牛(niu)乳鐵蛋白(LF)酶聯(lian)免疫(yi)分(fen)析試(shi)劑盒(he)說明(ming)書(shu)

　　本試(shi)劑盒(he)僅供(gong)研究(jiu)使(shi)用(yong)。

　　檢(jian)測(ce)範(fan)圍： 96T25μg/mL–850μg/mL

　　使(shi)用(yong)目(mu)的(de)：本(ben)試(shi)劑盒(he)用(yong)於測(ce)定(ding)牛(niu)血(xue)清，血(xue)漿及(ji)相(xiang)關(guan)樣本中(zhong)乳鐵蛋白(LF)含量(liang)。

　　實驗(yan)原理本(ben)試(shi)劑盒(he)應(ying)用(yong)雙(shuang)抗(kang)體(ti)夾(jia)心(xin)法測定(ding)標(biao)本(ben)中(zhong)牛乳鐵蛋白(LF)水平(ping)。用(yong)純(chun)化(hua)的牛(niu)乳鐵蛋白(LF)抗(kang)體(ti)包(bao)被(bei)微孔(kong)板(ban)，制成(cheng)固(gu)相(xiang)抗(kang)體(ti)，往(wang)包被(bei)單抗(kang)的(de)微孔(kong)中(zhong)依次(ci)加(jia)入(ru)乳鐵蛋白(LF)，再與HRP標(biao)記(ji)的乳鐵蛋白(LF)抗(kang)體(ti)結(jie)合，形(xing)成抗(kang)體(ti)-抗(kang)原(yuan)-酶(mei)標(biao)抗(kang)體(ti)復合物(wu)，經(jing)過洗(xi)滌後(hou)加底物(wu)TMB顯(xian)色。TMB在(zai)HRP酶的催(cui)化(hua)下轉(zhuan)化(hua)成藍(lan)色，並在(zai)酸的作(zuo)用(yong)下轉(zhuan)化(hua)成最(zui)終的黃(huang)色。顏(yan)色的深淺和(he)樣品中(zhong)的乳鐵蛋白(LF)呈正(zheng)相關(guan)。用(yong)酶(mei)標(biao)儀(yi)在(zai)450nm波(bo)長(chang)下測(ce)定(ding)吸(xi)光度(OD值(zhi))，通(tong)過標(biao)準曲(qu)線(xian)計(ji)算(suan)樣(yang)品中(zhong)乳鐵蛋白(LF)濃度。

　　試(shi)劑盒(he)組(zu)成

　　130倍(bei)濃縮洗(xi)滌液(ye)20ml×1瓶7終止液(ye)

　　6ml×1瓶2酶(mei)標(biao)試(shi)劑

　　6ml×1瓶(ping)8標(biao)準品(1600μg/mL)

　　0.5ml×1瓶(ping)3酶(mei)標(biao)包(bao)被(bei)板(ban)12孔(kong)×8條(tiao)9標(biao)準品稀(xi)釋液

　　1.5ml×1瓶(ping)4樣(yang)品稀(xi)釋液

　　6ml×1瓶(ping)10說(shuo)明(ming)書(shu)1份5顯(xian)色劑A液

　　6ml×1瓶(ping)11封(feng)板(ban)膜2張 6顯(xian)色劑B液

　　6ml×1/瓶(ping)12密封(feng)袋1個

　　標(biao)本(ben)要求

　　1.標(biao)本(ben)采集後(hou)盡(jin)早進行(xing)提取(qu)，提取(qu)按相(xiang)關(guan)文獻(xian)進行(xing)，提取(qu)後應(ying)盡(jin)s快進行(xing)實驗(yan)。若不(bu)能(neng)馬(ma)上(shang)進行(xing)試(shi)驗，可(ke)將(jiang)標(biao)本(ben)放(fang)於-20℃保存，但(dan)應(ying)避(bi)免反(fan)復凍融

