犬糖連(lian)抗(kang)原(yuan)153(CA153)酶(mei)聯(lian)免疫(yi)分析(xi)試劑(ji)盒說明書

本(ben)試劑(ji)盒僅(jin)供(gong)研(yan)究(jiu)使(shi)用(yong)。

檢(jian)測範圍(wei)：

96T

0.1U/ml - 5U/ml

使(shi)用(yong)目(mu)的(de)：

本(ben)試劑(ji)盒用(yong)於(yu)測定犬血(xue)清、血(xue)漿及相關液(ye)體(ti)樣本(ben)中(zhong)糖連(lian)抗(kang)原(yuan) 153(CA153)含(han)量(liang)。

實(shi)驗(yan)原(yuan)理(li)

本(ben)試劑(ji)盒應(ying)用(yong)雙(shuang)抗體(ti)夾(jia)心法(fa)測定標(biao)本(ben)中(zhong)犬糖連(lian)抗(kang)原(yuan) 153(CA153)水平。用(yong)純(chun)化(hua)的(de)犬糖連(lian)抗(kang)原(yuan) 153(CA153)抗(kang)體(ti)包(bao)被微(wei)孔(kong)板(ban)，制(zhi)成(cheng)固相抗體(ti)，往(wang)包被單抗的(de)微孔(kong)中(zhong)依(yi)次加(jia)入糖連(lian)抗(kang)原(yuan) 153(CA153)，再(zai)與(yu) HRP 標(biao)記的(de)糖連(lian)抗(kang)原(yuan) 153(CA153)抗(kang)體(ti)結(jie)合，形(xing)成(cheng)抗(kang)體(ti)-抗(kang)原(yuan)-酶(mei)標(biao)抗(kang)體(ti)復(fu)合物(wu)，經過*洗滌後加(jia)底物(wu) TMB 顯(xian)色。TMB 在 HRP 酶(mei)的(de)催(cui)化(hua)下(xia)轉化(hua)成(cheng)藍色，並在(zai)酸的(de)作用(yong)下(xia)轉化(hua)成(cheng)最終的(de)黃色。顏色的(de)深淺(qian)和樣品(pin)中(zhong)的(de)糖連(lian)抗(kang)原(yuan) 153(CA153)呈(cheng)正(zheng)相關。用(yong)酶(mei)標(biao)儀在(zai) 450nm 波(bo)長(chang)下(xia)測定吸(xi)光度(du)(OD 值(zhi))，通過標(biao)準曲線(xian)計(ji)算(suan)樣品(pin)中(zhong)犬糖連(lian)抗(kang)原(yuan)153(CA153)濃(nong)度(du)。

試劑(ji)盒組(zu)成(cheng)

130 倍濃縮洗滌液

20ml×1 瓶(ping)

7終止(zhi)液6ml×1 瓶(ping)2

酶(mei)標(biao)試劑(ji)6ml×1 瓶(ping)8標(biao)準品(pin)(8U/ml)0.5ml×1 瓶(ping)

3酶(mei)標(biao)包(bao)被板(ban)12 孔(kong)×8 條(tiao)9

標(biao)準品(pin)稀(xi)釋(shi)液1.5ml×1 瓶(ping)

4樣品(pin)稀(xi)釋(shi)液6ml×1 瓶(ping)

10說明書1 份(fen)5

顯色劑(ji) A 液6ml×1 瓶(ping)11

封(feng)板(ban)膜2 張(zhang)6

顯(xian)色劑(ji) B 液

6ml×1/瓶(ping)12

密封(feng)袋(dai)1 個(ge)

標(biao)本(ben)要(yao)求

1.標(biao)本(ben)采(cai)集(ji)後(hou)盡(jin)早進(jin)行(xing)提取，提取按(an)相關文(wen)獻進(jin)行(xing)，提取後(hou)應(ying)盡(jin)快進(jin)行(xing)實(shi)驗(yan)。若不能

馬上進(jin)行(xing)試驗(yan)，可將(jiang)標(biao)本(ben)放於(yu)-20℃保(bao)存(cun)，但應(ying)避(bi)免(mian)反(fan)復凍融(rong)

2.不能檢測含(han) NaN3 的(de)樣品(pin)，因(yin) NaN3 抑制辣根過氧(yang)化(hua)物(wu)酶(mei)的(de)(HRP)活性。

