)牛血(xue)清以(yi)檸檬酸(suan)三(san)鈉為抗(kang)凝劑,血液搜(sou)集後隨即分別(bie)出(chu)血漿備用(yong)。需(xu)要的試劑有(you)血(xue)清白蛋白;溴(xiu)jia酚(fen)氯(lv);醋酸(suan)纖(xian)維素(su)薄膜(mo),別(bie)的(de)試劑均為分(fen)析(xi)純。獲取胎(tai)牛血(xue)清白蛋白需(xu)要準(zhun)備 LG-6型大(da)容(rong)量(liang)冷凍(dong)離心(xin)機,DF-C型電(dian)泳(yong)儀(yi),UV-754型紫外(wai)可見分光(guang)光度計(ji),PHS-2型酸(suan)度計(ji)。
二、具體方法
白蛋白含量(liang)測定(ding) 選用(yong)溴(xiu)jia酚(fen)氯(lv)法,以(yi)胎(tai)牛血(xue)清白蛋白為規範. 白蛋白純度的(de)測(ce)定(ding) 選用(yong)醋酸(suan)纖(xian)維素(su)薄膜(mo)電(dian)泳(yong)法(fa)。吸光度值(zhi)的(de)測(ce)定(ding) 用(yong)分光(guang)光(guang)度計(ji)直(zhi)接(jie)測(ce)定(ding)蛋白質溶(rong)液在(zai)波長(chang)為403 nm處(chu)的光(guang)吸收(shou)值(zhi),然(ran)後折算(suan)成濃(nong)度為10 g/L時(shi)牛(niu)血(xue)清(qing)白蛋白的光吸收(shou)值(zhi),用(yong)A403表明。
胎(tai)牛血(xue)清白蛋白的生產(chan)工藝 新鮮抗(kang)凝牛(niu)血(xue)用(yong)LC-6型大(da)容(rong)量(liang)離心(xin)機(3 000 r/min×30 min)離心(xin)分別出血漿,加壹(yi)定(ding)量(liang)的蒸(zheng)餾(liu)水稀(xi)釋,再(zai)參與恰當(dang)的穩定(ding)劑和蛋(dan)白沈澱劑,然後按下(xia)述(shu)方法進行(xing)試驗(yan)處(chu)理:
1.不壹樣(yang)pH值(zhi)溶(rong)液對白蛋白的收(shou)率和(he)質量(liang)的影(ying)響(xiang) 在(zai)其(qi)它(ta)條件(jian)固定(ding)的情(qing)況(kuang)下(xia),試驗(yan)不壹樣(yang)pH值(zhi)對白蛋白的收(shou)率、純度及(ji)A403值(zhi)的(de)影(ying)響(xiang)。
2.不壹樣(yang)加熱(re)保(bao)溫時(shi)間(jian)對白蛋白的收(shou)率和(he)質量(liang)的影(ying)響(xiang) 在(zai)選(xuan)定(ding)的pH值(zhi)和(he)其(qi)它(ta)條件(jian)固定(ding)的情(qing)況(kuang)下(xia),試驗(yan)不壹樣(yang)加熱(re)保(bao)溫時(shi)間(jian)對白蛋白的收(shou)率、純度及(ji)A403值(zhi)的(de)影(ying)響(xiang)。
3.不壹樣(yang)稀(xi)釋倍(bei)數(shu)對白蛋白的收(shou)率和(he)質量(liang)的影(ying)響(xiang) 在(zai)選(xuan)定(ding)的pH值(zhi)和(he)保(bao)溫時(shi)間(jian)及(ji)其(qi)它(ta)條件(jian)固定(ding)的情(qing)況(kuang)下(xia),試驗(yan)不壹樣(yang)稀(xi)釋倍(bei)數(shu)對白蛋白的收(shou)率、純度及(ji)A403值(zhi)的(de)影(ying)響(xiang)。
4.不壹樣(yang)加熱(re)溫度對白蛋白的收(shou)率和(he)質量(liang)的影(ying)響(xiang) 在(zai)其(qi)它(ta)條件(jian)選(xuan)定(ding)的情(qing)況(kuang)下(xia),試驗(yan)不壹樣(yang)加熱(re)溫度對白蛋白的收(shou)率、純度及(ji)A403值(zhi)的(de)影(ying)響(xiang)。
如何正確(que)提取胎(tai)牛血(xue)清白蛋白呢?本生(sheng)壹(yi)直(zhi)視(shi)質量(liang)控制(zhi)為企(qi)業的生命,追求企業競爭力(li)的(de)不斷提升(sheng)。公司(si)在(zai)經(jing)營中始終秉承:遵(zun)紀守法(fa),嚴(yan)於(yu)律(lv)己(ji),寬(kuan)仁以(yi)待(dai),敢於(yu)承(cheng)擔的(de)企(qi)業精(jing)神作(zuo)為標(biao)準(zhun),以過硬的質量(liang)和優(you)良(liang)的服(fu)務(wu)來維(wei)護(hu)和拓展(zhan)市場(chang),較大限度的(de)滿(man)足(zu)客(ke)戶(hu)的(de)需(xu)求(qiu)。與客戶的(de)共贏,是(shi)我(wo)們(men)的(de)發展目(mu)標(biao)。本生(sheng)!您信(xin)任(ren)的(de)合(he)作(zuo)夥伴(ban)。我(wo)們(men)願(yuan)與(yu)您真(zhen)誠合(he)作(zuo),共創美(mei)好的未(wei)來。
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