　　2.不能(neng)檢測含(han)NaN3的樣品，因NaN3抑(yi)制辣根(gen)過氧(yang)化(hua)物酶(mei)的(HRP)活性(xing)。

　　操作步驟

　　1.標(biao)準品的(de)稀(xi)釋：本試(shi)劑盒(he)提供(gong)原(yuan)倍(bei)標(biao)準品壹(yi)支(zhi)，用(yong)戶(hu)可(ke)按(an)照下列(lie)圖表在(zai)小試(shi)管中(zhong)進行(xing)稀釋。800μg/mL5號標(biao)準品150μl的(de)原(yuan)倍(bei)標(biao)準品加(jia)入(ru)150μl標(biao)準品稀(xi)釋液400μg/mL4號(hao)標(biao)準品150μl的(de)5號(hao)標(biao)準品加(jia)入(ru)150μl標(biao)準品稀(xi)釋液200μg/mL3號(hao)標(biao)準品150μl的(de)4號(hao)標(biao)準品加(jia)入(ru)150μl標(biao)準品稀(xi)釋液100μg/mL2號(hao)標(biao)準品150μl的(de)3號(hao)標(biao)準品加(jia)入(ru)150μl標(biao)準品稀(xi)釋液50μg/mL1號(hao)標(biao)準品150μl的(de)2號(hao)標(biao)準品加(jia)入(ru)150μl標(biao)準品稀(xi)釋液

　　2.加(jia)樣(yang)：分(fen)別(bie)設(she)空白孔(kong)(空白對照孔(kong)不(bu)加樣(yang)品及(ji)酶(mei)標(biao)試(shi)劑，其余(yu)各步操作相(xiang)同(tong))、標(biao)準孔(kong)、待(dai)測樣(yang)品孔(kong)。在(zai)酶標(biao)包(bao)被(bei)板(ban)上(shang)標(biao)準品準確(que)加樣(yang)50μl，待測(ce)樣品孔(kong)中(zhong)先加(jia)樣(yang)品稀(xi)釋液40μl，然(ran)後(hou)再加待測(ce)樣品10μl(樣(yang)品最(zui)終稀釋度為(wei)5倍(bei))。加(jia)樣(yang)將樣品加(jia)於酶(mei)標(biao)板(ban)孔(kong)底(di)部(bu)，盡(jin)量(liang)不(bu)觸及(ji)孔(kong)壁(bi)，輕輕晃(huang)動混勻(yun)。

　　3.溫育：用(yong)封(feng)板(ban)膜封板(ban)後置37℃溫育30分(fen)鐘(zhong)。

　　4.配液：將(jiang)30倍(bei)濃縮洗(xi)滌液(ye)用(yong)蒸餾(liu)水30倍(bei)稀(xi)釋後備用(yong)

　　5.洗(xi)滌：小(xiao)心(xin)揭(jie)掉(diao)封(feng)板(ban)膜，棄(qi)去液(ye)體(ti)，甩(shuai)幹(gan)，每(mei)孔(kong)加(jia)滿洗滌液(ye)，靜置30秒(miao)後棄(qi)去，如(ru)此重復5次，拍(pai)幹(gan)。

　　6.加(jia)酶：每(mei)孔(kong)加(jia)入酶(mei)標(biao)試(shi)劑50μl，空白孔(kong)除(chu)外(wai)。

　　7.溫育：操作同(tong)3。

　　8.洗(xi)滌：操作同(tong)5。

　　9.顯(xian)色：每(mei)孔(kong)先(xian)加入(ru)顯(xian)色劑A50μl，再加入顯(xian)色劑B50μl，輕輕震(zhen)蕩(dang)混勻(yun)，37℃避(bi)光顯(xian)色10分(fen)鐘(zhong).

　　10.終止：每(mei)孔(kong)加(jia)終止液(ye)50μl，終止反(fan)應(ying)(此時(shi)藍(lan)色立(li)轉黃(huang)色)。

　　11.測定(ding)：以(yi)空白孔(kong)調零，450nm波(bo)長(chang)依序(xu)測量(liang)各孔(kong)的(de)吸(xi)光度(OD值(zhi))。 測定(ding)應(ying)在(zai)加終止液(ye)後15分(fen)鐘(zhong)以內(nei)進行(xing)。

