植(zhi)物(wu)1,5-二磷(lin)酸(suan)核酮糖羧(suo)化酶(mei)(RubisCO)酶(mei)聯(lian)免(mian)疫試(shi)劑(ji)盒(he)說(shuo)明書

　　本(ben)試(shi)劑(ji)盒(he)僅供研究(jiu)使(shi)用。

　　檢測範(fan)圍：

　　96T

　　4.5ng/L -160 ng/L

　　使用(yong)目(mu)的：

　　本(ben)試(shi)劑(ji)盒(he)用(yong)於測(ce)定植(zhi)物(wu)組(zu)織，細胞及(ji)其它相(xiang)關(guan)樣本(ben)中 1,5-二(er)磷(lin)酸(suan)核酮糖羧(suo)化酶(mei)

　　(RubisCO)含(han)量。

　　實(shi)驗(yan)原理(li)

　　本(ben)試(shi)劑(ji)盒(he)應(ying)用雙抗(kang)體夾(jia)心法測(ce)定標本(ben)中植(zhi)物(wu) 1,5-二磷(lin)酸(suan)核酮糖羧(suo)化酶(mei)(RubisCO)水平(ping)。 用(yong)純化的植(zhi)物(wu) 1,5-二磷(lin)酸(suan)核酮糖羧(suo)化酶(mei)(RubisCO)抗(kang)體包(bao)被微孔(kong)板(ban)，制(zhi)成固相抗(kang)體，往(wang)包(bao) 被單(dan)抗(kang)的微(wei)孔中依(yi)次加入植(zhi)物(wu) 1,5-二磷(lin)酸(suan)核酮糖羧(suo)化酶(mei)(RubisCO)，再(zai)與 HRP 標(biao)記(ji)的(de) 1,5- 二磷(lin)酸(suan)核酮糖羧(suo)化酶(mei)(RubisCO)抗(kang)體結(jie)合，形成抗(kang)體-抗(kang)原-酶(mei)標(biao)抗(kang)體復合物(wu)，經(jing)過*洗 滌(di)後(hou)加底(di)物(wu) TMB 顯色(se)。TMB 在(zai) HRP 酶(mei)的(de)催化下轉化成藍色，並在(zai)酸的(de)作(zuo)用(yong)下轉化成最(zui)終(zhong) 的(de)黃(huang)色(se)。顏(yan)色的(de)深(shen)淺(qian)和樣品中的(de)植(zhi)物(wu) 1,5-二磷(lin)酸(suan)核酮糖羧(suo)化酶(mei)(RubisCO)呈(cheng)正(zheng)相(xiang)關(guan)。用酶(mei) 標(biao)儀(yi)在(zai) 450nm 波長下測定吸光(guang)度(du)(OD 值)，通過標準曲(qu)線計(ji)算樣品中植(zhi)物(wu) 1,5-二磷(lin)酸(suan)核酮 糖羧(suo)化酶(mei)(RubisCO)濃(nong)度(du)。

　　試(shi)劑(ji)盒(he)組(zu)成

　　1 30 倍濃縮(suo)洗(xi)滌(di)液(ye) 20ml×1 瓶

　　7 終(zhong)止(zhi)液(ye) 6ml×1 瓶(ping) 2 酶(mei)標(biao)試(shi)劑(ji) 6ml×1 瓶(ping)

　　8 標(biao)準品(300ng/L) 0.5ml×1 瓶 3 酶(mei)標(biao)包(bao)被板(ban) 12 孔(kong)×8 條(tiao)

　　9 標準品稀釋液(ye) 1.5ml×1 瓶 4 樣品稀釋液(ye) 6ml×1 瓶

　　10 說(shuo)明(ming)書 1 份(fen) 5 顯(xian)色(se)劑(ji) A 液(ye) 6ml×1 瓶(ping)

　　11 封板(ban)膜(mo) 2 張 6 顯色劑(ji) B 液(ye) 6ml×1/瓶(ping)

　　12 密封袋(dai) 1 個

　　標本(ben)要求(qiu)

　　1.標本(ben)采集(ji)後盡早(zao)進(jin)行(xing)提(ti)取(qu)，提取(qu)按(an)相關(guan)文獻(xian)進(jin)行(xing)，提(ti)取(qu)後應(ying)盡快(kuai)進行(xing)實(shi)驗(yan)。若(ruo)不(bu)能(neng) 馬上(shang)進(jin)行(xing)試(shi)驗(yan)，可將(jiang)標本(ben)放於-20℃保存，但應(ying)避(bi)免(mian)反復凍(dong)融(rong)

