人成纖維細胞生(sheng)長(chang)因(yin)子(zi)8（FGF-8）ELISA檢(jian)測(ce)試(shi)劑盒說明書(shu)

檢(jian)測(ce)原理

試(shi)劑盒采(cai)用(yong)雙抗(kang)體步夾心法酶(mei)聯(lian)免(mian)疫吸(xi)附(fu)試(shi)驗(yan)（ELISA）。往(wang)預先(xian)包被(bei)人成纖維細胞生(sheng)長(chang)因(yin)子(zi)8（FGF-8）獲(huo)抗體的(de)包被(bei)微(wei)孔中，依次加入標(biao)本、標準品、HRP標(biao)記(ji)的(de)檢(jian)測(ce)抗(kang)體，經過溫(wen)育並(bing)*洗(xi)滌(di)。用(yong)底物(wu)TMB顯色(se)，TMB在過(guo)氧化物(wu)酶的(de)催(cui)化(hua)下(xia)轉(zhuan)化成藍(lan)色(se)，並在(zai)酸的(de)作(zuo)用(yong)下(xia)轉(zhuan)化成終的(de)黃(huang)色(se)。顏色(se)的(de)深(shen)淺(qian)和(he)樣品中的(de)成纖維細胞生(sheng)長(chang)因(yin)子(zi)8（FGF-8）呈正相關。用(yong)酶標(biao)儀(yi)在(zai)450nm 波(bo)長(chang)下(xia)測(ce)定(ding)吸(xi)光(guang)度(du)（OD 值(zhi)），計(ji)算(suan)樣品濃度。

樣品收集、處(chu)理及(ji)保存(cun)方法

1.  血清(qing)：使用(yong)不含(han)熱原和(he)內(nei)毒(du)素的(de)試(shi)管，操作過(guo)程(cheng)中避免(mian)任(ren)何(he)細胞刺激，收(shou)集(ji)血液後(hou)，3000轉(zhuan)離(li)心10分(fen)鐘(zhong)將(jiang)血清(qing)和(he)紅細胞(bao)迅(xun)速小(xiao)心地分(fen)離(li)。

2.  血漿(jiang)：EDTA、檸(ning)檬酸(suan)鹽(yan)或肝素抗凝(ning)。3000轉(zhuan)離(li)心30分(fen)鐘(zhong)取上(shang)清(qing)。

3.  細胞(bao)上(shang)清(qing)液：3000轉(zhuan)離(li)心10分(fen)鐘(zhong)去除(chu)顆粒和(he)聚(ju)合(he)物(wu)。

4.  組(zu)織勻(yun)漿(jiang)：將(jiang)組(zu)織加入適(shi)量(liang)生(sheng)理鹽水搗(dao)碎(sui)。3000轉(zhuan)離(li)心10分(fen)鐘(zhong)取上(shang)清(qing)。

5.  保存(cun)：如果(guo)樣本收集後(hou)不(bu)及(ji)時(shi)檢測(ce)，請(qing)按次(ci)用(yong)量分(fen)裝，凍(dong)存(cun)於(yu)-20℃，避免(mian)反復凍(dong)融，在室(shi)溫(wen)下(xia)解(jie)凍並(bing)確(que)保樣品均勻地(di)充(chong)分(fen)解(jie)凍。

自(zi)備(bei)物(wu)品

    酶標(biao)儀(yi)（450nm）
    高(gao)精度加樣器及槍(qiang)頭(tou)：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
    37℃恒溫(wen)箱(xiang)

操作註意(yi)事(shi)項

      試(shi)劑盒保存(cun)在(zai)2-8℃，使用(yong)室(shi)溫(wen)平(ping)衡20分(fen)鐘(zhong)。從(cong)冰箱(xiang)取出的(de)濃(nong)縮(suo)洗(xi)滌(di)液會(hui)有結(jie)晶(jing)，這屬於(yu)正常(chang)現象(xiang)，水(shui)浴(yu)加熱使結晶(jing)*溶解(jie)後(hou)再(zai)使用(yong)。
      實(shi)驗(yan)中不用(yong)的(de)板(ban)條(tiao)應立即(ji)放(fang)回自(zi)封袋(dai)中(zhong)，密(mi)封（低溫(wen)幹燥(zao)）保存(cun)。
      標(biao)準品稀(xi)釋液即(ji)可視(shi)為陰(yin)性(xing)對(dui)照(zhao)或者空(kong)白；預處(chu)理後(hou)的(de)樣本無需稀(xi)釋，直(zhi)接取10μL加樣即可。
      嚴(yan)格(ge)按照說(shuo)明(ming)書(shu)中(zhong)標明(ming)的(de)時(shi)間(jian)、加液量(liang)及(ji)順(shun)序(xu)進(jin)行溫(wen)育操作。
      所(suo)有液體組(zu)分(fen)使用(yong)充分(fen)搖勻。

