牛(niu)脫氧核(he)糖(tang)核酸(suan)酶I(DNase-I)酶聯(lian)免(mian)疫分(fen)析(xi)試劑(ji)盒使(shi)用(yong)說(shuo)明(ming)書(shu)

　　本試劑(ji)盒僅供研(yan)究使(shi)用(yong)。

　　檢(jian)測範圍：96T25pg/ml-900pg/ml

　　使用(yong)目(mu)的(de)：本(ben)試劑(ji)盒用(yong)於(yu)測定牛(niu)血清、血漿及(ji)相(xiang)關液體樣本(ben)中脫氧核(he)糖(tang)核酸(suan)酶I(DNase-I)含量。

　　實(shi)驗原理(li)：本(ben)試劑(ji)盒應(ying)用(yong)雙抗(kang)體夾(jia)心法(fa)測定標(biao)本中牛脫氧核(he)糖(tang)核酸(suan)酶I(DNase-I)水平(ping)。用(yong)純(chun)化(hua)的(de)牛脫氧核(he)糖(tang)核酸(suan)酶I(DNase-I)抗體包(bao)被微(wei)孔板(ban)，制(zhi)成固(gu)相(xiang)抗體，往(wang)包被(bei)單(dan)抗(kang)的(de)微(wei)孔中依次加入脫氧核(he)糖(tang)核酸(suan)酶I(DNase-I)，再與HRP標記的(de)脫氧核(he)糖(tang)核酸(suan)酶I(DNase-I)抗體結合，形成抗(kang)體-抗(kang)原-酶(mei)標(biao)抗(kang)體復(fu)合物(wu)，經(jing)過(guo)*洗(xi)滌後(hou)加底物(wu)TMB顯(xian)色(se)。TMB在HRP酶(mei)的催(cui)化(hua)下轉化(hua)成藍(lan)色(se)，並在酸(suan)的作(zuo)用(yong)下轉化(hua)成最終的黃色(se)。顏色(se)的深(shen)淺(qian)和(he)樣品中的脫氧核(he)糖(tang)核酸(suan)酶I(DNase-I)呈(cheng)正(zheng)相(xiang)關。用(yong)酶(mei)標(biao)儀在450nm波(bo)長(chang)下測定吸(xi)光(guang)度(du)(OD值)，通(tong)過(guo)標準曲線計(ji)算樣品中牛脫氧核(he)糖(tang)核酸(suan)酶I(DNase-I)濃度(du)。

　　牛(niu)脫氧核(he)糖(tang)核酸(suan)酶I(DNase-I)酶聯(lian)免(mian)疫分(fen)析(xi)試劑(ji)盒試劑(ji)盒組(zu)成

　　130倍(bei)濃縮(suo)洗(xi)滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶2酶(mei)標(biao)試劑(ji)6ml×1瓶8標(biao)準品(1600pg/ml)0.5ml×1瓶3酶(mei)標(biao)包被板(ban)12孔×8條(tiao)9標(biao)準品稀(xi)釋液1.5ml×1瓶4樣品稀(xi)釋液6ml×1瓶10說(shuo)明(ming)書(shu)1份5顯(xian)色(se)劑(ji)A液6ml×1瓶11封板(ban)膜2張(zhang)6顯(xian)色(se)劑(ji)B液6ml×1/瓶12密(mi)封袋(dai)1個(ge)

　　標本要(yao)求(qiu)

　　1.標(biao)本(ben)采(cai)集後(hou)盡(jin)早進(jin)行提(ti)取，提(ti)取按(an)相(xiang)關文獻進行，提(ti)取後(hou)應盡(jin)快進行實(shi)驗。若(ruo)不(bu)能(neng)馬(ma)上進行試驗，可將(jiang)標(biao)本(ben)放(fang)於(yu)-20℃保存(cun)，但應避免反復(fu)凍融(rong)2.不能檢(jian)測含NaN3的樣品，因(yin)NaN3抑(yi)制辣(la)根過氧化(hua)物(wu)酶(mei)的(HRP)活性(xing)。

　　操作步(bu)驟(zhou)

　　1.標(biao)準品的稀(xi)釋：本(ben)試劑(ji)盒提(ti)供原倍(bei)標準品壹支，用(yong)戶(hu)可(ke)按(an)照(zhao)下列(lie)圖表(biao)在小(xiao)試管中進行稀(xi)釋。800pg/ml5號(hao)標準品150μl的原倍(bei)標準品加入150μl標準品稀(xi)釋液400pg/ml4號標(biao)準品150μl的5號(hao)標(biao)準品加入150μl標準品稀(xi)釋液200pg/ml3號標(biao)準品150μl的4號(hao)標(biao)準品加入150μl標準品稀(xi)釋液100pg/ml2號標(biao)準品150μl的3號(hao)標(biao)準品加入150μl標準品稀(xi)釋液50pg/ml1號標(biao)準品150μl的2號(hao)標(biao)準品加入150μl標準品稀(xi)釋液

　　2.加樣：分(fen)別(bie)設空(kong)白孔(空白對(dui)照(zhao)孔(kong)不加樣品及酶(mei)標(biao)試劑(ji)，其(qi)余各步(bu)操作相(xiang)同(tong))、標(biao)準孔、待(dai)測樣品孔。在酶(mei)標包(bao)被(bei)板(ban)上標準品準確加樣50μl，待(dai)測樣品孔中先加樣品稀(xi)釋液40μl，然(ran)後(hou)再加待測樣品10μl(樣品最終稀(xi)釋度(du)為(wei)5倍(bei))。加樣將(jiang)樣品加於(yu)酶標(biao)板孔底部，盡(jin)量不觸(chu)及(ji)孔(kong)壁，輕(qing)輕(qing)晃動混勻(yun)。

