輔(fu)酶F420(F420)酶聯(lian)免疫(yi)分(fen)析試劑(ji)盒(he) 本生

　　本試劑(ji)盒(he)僅供(gong)研究使用。

　　檢測範圍(wei)：96T1.2ng/L-50ng/L

　　使用目(mu)的：本試劑(ji)盒(he)用於(yu)測定(ding)微生物樣(yang)本中輔(fu)酶(mei)F420(F420)含量。

　　實(shi)驗(yan)原(yuan)理(li)

　　本試劑(ji)盒(he)應(ying)用雙抗體夾心法(fa)測定(ding)標本中輔(fu)酶(mei)F420(F420)水平。用純(chun)化的輔(fu)酶(mei)F420(F420)抗體包被(bei)微孔(kong)板，制(zhi)成(cheng)固相(xiang)抗體，往包被(bei)單抗的(de)微孔(kong)中依次加(jia)入輔酶(mei)F420(F420)，再(zai)與(yu)HRP標記(ji)的(de)輔酶F420(F420)抗體結合(he)，形成(cheng)抗體-抗原(yuan)-酶(mei)標抗體復合(he)物，經(jing)過(guo)洗(xi)滌(di)後加(jia)底(di)物TMB顯色。TMB在HRP酶的催(cui)化下轉(zhuan)化成藍(lan)色，並在酸的作(zuo)用下轉(zhuan)化成最(zui)終的(de)黃色。顏色的深淺(qian)和(he)樣品(pin)中(zhong)的(de)輔(fu)酶(mei)F420(F420)呈正相(xiang)關。用酶(mei)標儀在450nm波長下測定(ding)吸光(guang)度(OD值(zhi))，通過(guo)標準(zhun)曲(qu)線計算(suan)樣(yang)品(pin)中(zhong)輔(fu)酶(mei)F420(F420)濃(nong)度。

　　試劑(ji)盒(he)組成(cheng)

　　130倍濃(nong)縮洗滌液20ml×1瓶(ping)7終(zhong)止液

　　6ml×1瓶(ping)2酶(mei)標試劑(ji)

　　6ml×1瓶(ping)8標準(zhun)品(pin)(1600μg/mL)

　　0.5ml×1瓶(ping)3酶(mei)標包被(bei)板12孔(kong)×8條(tiao)9標準(zhun)品(pin)稀(xi)釋(shi)液

　　1.5ml×1瓶(ping)4樣(yang)品(pin)稀(xi)釋(shi)液

　　6ml×1瓶(ping)10說(shuo)明書1份5顯色劑(ji)A液

　　6ml×1瓶(ping)11封板膜(mo)2張(zhang) 6顯色劑(ji)B液

　　6ml×1/瓶(ping)12密(mi)封袋1個(ge)

　　標本要(yao)求(qiu)

　　1.標本采集(ji)後盡早進(jin)行(xing)提(ti)取(qu)，提取(qu)按(an)相(xiang)關文(wen)獻進(jin)行(xing)，提(ti)取(qu)後應(ying)盡s快(kuai)進(jin)行(xing)實(shi)驗(yan)。若(ruo)不能馬(ma)上(shang)進(jin)行(xing)試驗(yan)，可(ke)將(jiang)標本放於(yu)-20℃保存(cun)，但應(ying)避(bi)免反復凍融(rong)

　　2.不(bu)能檢測含NaN3的樣品(pin)，因(yin)NaN3抑(yi)制(zhi)辣根過(guo)氧(yang)化物酶(mei)的(HRP)活(huo)性(xing)。

　　操作步(bu)驟(zhou)

