人葉黃素(su)(Lutein)酶聯(lian)免疫分析試劑盒使(shi)用說(shuo)明(ming)書(shu)

本試劑盒僅供(gong)研(yan)究(jiu)使(shi)用。

檢測(ce)範(fan)圍：

96T

3pg/ml-180pg/ml

使(shi)用目(mu)的：

本(ben)試劑盒用於測(ce)定人血(xue)清、血(xue)漿(jiang)及(ji)相(xiang)關(guan)液(ye)體樣本中葉黃(huang)素(su)(Lutein)含量(liang)。

實驗原(yuan)理

本試劑盒應用雙抗(kang)體夾心法測(ce)定標本(ben)中人葉(ye)黃素(su)(Lutein)水(shui)平(ping)。用(yong)純化(hua)的葉(ye)黃(huang)素(su) (Lutein)抗體包被(bei)微孔板(ban)，制成固相抗體，往包被(bei)單(dan)抗(kang)的微孔中依次(ci)加入(ru)葉黃(huang)素(su)(Lutein)， 再與(yu) HRP 標記(ji)的葉(ye)黃(huang)素(su)(Lutein)抗體結(jie)合，形(xing)成抗體-抗原-酶標抗(kang)體復合物，經過*洗 滌後(hou)加底(di)物(wu) TMB 顯色(se)。TMB 在 HRP 酶(mei)的催化(hua)下轉(zhuan)化(hua)成藍色(se)，並(bing)在酸(suan)的作(zuo)用(yong)下轉(zhuan)化(hua)成最終(zhong) 的黃(huang)色(se)。顏色的深(shen)淺和(he)樣品(pin)中的葉(ye)黃(huang)素(su)(Lutein)呈正相關(guan)。用(yong)酶標儀(yi)在 450nm 波長(chang)下測(ce)定 吸(xi)光(guang)度(du)(OD 值)，通(tong)過(guo)標準(zhun)曲線(xian)計(ji)算(suan)樣品(pin)中人葉(ye)黃素(su)(Lutein)濃(nong)度。

試劑盒組成

1 30 倍濃(nong)縮(suo)洗(xi)滌(di)液(ye) 20ml×1 瓶 7 終(zhong)止液(ye) 6ml×1 瓶 2 酶標試劑 6ml×1 瓶 8 標準(zhun)品(pin)(320pg/ml) 0.5ml×1 瓶(ping) 3 酶標包(bao)被(bei)板(ban)

12 孔(kong)×8 條 9 標準(zhun)品(pin)稀(xi)釋(shi)液(ye) 1.5ml×1 瓶(ping) 4 樣品(pin)稀(xi)釋(shi)液(ye) 6ml×1 瓶(ping) 10 說明(ming)書(shu) 1 份(fen) 5 顯色(se)劑 A 液(ye) 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 張 6 顯色(se)劑 B 液(ye) 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個(ge)

標本(ben)要(yao)求(qiu)

1.標本(ben)采集後(hou)盡(jin)早進(jin)行(xing)提取，提取按相關(guan)文(wen)獻(xian)進行，提取後(hou)應(ying)盡(jin)快(kuai)進(jin)行(xing)實驗。若(ruo)不能(neng) 馬上進行(xing)試驗，可(ke)將(jiang)標本(ben)放(fang)於-20℃保存，但應避(bi)免(mian)反復(fu)凍融

2.不能(neng)檢測(ce)含 NaN3 的樣品(pin)，因(yin) NaN3 抑制辣(la)根過氧化(hua)物酶(mei)的(HRP)活性。

操作(zuo)步(bu)驟

1. 標準(zhun)品(pin)的稀(xi)釋(shi)：本(ben)試劑盒提供(gong)原(yuan)倍標準(zhun)品(pin)壹(yi)支，用戶可按照下列(lie)圖表在小試管中進行(xing)稀(xi) 釋(shi)。

160pg/ml

5 號標準(zhun)品(pin)

