微生物(wu)輔(fu)酶(mei)F420（F420）ELISA試(shi)劑盒(he) 

       BS-4855 微生物(wu)輔(fu)酶(mei)F420(F420)ELISA試(shi)劑盒(he)

　　本(ben)試(shi)劑盒(he)僅(jin)供(gong)研(yan)究使(shi)用。

　　檢測(ce)範(fan)圍(wei)： 96T25μg/mL–850μg/mL

　　使(shi)用(yong)目(mu)的：本試(shi)劑盒(he)用(yong)於(yu)測(ce)定(ding)牛(niu)血清(qing)，血漿及(ji)相(xiang)關樣本中乳(ru)鐵蛋白(LF)含量。

　　實(shi)驗(yan)原理(li)本試(shi)劑盒(he)應(ying)用(yong)雙抗體(ti)夾心法(fa)測(ce)定(ding)標(biao)本(ben)中微生物(wu)輔(fu)酶(mei)F420(F420)水(shui)平(ping)。用(yong)純(chun)化(hua)的輔酶(mei)F420(F420)抗體(ti)包被微孔板(ban)，制(zhi)成(cheng)固(gu)相(xiang)抗體(ti)，往包被單(dan)抗的微孔中(zhong)依(yi)次加入(ru)輔酶(mei)F420(F420)，再與HRP標記(ji)的輔酶(mei)F420(F420)抗體(ti)結合(he)，形(xing)成抗體(ti)-抗原-酶(mei)標(biao)抗體(ti)復合(he)物，經(jing)過洗滌後加底物(wu)TMB顯色(se)。TMB在HRP酶(mei)的催化(hua)下轉(zhuan)化成(cheng)藍色(se)，並在酸(suan)的作(zuo)用(yong)下轉(zhuan)化成(cheng)最(zui)終(zhong)的黃色(se)。顏色(se)的深淺(qian)和(he)樣品中(zhong)的輔酶(mei)F420(F420)呈正(zheng)相(xiang)關。用酶(mei)標(biao)儀在450nm波(bo)長下測(ce)定(ding)吸(xi)光度(OD值(zhi))，通(tong)過標準(zhun)曲線計算(suan)樣品(pin)中輔(fu)酶(mei)F420(F420)濃度。

　　試(shi)劑盒(he)組(zu)成(cheng)

　　130倍濃縮洗(xi)滌液20ml×1瓶7終(zhong)止液

　　6ml×1瓶2酶(mei)標(biao)試(shi)劑

　　6ml×1瓶(ping)8標(biao)準(zhun)品(1600μg/mL)

　　0.5ml×1瓶3酶(mei)標(biao)包被板12孔×8條(tiao)9標(biao)準(zhun)品稀釋(shi)液

　　1.5ml×1瓶4樣(yang)品稀(xi)釋(shi)液

　　6ml×1瓶10說明書(shu)1份(fen)5顯色(se)劑A液

　　6ml×1瓶11封(feng)板膜(mo)2張(zhang) 6顯色(se)劑B液

　　6ml×1/瓶12密(mi)封(feng)袋(dai)1個

　　標(biao)本要求

　　1.標本(ben)采(cai)集(ji)後盡早進行(xing)提取，提取按相關文(wen)獻進(jin)行(xing)，提取後應(ying)盡(jin)s快進(jin)行(xing)實驗(yan)。若不能(neng)馬(ma)上(shang)進(jin)行(xing)試(shi)驗，可將(jiang)標(biao)本放於-20℃保(bao)存(cun)，但(dan)應(ying)避(bi)免(mian)反復(fu)凍(dong)融

　　2.不能(neng)檢測(ce)含NaN3的樣品(pin)，因(yin)NaN3抑制(zhi)辣根過氧化物(wu)酶(mei)的(HRP)活性。

　　操作(zuo)步(bu)驟

　　1.標(biao)準(zhun)品的稀釋(shi)：本(ben)試(shi)劑盒(he)提供原倍標(biao)準品壹(yi)支，用(yong)戶(hu)可按照下列圖表在小試(shi)管中進(jin)行(xing)稀釋(shi)。800μg/mL5號標(biao)準品150μl的原倍標(biao)準品加入(ru)150μl標準(zhun)品稀(xi)釋液400μg/mL4號標(biao)準品(pin)150μl的5號標(biao)準(zhun)品加入(ru)150μl標準(zhun)品稀(xi)釋液200μg/mL3號標(biao)準品(pin)150μl的4號標(biao)準(zhun)品加入(ru)150μl標準(zhun)品稀(xi)釋液100μg/mL2號標(biao)準品(pin)150μl的3號標(biao)準(zhun)品加入(ru)150μl標準(zhun)品稀(xi)釋液50μg/mL1號標(biao)準品(pin)150μl的2號標(biao)準(zhun)品加入(ru)150μl標準(zhun)品稀(xi)釋液

　　2.加樣：分(fen)別(bie)設空(kong)白孔(空(kong)白對(dui)照孔不加樣品(pin)及酶(mei)標(biao)試(shi)劑，其(qi)余(yu)各步(bu)操作(zuo)相(xiang)同)、標(biao)準(zhun)孔、待(dai)測(ce)樣(yang)品(pin)孔。在酶(mei)標(biao)包被板上標準(zhun)品(pin)準(zhun)確(que)加樣50μl，待(dai)測(ce)樣(yang)品(pin)孔中(zhong)先(xian)加樣品(pin)稀釋(shi)液40μl，然後再加待(dai)測(ce)樣(yang)品(pin)10μl(樣(yang)品最(zui)終(zhong)稀(xi)釋(shi)度為5倍)。加樣將(jiang)樣(yang)品加於酶(mei)標(biao)板孔底(di)部(bu)，盡量不觸(chu)及孔壁(bi)，輕輕晃動混(hun)勻(yun)。

