大鼠(shu)胃(wei)蛋白酶(PP)ELISA試(shi)劑盒(he)操作步驟及註意要(yao)素(su)

　　大鼠(shu)胃蛋白酶試(shi)劑盒(he)操作：

　　大鼠胃蛋白酶試(shi)劑盒(he)使用前(qian)，將(jiang)所(suo)有試(shi)劑充分(fen)混(hun)勻。不要(yao)使(shi)液體產(chan)生(sheng)大(da)量(liang)的泡(pao)沫，以(yi)免加(jia)樣時(shi)加入(ru)大量(liang)的氣(qi)泡(pao)，產(chan)生(sheng)加(jia)樣上(shang)的誤差(cha)。根據待(dai)測樣品(pin)數量(liang)加上(shang)標準(zhun)品(pin)的(de)數量(liang)決定(ding)所(suo)需的(de)板條(tiao)數。每(mei)個(ge)標準(zhun)品(pin)和(he)空(kong)白孔(kong)建(jian)議做(zuo)復(fu)孔(kong)。每(mei)個(ge)樣品(pin)根據自(zi)己的(de)數量(liang)來定(ding)，能(neng)使(shi)用復(fu)孔(kong)的(de)盡量(liang)做(zuo)復(fu)孔(kong)。

　　標(biao)本(ben)用(yong)標本稀釋(shi)液1：1稀釋(shi)後加(jia)入(ru)50ul於反(fan)應孔(kong)內(nei)。加(jia)入(ru)稀釋(shi)好(hao)後的(de)標(biao)準(zhun)品(pin)50ul於(yu)反(fan)應孔(kong)、加(jia)入(ru)待(dai)測樣品(pin)50ul於反(fan)應孔(kong)內(nei)。立(li)即加入(ru)50ul的生(sheng)物(wu)素標(biao)記的(de)抗體。蓋上(shang)膜板(ban)，輕輕(qing)振(zhen)蕩(dang)混勻(yun)，37℃溫(wen)育1小時(shi)。甩(shuai)去孔(kong)內(nei)液體，每(mei)孔(kong)加(jia)滿(man)洗(xi)滌(di)液，振蕩(dang)30秒(miao)，甩(shuai)去洗(xi)滌(di)液，用吸(xi)水(shui)紙拍(pai)幹(gan)。重復(fu)此操作3次。如果用洗(xi)板(ban)機(ji)洗(xi)滌(di)，洗(xi)滌(di)次數增加壹(yi)次。每(mei)孔(kong)加(jia)入(ru)80ul的親(qin)和鏈(lian)酶素(su)-HRP，輕輕振蕩混(hun)勻，37℃溫(wen)育30分(fen)鐘(zhong)。甩(shuai)去孔(kong)內(nei)液體，每(mei)孔(kong)加(jia)滿(man)洗(xi)滌(di)液，振蕩(dang)30秒(miao)，甩(shuai)去洗(xi)滌(di)液，用吸(xi)水(shui)紙拍(pai)幹(gan)。重復(fu)此操作3次。如果用洗(xi)板(ban)機(ji)洗(xi)滌(di)，洗(xi)滌(di)次數增加壹(yi)次。每(mei)孔(kong)加(jia)入(ru)底物(wu)A、B各(ge)50ul，輕(qing)輕振蕩混(hun)勻(yun)，37℃溫(wen)育10分(fen)鐘(zhong)。避免光照(zhao)。取(qu)出酶標(biao)板，迅速(su)加入(ru)50ul終(zhong)止液，加入(ru)終(zhong)止液後應(ying)立(li)即測定結(jie)果。在(zai)450nm波(bo)長處(chu)測定各(ge)孔(kong)的(de)OD值。局(ju)限(xian)6號(hao)標(biao)準(zhun)品(pin)以(yi)上(shang)的結(jie)果為(wei)非(fei)線性(xing)的，根據此標準(zhun)曲線(xian)無(wu)法得到(dao)精確(que)的(de)結(jie)果。

　　大(da)鼠胃(wei)蛋白酶試(shi)劑盒(he)樣品(pin)收集、處(chu)理及保(bao)存方(fang)法:

　　1、血清-----操作過程(cheng)中避免任(ren)何(he)細胞刺激。使用不含(han)熱(re)原和(he)內(nei)毒(du)素的試(shi)管(guan)。收集血液後，1000×g離(li)心10分(fen)鐘(zhong)將(jiang)血清和紅(hong)細胞迅速(su)小心地(di)分(fen)離(li)。

　　2、血漿(jiang)-----EDTA、檸(ning)檬(meng)酸(suan)鹽、肝(gan)素血漿(jiang)可用(yong)於檢(jian)測。1000×g離(li)心30分(fen)鐘(zhong)去除(chu)顆(ke)粒(li)。細胞上(shang)清液---1000×g離(li)心10分(fen)鐘(zhong)去除(chu)顆(ke)粒(li)和聚(ju)合物(wu)。

　　3、組織勻(yun)漿(jiang)-----將(jiang)組織加(jia)入(ru)適(shi)量(liang)生(sheng)理鹽水(shui)搗碎。1000×g離(li)心10分(fen)鐘(zhong)。

　　4、取(qu)上(shang)清液保(bao)存------如果樣品(pin)不立(li)即使用(yong)，應將(jiang)其分(fen)成(cheng)小部(bu)分(fen)-70 ℃保(bao)存，避免反復(fu)冷(leng)凍(dong)。

　　註意：盡可能(neng)的不要(yao)使(shi)用溶(rong)血或高血脂(zhi)血。如果血清中大量(liang)顆粒(li)，檢測前(qian)先離(li)心或過濾(lv)。不要(yao)在(zai)37℃或更高(gao)的溫(wen)度加熱(re)解(jie)凍(dong)。應(ying)在(zai)室(shi)溫(wen)下解(jie)凍(dong)並確(que)保(bao)樣品(pin)均(jun)勻(yun)地(di)充分(fen)解(jie)凍(dong)。

　　大(da)鼠(shu)胃(wei)蛋白酶試(shi)劑盒(he)性(xing)能：

　　1、靈(ling)敏度(du)：最小的(de)檢測濃(nong)度小於(yu)1號(hao)標(biao)準(zhun)品(pin)。稀釋(shi)度的線(xian)性(xing)。樣品(pin)線性(xing)回歸(gui)與預(yu)期濃(nong)度相(xiang)關系數R值為0.1 ng/mL。

　　2、特(te)異性(xing)：不與其它(ta)細胞因子(zi)反應(ying)。

　　3、重復(fu)性(xing)：板內(nei)、板(ban)間(jian)變(bian)異系(xi)數均(jun)小於(yu)10%。

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