150μl 的原(yuan)倍標準(zhun)品(pin)加入(ru) 150μl 標準(zhun)品(pin)稀(xi)釋(shi)液(ye)

80pg/ml

4 號標準(zhun)品(pin)

150μl 的 5 號標準(zhun)品(pin)加入(ru) 150μl 標準(zhun)品(pin)稀(xi)釋(shi)液(ye)

40pg/ml

3 號標準(zhun)品(pin)

150μl 的 4 號標準(zhun)品(pin)加入(ru) 150μl 標準(zhun)品(pin)稀(xi)釋(shi)液(ye)

20pg/ml

2 號標準(zhun)品(pin)

150μl 的 3 號標準(zhun)品(pin)加入(ru) 150μl 標準(zhun)品(pin)稀(xi)釋(shi)液(ye)

10pg/ml

1 號標準(zhun)品(pin)

150μl 的 2 號標準(zhun)品(pin)加入(ru) 150μl 標準(zhun)品(pin)稀(xi)釋(shi)液(ye)

2. 加樣：分別(bie)設(she)空白(bai)孔(kong)(空(kong)白對照孔(kong)不加樣品(pin)及(ji)酶標試劑，其余各步操作(zuo)相(xiang)同)、標準(zhun)孔(kong)、 待測(ce)樣品(pin)孔(kong)。在酶標包(bao)被(bei)板(ban)上標準(zhun)品(pin)準(zhun)確(que)加樣 50μl，待測(ce)樣品(pin)孔(kong)中先加樣品(pin)稀(xi)釋(shi)液(ye) 40μl，然後(hou)再(zai)加待(dai)測(ce)樣品(pin) 10μl(樣品(pin)最(zui)終(zhong)稀(xi)釋(shi)度(du)為(wei) 5 倍)。加樣將(jiang)樣品(pin)加於酶標板(ban)孔(kong)底(di)部(bu)，盡(jin) 量不觸(chu)及孔壁(bi)，輕輕晃動混勻。

3. 溫育(yu)：用(yong)封板膜封板後(hou)置(zhi) 37℃溫育(yu) 30 分(fen)鐘。

4. 配(pei)液：將(jiang) 30 倍濃(nong)縮(suo)洗(xi)滌(di)液(ye)用蒸餾(liu)水(shui) 30 倍稀(xi)釋(shi)後(hou)備(bei)用(yong)

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄(qi)去液體，甩幹，每(mei)孔(kong)加滿(man)洗(xi)滌(di)液(ye)，靜(jing)置(zhi) 30 秒(miao)後(hou)棄(qi)去，如此 重復 5 次(ci)，拍幹。

6. 加酶(mei)：每(mei)孔(kong)加入(ru)酶標試劑 50μl，空白孔(kong)除(chu)外(wai)。

7. 溫育(yu)：操作(zuo)同 3。

8. 洗(xi)滌(di)：操作(zuo)同 5。

9. 顯色(se)：每(mei)孔(kong)先加入(ru)顯色(se)劑 A50μl，再(zai)加入(ru)顯色(se)劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避(bi)光(guang)顯色(se)

10 分鐘.

10. 終(zhong)止：每(mei)孔(kong)加終(zhong)止液(ye) 50μl，終(zhong)止反(fan)應(此時(shi)藍色(se)立(li)轉(zhuan)黃(huang)色(se))。

11. 測(ce)定：以空(kong)白(bai)孔(kong)調(tiao)零，450nm 波長(chang)依序(xu)測(ce)量各(ge)孔(kong)的吸(xi)光(guang)度(du)(OD 值)。 測(ce)定應在(zai)加終(zhong)止

液(ye)後(hou) 15 分(fen)鐘以(yi)內(nei)進(jin)行(xing)。

操作(zuo)程(cheng)序(xu)總(zong)結(jie)：

計(ji)算(suan)