操(cao)作(zuo)步(bu)驟

1. 標(biao)準品(pin)的(de)稀(xi)釋(shi)：本(ben)試劑(ji)盒提供原(yuan)倍標(biao)準品(pin)壹支，用(yong)戶(hu)可按(an)照下(xia)列(lie)圖表在小試管(guan)中(zhong)進(jin)行(xing)稀(xi)

釋(shi)。

4U/ml

5 號標(biao)準品(pin)

150μl 的(de)原(yuan)倍標(biao)準品(pin)加(jia)入 150μl 標(biao)準品(pin)稀(xi)釋(shi)液

2U/ml

4 號(hao)標(biao)準品(pin)

150μl 的(de) 5 號標(biao)準品(pin)加(jia)入 150μl 標(biao)準品(pin)稀(xi)釋(shi)液

1U/ml

3 號(hao)標(biao)準品(pin)

150μl 的(de) 4 號標(biao)準品(pin)加(jia)入 150μl 標(biao)準品(pin)稀(xi)釋(shi)液

0.5U/ml

2 號(hao)標(biao)準品(pin)

150μl 的(de) 3 號標(biao)準品(pin)加(jia)入 150μl 標(biao)準品(pin)稀(xi)釋(shi)液

0.25U/ml

1 號(hao)標(biao)準品(pin)

150μl 的(de) 2 號標(biao)準品(pin)加(jia)入 150μl 標(biao)準品(pin)稀(xi)釋(shi)液

2. 加(jia)樣：分(fen)別設(she)空白孔(kong)(空(kong)白(bai)對照孔(kong)不加(jia)樣品(pin)及酶(mei)標(biao)試劑(ji)，其(qi)余(yu)各(ge)步(bu)操作(zuo)相同)、標(biao)準孔(kong)、待(dai)測樣品(pin)孔(kong)。在(zai)酶(mei)標(biao)包(bao)被板(ban)上標(biao)準品(pin)準確加(jia)樣 50μl，待(dai)測樣品(pin)孔(kong)中(zhong)先(xian)加(jia)樣品(pin)稀(xi)釋(shi)液 40μl，然(ran)後(hou)再加(jia)待測樣品(pin) 10μl(樣品(pin)最終稀(xi)釋(shi)度(du)為(wei) 5 倍)。加(jia)樣將(jiang)樣品(pin)加(jia)於(yu)酶(mei)標(biao)板(ban)孔(kong)底(di)部(bu)，盡(jin)量(liang)不觸及孔(kong)壁(bi)，輕(qing)輕(qing)晃動混勻(yun)。

3. 溫育(yu)：用(yong)封(feng)板(ban)膜封(feng)板(ban)後置 37℃溫育(yu) 30 分(fen)鐘。

4. 配液：將(jiang) 30 倍濃縮洗滌液用(yong)蒸(zheng)餾(liu)水 30 倍稀(xi)釋(shi)後備(bei)用(yong)

5. 洗滌：小心揭(jie)掉封(feng)板(ban)膜，棄(qi)去液體(ti)，甩(shuai)幹(gan)，每(mei)孔(kong)加(jia)滿洗滌液，靜(jing)置 30 秒後(hou)棄(qi)去，如(ru)此

重復(fu) 5 次，拍幹(gan)。

6. 加(jia)酶(mei)：每(mei)孔(kong)加(jia)入酶(mei)標(biao)試劑(ji) 50μl，空白(bai)孔(kong)除外(wai)。

7. 溫育(yu)：操(cao)作同 3。

8. 洗滌：操作(zuo)同 5。

9. 顯(xian)色：每孔(kong)先(xian)加(jia)入顯色劑(ji) A50μl，再加(jia)入顯色劑(ji) B50μl，輕(qing)輕(qing)震(zhen)蕩(dang)混(hun)勻(yun)，37℃避(bi)光顯色

10 分鐘.