　　2.不(bu)能(neng)檢測含(han) NaN3 的樣品，因(yin) NaN3 抑(yi)制(zhi)辣根過(guo)氧化物(wu)酶(mei)的(de)(HRP)活(huo)性(xing)。

　　操作(zuo)步(bu)驟(zhou)

　　1. 標(biao)準(zhun)品的稀釋：本(ben)試(shi)劑(ji)盒(he)提(ti)供原倍標準(zhun)品壹(yi)支(zhi)，用(yong)戶(hu)可按(an)照(zhao)下列圖表在(zai)小試(shi)管(guan)中進(jin)行(xing)稀 釋。

　　150ng/L

　　5 號(hao)標準(zhun)品

　　150μl 的原倍標準(zhun)品加入 150μl 標準(zhun)品稀釋液(ye)

　　75ng/L

　　4 號標(biao)準(zhun)品

　　150μl 的 5 號(hao)標(biao)準品加入 150μl 標準(zhun)品稀釋液(ye)

　　37.5ng/L

　　3 號標(biao)準(zhun)品

　　150μl 的 4 號(hao)標(biao)準品加入 150μl 標準(zhun)品稀釋液(ye)

　　18.75 ng/L

　　2 號標(biao)準(zhun)品

　　150μl 的 3 號(hao)標(biao)準品加入 150μl 標準(zhun)品稀釋液(ye)

　　9.375 ng/L

　　1 號標(biao)準(zhun)品

　　150μl 的 2 號(hao)標(biao)準品加入 150μl 標準(zhun)品稀釋液(ye)2. 加樣：分別(bie)設(she)空白(bai)孔(kong)(空白(bai)對(dui)照(zhao)孔(kong)不(bu)加樣品及(ji)酶(mei)標(biao)試(shi)劑(ji)，其余各(ge)步(bu)操作(zuo)相(xiang)同)、標(biao)準(zhun)孔(kong)、 待測樣品孔。在(zai)酶(mei)標(biao)包(bao)被板(ban)上(shang)標(biao)準(zhun)品準確(que)加樣 50μl，待測樣品孔中(zhong)先(xian)加樣品稀釋液(ye) 40μl， 然後(hou)再(zai)加待測樣品 10μl(樣品最(zui)終(zhong)稀釋度(du)為(wei) 5 倍)。加樣將(jiang)樣品加於(yu)酶(mei)標(biao)板(ban)孔(kong)底部，盡(jin) 量不(bu)觸(chu)及(ji)孔壁(bi)，輕(qing)輕(qing)晃(huang)動混勻。

　　3. 溫育：用封板(ban)膜(mo)封板(ban)後(hou)置 37℃溫育 30 分鐘(zhong)。

　　4. 配液(ye)：將(jiang) 30 倍濃縮(suo)洗(xi)滌(di)液(ye)用蒸餾水 30 倍稀釋後(hou)備用(yong)

　　5. 洗(xi)滌(di)：小(xiao)心揭(jie)掉(diao)封板(ban)膜(mo)，棄去液體，甩幹，每(mei)孔加滿(man)洗(xi)滌(di)液(ye)，靜(jing)置 30 秒(miao)後棄去，如此 重復 5 次，拍幹。

　　6. 加酶(mei)：每(mei)孔加入酶(mei)標(biao)試(shi)劑(ji) 50μl，空白(bai)孔(kong)除外。

　　7. 溫育：操作同(tong) 3。

　　8. 洗滌(di)：操(cao)作同 5。

　　9. 顯(xian)色(se)：每(mei)孔先(xian)加入顯色(se)劑(ji) A50μl，再(zai)加入顯色(se)劑(ji) B50μl，輕(qing)輕(qing)震蕩混勻，37℃避(bi)光顯色(se)

　　10 分鐘(zhong).