　　1.標準(zhun)品(pin)的(de)稀(xi)釋(shi)：本試劑(ji)盒(he)提供(gong)原倍標準(zhun)品(pin)壹(yi)支(zhi)，用戶(hu)可按(an)照下列(lie)圖(tu)表(biao)在小(xiao)試管(guan)中進(jin)行(xing)稀(xi)釋(shi)。800μg/mL5號標準(zhun)品(pin)150μl的(de)原(yuan)倍標準(zhun)品(pin)加(jia)入150μl標準(zhun)品(pin)稀(xi)釋(shi)液400μg/mL4號標準(zhun)品(pin)150μl的(de)5號標準(zhun)品(pin)加(jia)入150μl標準(zhun)品(pin)稀(xi)釋(shi)液200μg/mL3號標準(zhun)品(pin)150μl的(de)4號標準(zhun)品(pin)加(jia)入150μl標準(zhun)品(pin)稀(xi)釋(shi)液100μg/mL2號標準(zhun)品(pin)150μl的(de)3號標準(zhun)品(pin)加(jia)入150μl標準(zhun)品(pin)稀(xi)釋(shi)液50μg/mL1號標準(zhun)品(pin)150μl的(de)2號標準(zhun)品(pin)加(jia)入150μl標準(zhun)品(pin)稀(xi)釋(shi)液

　　2.加(jia)樣：分(fen)別(bie)設(she)空白孔(kong)(空白對照孔(kong)不加(jia)樣品(pin)及(ji)酶標試劑(ji)，其(qi)余各(ge)步操作相(xiang)同(tong))、標準(zhun)孔(kong)、待(dai)測樣品(pin)孔(kong)。在酶標包被(bei)板上(shang)標準(zhun)品(pin)準(zhun)確(que)加(jia)樣50μl，待(dai)測樣品(pin)孔(kong)中先加(jia)樣品(pin)稀(xi)釋(shi)液40μl，然後再(zai)加(jia)待(dai)測樣品(pin)10μl(樣(yang)品(pin)最(zui)終稀(xi)釋(shi)度為5倍)。加(jia)樣將(jiang)樣品(pin)加(jia)於酶(mei)標板孔(kong)底(di)部，盡量(liang)不(bu)觸(chu)及(ji)孔(kong)壁，輕輕晃(huang)動(dong)混勻。

　　3.溫育：用封板膜(mo)封板後置37℃溫育30分鐘(zhong)。

　　4.配液：將(jiang)30倍濃(nong)縮洗滌液用蒸(zheng)餾水30倍稀(xi)釋(shi)後備(bei)用

　　5.洗(xi)滌：小(xiao)心揭(jie)掉封板膜(mo)，棄(qi)去(qu)液體，甩幹(gan)，每(mei)孔(kong)加(jia)滿洗(xi)滌液，靜(jing)置(zhi)30秒後棄(qi)去(qu)，如此(ci)重(zhong)復5次(ci)，拍(pai)幹。

　　6.加(jia)酶：每(mei)孔(kong)加(jia)入酶標試劑(ji)50μl，空(kong)白孔(kong)除外。

　　7.溫育：操作同(tong)3。

　　8.洗滌：操作同(tong)5。

　　9.顯色：每孔(kong)先加(jia)入顯色劑(ji)A50μl，再(zai)加(jia)入顯色劑(ji)B50μl，輕輕震蕩(dang)混勻，37℃避(bi)光(guang)顯色10分鐘(zhong).

　　10.終止：每(mei)孔(kong)加(jia)終止液50μl，終(zhong)止反應(ying)(此時(shi)藍色立轉黃(huang)色)。

　　11.測定(ding)：以(yi)空(kong)白孔(kong)調零，450nm波長依序(xu)測量各(ge)孔(kong)的吸光(guang)度(OD值(zhi))。 測定(ding)應(ying)在加(jia)終止液後15分鐘(zhong)以(yi)內(nei)進(jin)行(xing)。