10. 終止(zhi)：每孔(kong)加(jia)終止(zhi)液 50μl，終止(zhi)反(fan)應(ying)(此(ci)時(shi)藍色立(li)轉黃色)。

11. 測定：以(yi)空白(bai)孔(kong)調(tiao)零，450nm 波長依(yi)序測量(liang)各(ge)孔(kong)的(de)吸(xi)光度(du)(OD 值(zhi))。 測定應(ying)在(zai)加(jia)終止(zhi)

液後(hou) 15 分鐘以內進(jin)行(xing)。

操作(zuo)程(cheng)序(xu)總(zong)結(jie)：

計(ji)算(suan)

以標(biao)準物(wu)的(de)濃度(du)為(wei)橫(heng)坐標(biao)，OD 值(zhi)為(wei)縱坐標(biao)，在(zai)坐(zuo)標(biao)紙上繪(hui)出標(biao)準曲線(xian)，根據樣品(pin)的(de)OD 值(zhi)由(you)標(biao)準曲線(xian)查出(chu)相應(ying)的(de)濃度(du);再(zai)乘以(yi)稀(xi)釋(shi)倍數;或用(yong)標(biao)準物(wu)的(de)濃度(du)與(yu) OD 值(zhi)計(ji)算(suan)出標(biao)準曲線(xian)的(de)直線(xian)回歸(gui)方(fang)程(cheng)式(shi)，將(jiang)樣品(pin)的(de) OD 值(zhi)代(dai)入方(fang)程(cheng)式(shi)，計(ji)算(suan)出樣品(pin)濃(nong)度(du)，再(zai)乘以(yi)稀(xi)釋(shi)倍數，即為(wei)樣品(pin)的(de)實(shi)際(ji)濃度(du)。

註(zhu)意(yi)事(shi)項(xiang)

1.試劑(ji)盒從冷藏(zang)環(huan)境中取(qu)出(chu)應(ying)在(zai)室溫平衡(heng) 15-30 分鐘後方(fang)可使(shi)用(yong)，酶(mei)標(biao)包(bao)被板(ban)開封(feng)後(hou)如(ru)未(wei)用(yong)完(wan)，板(ban)條(tiao)應(ying)裝(zhuang)入密封(feng)袋(dai)中保(bao)存(cun)。

2.濃洗滌液可能會有(you)結(jie)晶(jing)析(xi)出，稀(xi)釋(shi)時(shi)可在(zai)水浴(yu)中加(jia)溫助(zhu)溶(rong)，洗滌時(shi)不影響(xiang)結(jie)果。

3.各(ge)步(bu)加(jia)樣均(jun)應(ying)使(shi)用(yong)加(jia)樣器(qi)，並(bing)經常(chang)校對其(qi)準確性，以(yi)避(bi)免(mian)試驗(yan)誤(wu)差(cha)。壹次加(jia)樣時(shi)間最好(hao)控制(zhi)在(zai) 5 分鐘內，如(ru)標(biao)本(ben)數量(liang)多(duo)，推(tui)薦使(shi)用(yong)排槍(qiang)加(jia)樣。

4. 請(qing)每(mei)次測定的(de)同時(shi)做標(biao)準曲線(xian)，最好(hao)做(zuo)復孔(kong)。如(ru)標(biao)本(ben)中(zhong)待測物(wu)質含(han)量(liang)過高(樣本(ben) OD 值(zhi)大(da)於(yu)標(biao)準品(pin)孔(kong)第(di)壹孔(kong)的(de) OD 值(zhi))，請(qing)先(xian)用(yong)樣品(pin)稀(xi)釋(shi)液稀(xi)釋(shi)壹定倍數(n 倍)後再(zai)測定，計(ji)算(suan)時(shi)請最後(hou)乘以(yi)總(zong)稀(xi)釋(shi)倍數(×n×5)。

5. 封(feng)板(ban)膜只(zhi)限壹次性使(shi)用(yong)，以(yi)避(bi)免(mian)交(jiao)叉汙(wu)染。

6.底(di)物(wu)請(qing)避(bi)光(guang)保(bao)存(cun)。

7.嚴(yan)格(ge)按(an)照說明書的(de)操作(zuo)進(jin)行(xing)，試驗(yan)結(jie)果判定(ding)必須(xu)以(yi)酶(mei)標(biao)儀讀數為(wei)準.

8.所有樣品(pin)，洗滌液和(he)各(ge)種(zhong)廢(fei)棄(qi)物(wu)都(dou)應(ying)按(an)傳(chuan)染物(wu)處(chu)理(li)。

9.本(ben)試劑(ji)不同批(pi)號組(zu)分不得(de)混用(yong)。

犬糖連(lian)抗(kang)原(yuan)153(CA153)酶(mei)聯(lian)免疫(yi)分析(xi)試劑(ji)盒說明書

保(bao)存(cun)條件(jian)及有效(xiao)期

1.試劑(ji)盒保(bao)存(cun)：;2-8℃。

2.有效(xiao)期：6 個(ge)月(yue)