　　10. 終(zhong)止(zhi)：每(mei)孔加終(zhong)止(zhi)液(ye) 50μl，終(zhong)止(zhi)反應(ying)(此時藍(lan)色(se)立轉黃(huang)色(se))。

　　11. 測(ce)定：以(yi)空白(bai)孔(kong)調零，450nm 波(bo)長依(yi)序(xu)測(ce)量各(ge)孔(kong)的吸(xi)光(guang)度(du)(OD 值)。 測定應(ying)在(zai)加終(zhong)止(zhi) 液(ye)後(hou) 15 分鐘(zhong)以內進(jin)行(xing)。

　　操(cao)作程序(xu)總(zong)結(jie)：

　　計(ji)算以(yi)標準(zhun)物(wu)的濃(nong)度(du)為(wei)橫坐(zuo)標，OD 值為縱(zong)坐(zuo)標，在(zai)坐(zuo)標紙(zhi)上(shang)繪(hui)出標準(zhun)曲(qu)線，根據(ju)樣品的 OD 值由標準(zhun)曲(qu)線查(zha)出相應(ying)的濃(nong)度(du);再(zai)乘以稀釋倍數;或(huo)用(yong)標(biao)準(zhun)物(wu)的濃(nong)度(du)與(yu) OD 值計(ji)算出標 準(zhun)曲(qu)線的直(zhi)線回歸方(fang)程式(shi)，將(jiang)樣品的 OD 值代(dai)入方(fang)程式(shi)，計(ji)算出樣品濃度(du)，再(zai)乘以稀釋倍數， 即為(wei)樣品的實(shi)際(ji)濃(nong)度(du)。

　　植(zhi)物(wu)1,5-二磷(lin)酸(suan)核酮糖羧(suo)化酶(mei)(RubisCO)酶(mei)聯(lian)免(mian)疫試(shi)劑(ji)盒(he)說(shuo)明書

　　註(zhu)意(yi)事(shi)項：

　　1.試(shi)劑(ji)盒(he)從(cong)冷(leng)藏環(huan)境(jing)中(zhong)取(qu)出應(ying)在(zai)室(shi)溫平(ping)衡(heng) 15-30 分鐘(zhong)後方(fang)可使(shi)用，酶(mei)標(biao)包(bao)被板(ban)開封後(hou)如未(wei) 用完(wan)，板(ban)條(tiao)應(ying)裝入密封袋(dai)中保存。

　　2.濃洗滌(di)液(ye)可能(neng)會(hui)有結(jie)晶(jing)析(xi)出，稀釋時(shi)可在(zai)水浴(yu)中加溫(wen)助溶(rong)，洗(xi)滌(di)時(shi)不(bu)影(ying)響(xiang)結(jie)果(guo)。

　　3.各(ge)步(bu)加樣均應(ying)使用(yong)加樣器(qi)，並經(jing)常校對(dui)其準確(que)性(xing)，以避(bi)免(mian)試(shi)驗(yan)誤差。壹(yi)次加樣時間(jian)最(zui)好(hao)

　　控(kong)制(zhi)在(zai) 5 分鐘(zhong)內，如(ru)標(biao)本(ben)數量多，推(tui)薦使用排(pai)槍(qiang)加樣。

　　4. 請每(mei)次測定的同(tong)時(shi)做(zuo)標準(zhun)曲(qu)線，最(zui)好(hao)做(zuo)復孔(kong)。如(ru)標本(ben)中待測物(wu)質(zhi)含(han)量過高(樣本(ben) OD 值 大於標(biao)準(zhun)品孔第(di)壹(yi)孔的(de) OD 值)，請先用樣品稀釋液(ye)稀釋壹(yi)定倍數(n 倍)後再(zai)測定(ding)，計(ji) 算時(shi)請最(zui)後(hou)乘以總(zong)稀釋倍數(×n×5)。

　　5. 封板(ban)膜(mo)只(zhi)限(xian)壹(yi)次性(xing)使用(yong)，以(yi)避(bi)免(mian)交叉(cha)汙染。

　　6.底物(wu)請避(bi)光保存。

　　7.嚴(yan)格(ge)按(an)照(zhao)說(shuo)明(ming)書的操(cao)作進(jin)行(xing)，試(shi)驗(yan)結(jie)果(guo)判(pan)定必須以(yi)酶(mei)標(biao)儀(yi)讀(du)數(shu)為準(zhun).

　　8.所(suo)有樣品，洗滌(di)液(ye)和各(ge)種廢(fei)棄物(wu)都應(ying)按(an)傳染物(wu)處理(li)。

　　9.本(ben)試(shi)劑(ji)不(bu)同(tong)批(pi)號(hao)組(zu)分不(bu)得(de)混用。

　　保存條(tiao)件及(ji)有效(xiao)期(qi)

　　1.試(shi)劑(ji)盒(he)保存：;2-8℃。

　　2.有效(xiao)期(qi)：6 個月(yue)