試(shi)劑盒組(zu)成：

註：標(biao)準品用(yong)標準品稀(xi)釋液依次稀釋為：160、80、40、20、10、5pg/ml

試(shi)劑的(de)準備

 20×洗(xi)滌(di)緩沖(chong)液的(de)稀(xi)釋：蒸餾(liu)水(shui)按(an)1：20稀釋，即1份的(de)20×洗(xi)滌(di)緩沖(chong)液加19份的(de)蒸餾(liu)水(shui)。

洗(xi)板(ban)方法

      手(shou)工洗(xi)板(ban)：甩盡(jin)孔內液體，每孔加滿洗(xi)滌(di)液，靜置(zhi)1min後(hou)甩盡(jin)孔內液體，在吸(xi)水(shui)紙(zhi)上(shang)拍(pai)幹，如此洗(xi)板(ban)5次(ci)。
      自(zi)動洗(xi)板(ban)機(ji)：每孔註入(ru)洗(xi)液350μL，浸(jin)泡(pao)1min，洗(xi)板(ban)5次(ci)。

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操作步驟

      從(cong)室(shi)溫(wen)平(ping)衡20min後(hou)的(de)鋁(lv)箔(bo)袋中取出所(suo)需板(ban)條(tiao)，剩余(yu)板(ban)條(tiao)用(yong)自封袋(dai)密(mi)封放(fang)回4℃。
      設置(zhi)標(biao)準品孔和(he)樣本孔，標準品孔各加不同(tong)濃(nong)度的(de)標(biao)準品50μL；
      待(dai)測(ce)樣本孔先加待測(ce)樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；
      隨(sui)後(hou)標(biao)準品孔和(he)樣本孔中每(mei)孔加入辣(la)根過(guo)氧(yang)化物(wu)酶（HRP）標記(ji)的(de)檢(jian)測(ce)抗(kang)體100μL，用(yong)封板(ban)膜封住反應(ying)孔，37℃水浴(yu)鍋或(huo)恒(heng)溫(wen)箱(xiang)溫(wen)育60min。
      棄去液體，吸(xi)水(shui)紙(zhi)上(shang)拍(pai)幹，每(mei)孔加滿洗(xi)滌(di)液，靜置(zhi)1min，甩去洗(xi)滌(di)液，吸(xi)水(shui)紙(zhi)上(shang)拍(pai)幹，如此重復洗(xi)板(ban)5次(ci)（也可用(yong)洗(xi)板(ban)機(ji)洗(xi)板(ban)）。
      每(mei)孔加入底物(wu)A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
      每(mei)孔加入終止液50μL，15min內(nei)，在(zai)450nm波長(chang)處(chu)測(ce)定(ding)各孔的(de)OD值(zhi)。

結果(guo)判斷(duan)

 繪制(zhi)標準曲(qu)線(xian)：在Excel工作表(biao)中，以標(biao)準品濃(nong)度(du)作(zuo)橫(heng)坐(zuo)標，對(dui)應OD值(zhi)作縱坐(zuo)標(biao)，繪制(zhi)出標(biao)準品線(xian)性(xing)回歸(gui)曲(qu)線(xian)，按曲(qu)線(xian)方程(cheng)計(ji)算(suan)各樣本濃度值(zhi)。

試(shi)劑盒性能(neng)

1.  準確性(xing)：標(biao)準品線(xian)性(xing)回歸(gui)與(yu)預期濃度相關系(xi)數R值(zhi)，大於(yu)等(deng)於(yu)0.9900。

2.  靈(ling)敏(min)度(du)：低檢(jian)測(ce)濃(nong)度(du)小(xiao)於(yu)1.0 pg/ml。

3.  特異(yi)性：不(bu)與(yu)其它可溶性(xing)結(jie)構類(lei)似物(wu)交叉(cha)反應(ying)。

4.  重(zhong)復性(xing)：板(ban)內、板(ban)間(jian)變異(yi)系(xi)數均小(xiao)於(yu)15%。

5.  貯藏：2-8℃，避光防潮(chao)保存(cun)。

6.  有效(xiao)期：6個(ge)月(yue)

免(mian)責(ze)聲明

1.   試(shi)劑盒僅(jin)供研(yan)究使用(yong)，不得(de)用(yong)於(yu)臨床實(shi)驗(yan)或人體實(shi)驗(yan)，否則(ze)所(suo)產(chan)生(sheng)的(de)切(qie)後(hou)果(guo)，由實(shi)驗(yan)者承擔(dan)，本公司(si)概(gai)不(bu)負(fu)責(ze)。

2.   嚴(yan)格(ge)按照說(shuo)明(ming)書(shu)操作，實(shi)驗(yan)者違(wei)反說(shuo)明(ming)書(shu)操作，後(hou)果(guo)由實(shi)驗(yan)者承擔(dan)。