小鼠狂犬病毒抗體(ti)(RVAb)酶聯免疫分(fen)析試(shi)劑(ji)盒說(shuo)明書

　　本試(shi)劑(ji)盒僅(jin)供(gong)研究(jiu)使(shi)用(yong)。

　　檢測(ce)範圍(wei)：96T5IU/L-150IU/L使(shi)用(yong)

　　目(mu)的(de)：本試(shi)劑(ji)盒用(yong)於(yu)測(ce)定小鼠血清(qing)、血漿(jiang)及(ji)相關液(ye)體樣本中狂犬病毒抗體(ti)(RVAb)含量(liang)。實(shi)驗(yan)原理本試(shi)劑(ji)盒應(ying)用(yong)雙抗原夾心(xin)法(fa)測定標(biao)本中小鼠狂犬病毒抗體(ti)(RVAb)水(shui)平(ping)。用(yong)純(chun)化(hua)的(de)抗原包(bao)被(bei)微(wei)孔板，制成固相抗原，往包(bao)被(bei)的(de)微孔中依次(ci)加入狂犬病毒抗體(ti)(RVAb)，再與HRP標(biao)記(ji)的(de)抗原結合(he)，形成抗原-抗體(ti)-酶標(biao)抗原復合(he)物，經過*洗滌(di)後加底(di)物TMB顯色。TMB在HRP酶(mei)的(de)催化(hua)下(xia)轉(zhuan)化成藍色，並(bing)在(zai)酸(suan)的(de)作(zuo)用下轉(zhuan)化成終的(de)黃(huang)色。顏色的(de)深淺(qian)和(he)樣品中的(de)狂犬病毒抗體(ti)(RVAb)呈正相關。用(yong)酶標(biao)儀(yi)在450nm波(bo)長(chang)下(xia)測定吸光(guang)度(OD值(zhi))，通(tong)過標準曲線(xian)計(ji)算(suan)樣品中小鼠狂犬病毒抗體(ti)(RVAb)濃度。

　　試(shi)劑(ji)盒組(zu)成

　　130倍(bei)濃縮洗滌(di)液20ml×1瓶(ping)7終(zhong)止液6ml×1瓶(ping)2酶(mei)標試(shi)劑(ji)6ml×1瓶8標(biao)準品(240IU/L)0.5ml×1瓶3酶標包(bao)被(bei)板(ban)12孔×8條9標準品稀釋液1.5ml×1瓶(ping)4樣品稀釋液6ml×1瓶(ping)10說(shuo)明書1份(fen)5顯色劑(ji)A液6ml×1瓶(ping)11封(feng)板(ban)膜(mo)2張(zhang)6顯色劑(ji)B液6ml×1/瓶(ping)12密(mi)封(feng)袋1個(ge)標(biao)本要求1.標本采集(ji)後(hou)盡早進(jin)行(xing)提(ti)取，提取按相關文(wen)獻進(jin)行(xing)，提(ti)取後應(ying)盡(jin)快(kuai)進(jin)行(xing)實(shi)驗(yan)。若不(bu)能(neng)馬上進(jin)行(xing)試(shi)驗，可將(jiang)標本放於(yu)-20℃保存(cun)，但應(ying)避(bi)免反復(fu)凍融(rong)2.不能(neng)檢測(ce)含NaN3的(de)樣品，因NaN3抑(yi)制辣根過氧(yang)化物酶的(de)(HRP)活(huo)性。

　　操(cao)作(zuo)步(bu)驟(zhou)

　　1.標準品的(de)稀釋：本試(shi)劑(ji)盒提(ti)供(gong)原倍(bei)標(biao)準品壹支(zhi)，用(yong)戶(hu)可(ke)按照(zhao)下(xia)列圖(tu)表(biao)在(zai)小試(shi)管(guan)中(zhong)進(jin)行(xing)稀(xi)釋。120IU/L5號標(biao)準品150μl的(de)原倍(bei)標(biao)準品加入150μl標準品稀釋液60IU/L4號(hao)標準品150μl的(de)5號標(biao)準品加入150μl標準品稀釋液30IU/L3號(hao)標準品150μl的(de)4號標(biao)準品加入150μl標準品稀釋液15IU/L2號(hao)標準品150μl的(de)3號標(biao)準品加入150μl標準品稀釋液7.5IU/L1號(hao)標準品150μl的(de)2號標(biao)準品加入150μl標準品稀釋液2.加樣：分(fen)別(bie)設空(kong)白(bai)孔(空白對照(zhao)孔不加樣品及酶標試(shi)劑(ji)，其余各步(bu)操(cao)作(zuo)相同(tong))、標準孔、待測樣品孔。在酶標包(bao)被(bei)板(ban)上(shang)標(biao)準品準確(que)加樣50μl，待(dai)測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然(ran)後再(zai)加待測(ce)樣品10μl(樣品終稀釋度為(wei)5倍(bei))。加樣將(jiang)樣品加於酶(mei)標(biao)板孔底(di)部，盡(jin)量(liang)不觸及(ji)孔壁，輕輕晃(huang)動混勻(yun)。3.溫育(yu)：用(yong)封(feng)板(ban)膜(mo)封板後置(zhi)37℃溫育(yu)30分(fen)鐘。4.配液：將(jiang)30倍(bei)濃縮洗滌(di)液用(yong)蒸(zheng)餾水(shui)30倍(bei)稀(xi)釋後備(bei)用5.洗(xi)滌(di)：小心揭掉封(feng)板(ban)膜(mo)，棄去液(ye)體(ti)，甩幹，每(mei)孔加滿洗(xi)滌(di)液，靜(jing)置(zhi)30後(hou)棄去，如(ru)此(ci)重復(fu)5次(ci)，拍幹。6.加酶：每(mei)孔加入酶標(biao)試(shi)劑(ji)50μl，空白(bai)孔除外。7.溫育(yu)：操(cao)作(zuo)同(tong)3。8.洗滌(di)：操作(zuo)同(tong)5。9.顯色：每孔先加入顯色劑(ji)A50μl，再加入顯色劑(ji)B50μl，輕輕震蕩混勻(yun)，37℃避(bi)光(guang)顯色10分(fen)鐘.10.終止：每孔加終止液50μl，終(zhong)止反應(ying)(此(ci)時藍(lan)色立轉(zhuan)黃(huang)色)。11.測定：以空白(bai)孔調(tiao)零(ling)，450nm波長(chang)依(yi)序測(ce)量(liang)各孔的(de)吸光(guang)度(OD值(zhi))。測定應(ying)在(zai)加終止液後(hou)15分(fen)鐘以內進(jin)行(xing)。