　　3.溫育(yu)：用(yong)封板(ban)膜封板(ban)後(hou)置(zhi)37℃溫育(yu)30分鐘。

　　4.配液：將(jiang)30倍(bei)濃縮(suo)洗(xi)滌液用(yong)蒸(zheng)餾(liu)水30倍(bei)稀(xi)釋後(hou)備用(yong)

　　5.洗(xi)滌：小(xiao)心(xin)揭(jie)掉(diao)封板(ban)膜，棄(qi)去液體，甩幹，每(mei)孔(kong)加滿(man)洗(xi)滌液，靜(jing)置(zhi)30秒後(hou)棄(qi)去，如此重(zhong)復(fu)5次，拍幹。

　　6.加酶：每(mei)孔(kong)加入酶標(biao)試劑(ji)50μl，空白(bai)孔(kong)除(chu)外。

　　7.溫育(yu)：操作同(tong)3。

　　8.洗(xi)滌：操作同(tong)5。

　　9.顯(xian)色(se)：每(mei)孔(kong)先加入顯(xian)色(se)劑(ji)A50μl，再加入顯(xian)色(se)劑(ji)B50μl，輕(qing)輕(qing)震(zhen)蕩(dang)混勻(yun)，37℃避(bi)光(guang)顯(xian)色(se)10分鐘.

　　10.終止：每(mei)孔(kong)加終止液50μl，終止反(fan)應(ying)(此(ci)時(shi)藍(lan)色(se)立(li)轉(zhuan)黃色(se))。

　　11.測定：以空(kong)白孔調零，450nm波(bo)長(chang)依序測量各孔的吸(xi)光(guang)度(du)(OD值)。測定應(ying)在加終止液後(hou)15分鐘以內(nei)進(jin)行。

　　牛(niu)脫氧核(he)糖(tang)核酸(suan)酶I(DNase-I)酶聯(lian)試劑(ji)盒操作程(cheng)序總結：

　　計(ji)算以標(biao)準物(wu)的(de)濃度(du)為(wei)橫坐標(biao)，OD值為(wei)縱坐標(biao)，在坐標(biao)紙(zhi)上繪(hui)出(chu)標(biao)準曲線，根據樣品的OD值由(you)標(biao)準曲線查(zha)出(chu)相(xiang)應的(de)濃度(du);再乘以稀(xi)釋倍(bei)數;或(huo)用(yong)標(biao)準物(wu)的(de)濃度(du)與OD值計(ji)算出(chu)標準曲線的(de)直(zhi)線回(hui)歸方(fang)程(cheng)式，將(jiang)樣品的OD值代入方程(cheng)式，計(ji)算出(chu)樣品濃度(du)，再乘以稀(xi)釋倍(bei)數，即為(wei)樣品的實(shi)際(ji)濃度(du)。

　　註(zhu)意事項(xiang)1.試劑(ji)盒從(cong)冷藏(zang)環(huan)境(jing)中取出(chu)應(ying)在室溫平(ping)衡15-30分鐘後(hou)方可(ke)使(shi)用(yong)，酶(mei)標(biao)包(bao)被(bei)板(ban)開(kai)封後(hou)如未(wei)用(yong)完(wan)，板(ban)條(tiao)應(ying)裝(zhuang)入密(mi)封袋(dai)中保存。2.濃洗(xi)滌液可能(neng)會(hui)有結晶析出，稀(xi)釋時(shi)可在水浴中加溫助溶(rong)，洗(xi)滌時(shi)不影響結果。3.各步(bu)加樣均(jun)應(ying)使用(yong)加樣器(qi)，並經(jing)常校對(dui)其(qi)準確性(xing)，以避(bi)免試驗誤差。壹次加樣時(shi)間(jian)最好控制(zhi)在5分(fen)鐘內(nei)，如(ru)標(biao)本(ben)數量多，推薦使(shi)用(yong)排(pai)槍(qiang)加樣。4.請每(mei)次測定的(de)同(tong)時(shi)做(zuo)標(biao)準曲線，最好做復(fu)孔。如標(biao)本中待測物(wu)質(zhi)含量過高(樣本(ben)OD值大於(yu)標準品孔第(di)壹孔(kong)的(de)OD值)，請先用(yong)樣品稀(xi)釋液稀(xi)釋壹定(ding)倍(bei)數(n倍(bei))後(hou)再測定，計(ji)算時(shi)請最後(hou)乘以總稀(xi)釋倍(bei)數(×n×5)。5.封板(ban)膜只(zhi)限壹次性(xing)使用(yong)，以避(bi)免交叉(cha)汙(wu)染。6.底物(wu)請避光(guang)保(bao)存(cun)。7.嚴(yan)格(ge)按(an)照說(shuo)明(ming)書(shu)的操作進(jin)行，試驗結果判定(ding)必(bi)須(xu)以酶(mei)標儀讀(du)數為(wei)準.8.所(suo)有樣品，洗(xi)滌液和(he)各種廢棄(qi)物(wu)都(dou)應按傳染(ran)物(wu)處(chu)理(li)。9.本(ben)試劑(ji)不同(tong)批號組(zu)分(fen)不得混用(yong)。

　　保(bao)存(cun)條(tiao)件及有效(xiao)期1.試劑(ji)盒保(bao)存(cun)：;2-8℃。2.有效(xiao)期：6個(ge)月(yue)