　　操作程(cheng)序(xu)總(zong)結(jie)：

　　計算(suan) 以(yi)標準(zhun)物的(de)濃度(du)為橫(heng)坐(zuo)標，OD值(zhi)為縱(zong)坐(zuo)標，在坐(zuo)標紙上(shang)繪出標準(zhun)曲(qu)線，根據(ju)樣(yang)品(pin)的(de)OD值(zhi)由標準(zhun)曲(qu)線查出相(xiang)應(ying)的濃(nong)度;再(zai)乘(cheng)以(yi)稀(xi)釋(shi)倍數;或用標準(zhun)物的(de)濃度(du)與(yu)OD值(zhi)計算(suan)出(chu)標準(zhun)曲(qu)線的直(zhi)線回歸(gui)方程(cheng)式(shi)，將(jiang)樣品(pin)的(de)OD值(zhi)代入方程(cheng)式(shi)，計算(suan)出(chu)樣品(pin)濃(nong)度(du)，再(zai)乘(cheng)以(yi)稀(xi)釋(shi)倍數，即為樣(yang)品(pin)的(de)實(shi)際(ji)濃(nong)度。

　　輔酶F420(F420)酶(mei)聯(lian)免疫(yi)分(fen)析試劑(ji)盒(he) 本生 註(zhu)意(yi)事項(xiang)

　　1.試劑(ji)盒(he)從冷(leng)藏(zang)環境中(zhong)取(qu)出應(ying)在室溫平衡15-30分鐘(zhong)後方可使用，酶(mei)標包被(bei)板開(kai)封後如未用完(wan)，板條(tiao)應(ying)裝入密封袋中(zhong)保(bao)存。

　　2.濃洗(xi)滌液可(ke)能會(hui)有(you)結(jie)晶(jing)析出，稀(xi)釋(shi)時可在水浴中(zhong)加(jia)溫助溶，洗滌時(shi)不(bu)影響結果。

　　3.各(ge)步加(jia)樣均(jun)應(ying)使用加(jia)樣器(qi)，並經(jing)常(chang)校對其準(zhun)確(que)性(xing)，以(yi)避(bi)免試驗(yan)誤(wu)差(cha)。壹(yi)次(ci)加(jia)樣時(shi)間最(zui)好控制在5分鐘(zhong)內(nei)，如標本數量多(duo)，推薦(jian)使用排槍(qiang)加(jia)樣。

　　4.請(qing)每次(ci)測定(ding)的(de)同(tong)時做(zuo)標準(zhun)曲(qu)線，最(zui)好做(zuo)復孔(kong)。如標本中待(dai)測物質(zhi)含量(liang)過(guo)高(gao)(樣(yang)本OD值(zhi)大於(yu)標準(zhun)品(pin)孔(kong)第壹(yi)孔(kong)的OD值(zhi))，請先(xian)用樣(yang)品(pin)稀(xi)釋(shi)液稀(xi)釋(shi)壹(yi)定(ding)倍數(n倍)後再(zai)測定(ding)，計算(suan)時(shi)請最(zui)後乘以(yi)總(zong)稀(xi)釋(shi)倍數(×n×5)。

　　5.封板膜(mo)只(zhi)限(xian)壹(yi)次(ci)性(xing)使用，以(yi)避(bi)免交叉(cha)汙(wu)染(ran)。

　　6.底(di)物請(qing)避(bi)光(guang)保存(cun)。

　　7.嚴格(ge)按(an)照說(shuo)明書的操作進(jin)行(xing)，試驗(yan)結(jie)果判(pan)定(ding)必(bi)須以(yi)酶(mei)標儀讀數為準(zhun).

　　8.所(suo)有(you)樣(yang)品(pin)，洗(xi)滌(di)液和(he)各(ge)種(zhong)廢棄(qi)物都應(ying)按(an)傳(chuan)染(ran)物處理(li)。

　　9.本試劑(ji)不(bu)同(tong)批號組(zu)分(fen)不得混用。

　　保(bao)存條(tiao)件及(ji)有(you)效(xiao)期(qi)1.試劑(ji)盒(he)保存(cun)：2-8℃。2.

　　有(you)效(xiao)期(qi)：6個月