　　小鼠狂犬病毒抗體(ti)(RVAb)酶聯免疫分(fen)析試(shi)劑(ji)盒說(shuo)明書操(cao)作(zuo)程序總結：

　　計(ji)算(suan)：

　　以標準物的(de)濃度為(wei)橫坐(zuo)標，OD值(zhi)為縱(zong)坐(zuo)標，在(zai)坐(zuo)標紙(zhi)上繪(hui)出標(biao)準曲線(xian)，根(gen)據(ju)樣品的(de)OD值(zhi)由標(biao)準曲線(xian)查(zha)出(chu)相應(ying)的(de)濃度;再(zai)乘(cheng)以稀釋倍(bei)數;或用標(biao)準物的(de)濃度與OD值(zhi)計(ji)算(suan)出標準曲線(xian)的(de)直線(xian)回(hui)歸(gui)方程式(shi)，將(jiang)樣品的(de)OD值(zhi)代(dai)入方程(cheng)式(shi)，計(ji)算(suan)出樣品濃度，再(zai)乘(cheng)以稀釋倍(bei)數，即(ji)為(wei)樣品的(de)實(shi)際(ji)濃度。

　　註意(yi)事項(xiang)

　　1.試(shi)劑(ji)盒從(cong)冷藏環(huan)境中(zhong)取(qu)出應(ying)在(zai)室溫平(ping)衡(heng)15-30分(fen)鐘後方(fang)可使(shi)用(yong)，酶標(biao)包(bao)被(bei)板(ban)開封(feng)後如(ru)未用完，板條應(ying)裝(zhuang)入密封(feng)袋(dai)中保存(cun)。

　　2.濃洗滌(di)液可(ke)能(neng)會(hui)有結(jie)晶(jing)析出，稀釋時可(ke)在水(shui)浴中加溫助溶，洗(xi)滌(di)時不(bu)影(ying)響結果。3.各步(bu)加樣均(jun)應(ying)使(shi)用(yong)加樣器(qi)，並(bing)經常校對其準確(que)性，以避(bi)免試(shi)驗誤(wu)差(cha)。壹次(ci)加樣時(shi)間(jian)好(hao)控(kong)制在(zai)5分(fen)鐘內，如標本數量(liang)多，推(tui)薦使(shi)用(yong)排槍(qiang)加樣。

　　4.請(qing)每次(ci)測(ce)定的(de)同(tong)時做(zuo)標準曲線(xian)，好(hao)做(zuo)復孔。如標本中待(dai)測(ce)物質含量(liang)過高(gao)(樣本OD值(zhi)大於(yu)標準品孔孔的(de)OD值(zhi))，請先(xian)用樣品稀釋液稀(xi)釋壹定倍(bei)數(n倍(bei))後(hou)再(zai)測定，計(ji)算(suan)時請後乘(cheng)以總稀(xi)釋倍(bei)數(×n×5)。

　　5.封(feng)板(ban)膜(mo)只限(xian)壹次(ci)性(xing)使(shi)用(yong)，以避(bi)免交(jiao)叉(cha)汙染(ran)。

　　6.底(di)物請避(bi)光(guang)保存(cun)。

　　7.嚴格(ge)按照(zhao)說(shuo)明書的(de)操作(zuo)進(jin)行(xing)，試(shi)驗結果判(pan)定必(bi)須以酶標(biao)儀(yi)讀數為(wei)準.8.所有樣品，洗滌(di)液和(he)各種廢棄物都應(ying)按傳染(ran)物處理。

　　9.本試(shi)劑(ji)不同(tong)批號(hao)組分(fen)不(bu)得混用(yong)。

　　保存(cun)條件(jian)及有效(xiao)期

　　1.試(shi)劑(ji)盒保存(cun)：;2-8℃。

　　2.有效(xiao)期：6個(ge)月