　　操作程序(xu)總(zong)結：

　　計算(suan) 以(yi)標(biao)準物的(de)濃度為(wei)橫坐標(biao)，OD值(zhi)為縱坐標(biao)，在(zai)坐標(biao)紙上(shang)繪出標(biao)準曲(qu)線(xian)，根(gen)據(ju)樣品的(de)OD值(zhi)由標(biao)準曲(qu)線(xian)查出相(xiang)應(ying)的(de)濃度;再乘(cheng)以(yi)稀(xi)釋倍(bei)數;或用(yong)標(biao)準物的(de)濃度與(yu)OD值(zhi)計算出標(biao)準曲(qu)線(xian)的(de)直線(xian)回(hui)歸方(fang)程式，將(jiang)樣(yang)品的(de)OD值(zhi)代入方(fang)程式，計(ji)算(suan)出樣(yang)品濃度，再乘(cheng)以(yi)稀(xi)釋倍(bei)數，即為(wei)樣(yang)品的(de)實(shi)際(ji)濃度。

　　牛(niu)乳鐵蛋白(LF)酶聯(lian)免疫(yi)分(fen)析試(shi)劑盒(he)說明(ming)書(shu) 註意(yi)事(shi)項(xiang)

　　1.試(shi)劑盒(he)從冷(leng)藏(zang)環(huan)境(jing)中(zhong)取(qu)出應(ying)在(zai)室溫平衡(heng)15-30分(fen)鐘(zhong)後方(fang)可(ke)使(shi)用(yong)，酶(mei)標(biao)包(bao)被(bei)板(ban)開封後(hou)如(ru)未(wei)用(yong)完，板(ban)條應(ying)裝(zhuang)入密封(feng)袋中(zhong)保存。

　　2.濃洗滌液(ye)可(ke)能(neng)會有結晶析出，稀(xi)釋時(shi)可(ke)在(zai)水浴(yu)中(zhong)加溫助(zhu)溶，洗(xi)滌時(shi)不(bu)影響結果(guo)。

　　3.各(ge)步加(jia)樣均應(ying)使(shi)用(yong)加(jia)樣(yang)器，並經(jing)常校(xiao)對其準確(que)性，以(yi)避(bi)免試(shi)驗誤差。壹(yi)次加樣時(shi)間(jian)最(zui)好控制在(zai)5分(fen)鐘(zhong)內(nei)，如(ru)標(biao)本(ben)數量多(duo)，推(tui)薦使(shi)用(yong)排(pai)槍(qiang)加(jia)樣。

　　4.請每(mei)次(ci)測(ce)定(ding)的(de)同(tong)時(shi)做(zuo)標(biao)準曲(qu)線(xian)，最(zui)好做復孔(kong)。如(ru)標(biao)本(ben)中(zhong)待測(ce)物(wu)質(zhi)含(han)量過高(樣本(ben)OD值(zhi)大於標(biao)準品孔(kong)第壹孔(kong)的(de)OD值)，請先用(yong)樣(yang)品稀(xi)釋液稀(xi)釋壹定(ding)倍(bei)數(n倍(bei))後(hou)再測定(ding)，計(ji)算(suan)時(shi)請最後乘(cheng)以(yi)總(zong)稀釋倍(bei)數(×n×5)。

　　5.封板(ban)膜只(zhi)限壹(yi)次性(xing)使(shi)用(yong)，以(yi)避(bi)免交叉(cha)汙(wu)染(ran)。

　　6.底(di)物(wu)請避(bi)光保存。

　　7.嚴(yan)格(ge)按照說明(ming)書(shu)的操作進行(xing)，試(shi)驗結(jie)果(guo)判(pan)定(ding)必(bi)須以酶標(biao)儀(yi)讀數為準.

　　8.所(suo)有樣品，洗(xi)滌液(ye)和各種廢(fei)棄(qi)物都(dou)應(ying)按(an)傳染物處理。

　　9.本(ben)試(shi)劑不(bu)同批(pi)號(hao)組(zu)分(fen)不(bu)得混用(yong)。

　　保存條(tiao)件及(ji)有效(xiao)期1.試(shi)劑盒(he)保存：2-8℃。2.

　　有效(xiao)期：6個月(yue)