以標準(zhun)物(wu)的濃(nong)度為(wei)橫坐(zuo)標，OD 值(zhi)為(wei)縱(zong)坐標，在(zai)坐(zuo)標紙(zhi)上繪出(chu)標準(zhun)曲線(xian)，根據樣品(pin)的 OD 值(zhi)由(you)標準(zhun)曲線(xian)查(zha)出(chu)相應(ying)的濃(nong)度;再(zai)乘以稀(xi)釋(shi)倍數(shu);或用(yong)標準(zhun)物(wu)的濃(nong)度與(yu) OD 值計算(suan)出(chu)標 準(zhun)曲線(xian)的直(zhi)線(xian)回(hui)歸(gui)方程(cheng)式(shi)，將(jiang)樣品(pin)的 OD 值(zhi)代(dai)入(ru)方程(cheng)式(shi)，計(ji)算(suan)出(chu)樣品(pin)濃(nong)度，再(zai)乘以稀(xi)釋(shi)倍數(shu)，即為(wei)樣品(pin)的實(shi)際濃(nong)度。

註意事(shi)項

1.試劑盒從冷藏環境(jing)中取出(chu)應在(zai)室溫平(ping)衡 15-30 分(fen)鐘後(hou)方(fang)可(ke)使(shi)用，酶(mei)標包(bao)被(bei)板(ban)開(kai)封後(hou)如未 用完，板(ban)條應裝(zhuang)入(ru)密封袋中保存(cun)。

2.濃(nong)洗滌(di)液可能(neng)會(hui)有(you)結(jie)晶(jing)析出(chu)，稀(xi)釋(shi)時(shi)可(ke)在(zai)水(shui)浴(yu)中加溫助溶(rong)，洗滌(di)時(shi)不影(ying)響(xiang)結(jie)果(guo)。

3.各步加樣均(jun)應使(shi)用加樣器(qi)，並(bing)經常(chang)校(xiao)對其準(zhun)確(que)性，以避(bi)免(mian)試驗誤(wu)差。壹(yi)次(ci)加樣時(shi)間最(zui)好 控制在(zai) 5 分(fen)鐘內(nei)，如標本(ben)數(shu)量多，推(tui)薦(jian)使(shi)用排(pai)槍(qiang)加樣。

4. 請每(mei)次(ci)測(ce)定的同時(shi)做標準(zhun)曲線(xian)，最(zui)好(hao)做復(fu)孔(kong)。如標本(ben)中待測(ce)物質(zhi)含(han)量(liang)過高(樣本 OD 值(zhi) 大於標準(zhun)品(pin)孔(kong)第(di)壹孔(kong)的 OD 值(zhi))，請(qing)先(xian)用(yong)樣品(pin)稀(xi)釋(shi)液(ye)稀(xi)釋(shi)壹(yi)定倍數(shu)(n 倍)後(hou)再(zai)測(ce)定，計 算(suan)時(shi)請(qing)最(zui)後(hou)乘(cheng)以(yi)總(zong)稀(xi)釋(shi)倍數(shu)(×n×5)。

5. 封板膜只(zhi)限(xian)壹(yi)次(ci)性使(shi)用，以(yi)避(bi)免(mian)交叉汙(wu)染(ran)。

6.底物(wu)請避(bi)光(guang)保(bao)存。

7.嚴(yan)格按照說(shuo)明(ming)書(shu)的操作(zuo)進(jin)行，試驗結(jie)果(guo)判定必須(xu)以(yi)酶(mei)標儀(yi)讀數(shu)為準(zhun).

8.所有(you)樣品(pin)，洗(xi)滌液和(he)各種(zhong)廢棄物都應按傳(chuan)染(ran)物處理。

9.本試劑不同批(pi)號組分(fen)不得混用。

人葉(ye)黃素(su)(Lutein)酶聯(lian)免疫分析試劑盒

保存條件(jian)及有(you)效(xiao)期(qi)

1.試劑盒保存：;2-8℃。

2.有效(xiao)期(qi)：6 個月(yue)