　　3.溫(wen)育(yu)：用封(feng)板膜封板(ban)後置37℃溫(wen)育(yu)30分鐘。

　　4.配液：將(jiang)30倍濃縮洗(xi)滌液用蒸(zheng)餾(liu)水(shui)30倍稀(xi)釋後備(bei)用

　　5.洗滌：小(xiao)心(xin)揭(jie)掉封板(ban)膜，棄(qi)去液體(ti)，甩(shuai)幹，每孔加滿(man)洗滌液，靜置30秒(miao)後棄(qi)去，如(ru)此(ci)重(zhong)復(fu)5次(ci)，拍幹。

　　6.加酶(mei)：每孔加入(ru)酶(mei)標(biao)試(shi)劑50μl，空(kong)白孔除(chu)外(wai)。

　　7.溫(wen)育(yu)：操作(zuo)同3。

　　8.洗(xi)滌：操作(zuo)同5。

　　9.顯色(se)：每孔先(xian)加入(ru)顯色(se)劑A50μl，再加入(ru)顯色(se)劑B50μl，輕(qing)輕(qing)震(zhen)蕩(dang)混勻，37℃避光顯色(se)10分鐘.

　　10.終止：每孔加終止(zhi)液50μl，終止(zhi)反應(ying)(此(ci)時藍色(se)立轉(zhuan)黃色(se))。

　　11.測(ce)定(ding)：以(yi)空(kong)白孔調(tiao)零，450nm波(bo)長依(yi)序測(ce)量各孔的吸光度(OD值(zhi))。 測(ce)定(ding)應(ying)在加終止(zhi)液後15分鐘以內(nei)進(jin)行(xing)。

　　操作(zuo)程(cheng)序總(zong)結：

　　計(ji)算(suan) 以標(biao)準物(wu)的濃度為橫坐(zuo)標(biao)，OD值(zhi)為縱坐(zuo)標(biao)，在坐(zuo)標(biao)紙上(shang)繪出(chu)標準(zhun)曲線，根據(ju)樣品(pin)的OD值由標(biao)準曲線查(zha)出相(xiang)應(ying)的濃度;再乘以稀(xi)釋(shi)倍數(shu);或用標(biao)準物(wu)的濃度與(yu)OD值(zhi)計(ji)算(suan)出標(biao)準曲線的直(zhi)線回(hui)歸(gui)方程(cheng)式(shi)，將(jiang)樣(yang)品的OD值代(dai)入(ru)方程(cheng)式(shi)，計(ji)算(suan)出樣(yang)品濃度，再乘以稀(xi)釋(shi)倍數(shu)，即為樣(yang)品的實際(ji)濃度。

　　輔(fu)酶(mei)F420(F420) 註(zhu)意(yi)事項(xiang)

　　1.試(shi)劑盒(he)從冷(leng)藏環(huan)境(jing)中(zhong)取出應(ying)在室溫(wen)平(ping)衡(heng)15-30分(fen)鐘後方可使用，酶(mei)標(biao)包被板開封後如未(wei)用(yong)完，板條(tiao)應(ying)裝(zhuang)入(ru)密(mi)封(feng)袋(dai)中保(bao)存(cun)。

　　2.濃洗滌液可能(neng)會有(you)結晶(jing)析出(chu)，稀釋(shi)時可在水浴(yu)中(zhong)加溫(wen)助溶(rong)，洗滌時不影(ying)響結果(guo)。

　　3.各步(bu)加樣均(jun)應(ying)使(shi)用加樣器，並經常(chang)校(xiao)對(dui)其(qi)準(zhun)確(que)性，以避免(mian)試(shi)驗誤(wu)差。壹(yi)次(ci)加樣時間(jian)最(zui)好控制(zhi)在5分鐘內(nei)，如(ru)標本(ben)數(shu)量多(duo)，推薦(jian)使(shi)用排(pai)槍加樣。

　　4.請(qing)每次測(ce)定(ding)的同時做標準(zhun)曲線，最(zui)好做復孔。如(ru)標本中待(dai)測(ce)物(wu)質(zhi)含量過(guo)高(gao)(樣(yang)本OD值(zhi)大(da)於標(biao)準品孔第(di)壹(yi)孔的OD值)，請(qing)先(xian)用(yong)樣品稀釋(shi)液稀釋(shi)壹(yi)定(ding)倍數(shu)(n倍)後再測(ce)定(ding)，計(ji)算(suan)時請最(zui)後乘以(yi)總(zong)稀釋(shi)倍數(shu)(×n×5)。

　　5.封板膜(mo)只限(xian)壹(yi)次(ci)性使用，以避免(mian)交(jiao)叉(cha)汙(wu)染。

　　6.底物(wu)請避(bi)光保(bao)存(cun)。

　　7.嚴(yan)格(ge)按照說明書(shu)的操作(zuo)進(jin)行(xing)，試(shi)驗結果(guo)判(pan)定(ding)必須(xu)以(yi)酶(mei)標(biao)儀讀數為準(zhun).

　　8.所(suo)有(you)樣(yang)品，洗(xi)滌液和各種(zhong)廢(fei)棄(qi)物都應(ying)按傳染物處(chu)理。

　　9.本(ben)試(shi)劑不同批(pi)號(hao)組(zu)分(fen)不得混用。

　　保(bao)存(cun)條(tiao)件(jian)及(ji)有(you)效(xiao)期1.試(shi)劑盒(he)保(bao)存(cun)：2-8℃。2.

　　有(you)效(xiao)期：6個月

　　註(zhu)：以(yi)上資料經(jing)供(gong)參(can)考(kao)！

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