人(ren)胰高(gao)血糖素樣(yang)肽(tai)1(GLP-1)ELISA試(shi)劑盒使用說(shuo)明書(shu)

　　BS-0203-A  人(ren)胰高(gao)血糖素樣(yang)肽(tai)1(GLP-1)ELISA 試(shi)劑盒  96T

　　BS-0203-B  人(ren)胰高(gao)血糖素樣(yang)肽(tai)1(GLP-1)ELISA 試(shi)劑盒  48T

　　壹(yi)、實驗原(yuan)理(li)

　　本(ben)試劑盒(he)采(cai)用雙抗體夾心法檢(jian)測人(ren)血清(qing)、血漿或細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)上清(qing)中的GLP-1水(shui)平(ping)。其(qi)核心步(bu)驟(zhou)包(bao)括(kuo)：

　　固(gu)相抗(kang)體(ti)包(bao)被‌：微(wei)孔板(ban)預(yu)包(bao)純化抗GLP-1單克(ke)隆抗體。

　　抗原(yuan)-抗體(ti)結合(he)‌：樣本(ben)中GLP-1與固(gu)相抗(kang)體(ti)結(jie)合(he)，再加入(ru)辣(la)根(gen)過(guo)氧化(hua)物(wu)酶(HRP)標(biao)記(ji)的二(er)抗形(xing)成復合(he)物(wu)。

　　顯色反應‌：加(jia)入(ru)底物(wu)TMB顯色，酸終止(zhi)後(hou)於450nm波(bo)長(chang)測(ce)定(ding)吸光度(du)，濃(nong)度(du)與(yu)顯色深度(du)成正比‌。

　　二、試劑(ji)盒(he)組成

　　組分 規格(ge) 備(bei)註(zhu)

　　預(yu)包(bao)被微(wei)孔板(ban) 12孔×8條(tiao) 含抗(kang)GLP-1抗體(ti)

　　標準(zhun)品(pin) 0.5ml/瓶 凍幹(gan)粉，需復(fu)溶

　　HRP標(biao)記(ji)二(er)抗(kang) 6ml 避(bi)光(guang)保(bao)存(cun)

　　顯色底物(wu)(TMB) A液(ye)6ml+B液6ml 現(xian)用現(xian)配(pei)

　　終止(zhi)液 6ml 2M硫酸(suan)

　　濃(nong)縮(suo)洗(xi)滌(di)液 20ml 需1:20稀釋(shi)

　　樣本(ben)xishi液 6ml 含穩(wen)定(ding)劑

　　註‌：不同品牌組分可能存(cun)在差異，詳見(jian)具(ju)體說明書(shu)。

　　三、樣(yang)本(ben)處理(li)

　　1. 樣本(ben)類型

　　血(xue)清(qing)/血漿(jiang)‌：EDTA或(huo)肝(gan)素抗(kang)凝(ning)，離(li)心取(qu)上清(qing)。

　　細(xi)胞(bao)上清(qing)‌：1000×g離(li)心20分鐘去除(chu)雜質。

　　組織勻漿‌：裂(lie)解(jie)後(hou)離(li)心取(qu)上清(qing)。

　　2. 保存條件

　　短(duan)期(qi)‌：2-8℃保存(cun)≤48小時(shi)。

　　長(chang)期(qi)‌：分裝後(hou)-20℃或-80℃凍存，避(bi)免反復凍融(rong)。

　　3. 稀釋(shi)建議(yi)

　　常(chang)規樣(yang)本(ben)‌：推薦(jian)稀釋(shi)5-20倍(如取(qu)20μL樣本(ben)+180μL稀釋(shi)液)。

　　高(gao)濃(nong)度(du)樣(yang)本(ben)‌：需預(yu)實驗確定(ding)稀釋(shi)倍數，最高稀釋(shi)100000倍(三步(bu)稀釋(shi)法)。

　　四(si)、操作步(bu)驟(zhou)

　　標(biao)準(zhun)品(pin)配(pei)制‌

　　凍幹(gan)標(biao)準品加1mL稀釋(shi)液復(fu)溶(rong)，混勻(yun)後(hou)靜置(zhi)10分鐘。

　　進行系列稀釋(shi)(如8pmol/L→4pmol/L→…→0.5pmol/L)。

　　加(jia)樣(yang)‌

　　標準(zhun)孔：50μL/孔。

　　樣(yang)本(ben)孔：先(xian)加40μL稀釋(shi)液，再(zai)加(jia)10μL樣(yang)本(ben)(總稀釋(shi)5倍)。

　　空(kong)白(bai)孔：不加樣(yang)本(ben)及二(er)抗(kang)。

　　孵(fu)育‌

　　37℃孵(fu)育120分鐘，洗(xi)板(ban)3次(每次浸(jin)泡1分鐘)。

　　顯色與終止(zhi)‌

　　每孔加(jia)TMB顯色液100μL，37℃避(bi)光(guang)孵(fu)育15分鐘。

　　加終止(zhi)液50μL終止(zhi)反應，30分鐘內(nei)測(ce)OD值。

　　五、註(zhu)意(yi)事項

　　樣本(ben)避(bi)免‌：溶(rong)血(xue)、高脂(zhi)樣(yang)本(ben)及含(han)NaN3的樣(yang)本(ben)(抑制HRP活(huo)性(xing))。

　　試劑(ji)平(ping)衡(heng)‌：使用前(qian)室溫(wen)平(ping)衡(heng)20分鐘，濃(nong)縮(suo)洗(xi)滌(di)液需40℃水(shui)浴溶(rong)解(jie)結(jie)晶(jing)。

　　質量控制‌：建議(yi)設(she)置復(fu)孔，標(biao)準曲線(xian)R²應(ying)≥0.95。

　　六、結(jie)果(guo)分析

　　標準(zhun)曲線(xian)‌：以OD值(zhi)對(dui)濃(nong)度(du)繪(hui)制四參(can)數方(fang)程。

　　濃(nong)度(du)計(ji)算(suan)‌：樣本(ben)OD值代(dai)入(ru)曲線(xian)方(fang)程，再乘以稀釋(shi)倍數。

　　註：以上僅供參(can)考(kao)，不作為(wei)實際(ji)數(shu)據，實驗需嚴(yan)格(ge)遵循(xun)說明或咨詢(xun)技術(shu)老師。

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