雞過氧化氫酶（CAT）酶聯免疫分(fen)析(xi)試(shi)劑(ji)盒
本(ben)試(shi)劑(ji)盒僅供(gong)研(yan)究使(shi)用(yong)。
檢測(ce)範圍(wei)：96T
0.6 U/L -16 U/L
使(shi)用目(mu)的：
本(ben)試(shi)劑(ji)盒用於(yu)測(ce)定雞原代(dai)肝(gan)細(xi)胞(bao)樣本(ben)中過氧化氫酶（CAT）含(han)量(liang)。實驗(yan)原理本(ben)試(shi)劑(ji)盒應用(yong)雙(shuang)抗(kang)體夾心(xin)法測(ce)定標(biao)本(ben)中雞過氧化氫酶（CAT）水(shui)平(ping)。用純化的雞過氧化氫酶（CAT）抗體包(bao)被(bei)微孔(kong)板(ban)，制(zhi)成固(gu)相抗(kang)體，往包被(bei)單(dan)抗(kang)的(de)微孔(kong)中(zhong)依(yi)次(ci)加(jia)入過氧化氫酶（CAT），再(zai)與 HRP標(biao)記(ji)的過(guo)氧化氫酶（CAT）抗體結(jie)合(he)，形(xing)成(cheng)抗體-抗(kang)原-酶標(biao)抗(kang)體復(fu)合(he)物(wu)，經過(guo)*洗(xi)滌(di)後加(jia)底物(wu) TMB顯色。TMB在   HRP酶的催(cui)化下轉(zhuan)化成藍(lan)色，並在酸的(de)作(zuo)用(yong)下轉(zhuan)化成最終的(de)黃(huang)色。顏色的深淺和(he)樣品中的(de)過氧化氫酶（CAT）呈正相關(guan)。用酶標(biao)儀在  450nm波(bo)長下(xia)測(ce)定吸(xi)光(guang)度(du)（OD值），通(tong)過(guo)標(biao)準(zhun)曲(qu)線計(ji)算(suan)樣品中雞過氧化氫酶（CAT）濃(nong)度(du)。
雞過氧化氫酶（CAT）酶聯免疫分(fen)析(xi) 試(shi)劑(ji)盒組成(cheng)

標(biao)本(ben)要求
1．標(biao)本(ben)采集後盡(jin)早(zao)進(jin)行(xing)提(ti)取，提(ti)取按(an)相關(guan)文獻(xian)進(jin)行(xing)，提(ti)取後應盡(jin)快(kuai)進(jin)行(xing)實(shi)驗(yan)。若(ruo)不(bu)能馬(ma)上進(jin)行(xing)試(shi)驗，可(ke)將(jiang)標(biao)本(ben)放於-20℃保(bao)存，但應(ying)避(bi)免反復(fu)凍(dong)融(rong)
2．不(bu)能檢測(ce)含(han)NaN3的(de)樣品，因   NaN3抑(yi)制(zhi)辣根(gen)過氧化物(wu)酶的（HRP）活性(xing)。
操(cao)作(zuo)步(bu)驟(zhou)
1.  標(biao)準(zhun)品(pin)的稀(xi)釋：本(ben)試(shi)劑(ji)盒提(ti)供(gong)原倍標(biao)準(zhun)品(pin)壹支(zhi)，用戶(hu)可(ke)按(an)照下列圖(tu)表(biao)在小試(shi)管中進(jin)行(xing)稀(xi)釋。

2.  加(jia)樣：分別設空(kong)白孔(kong)（空白對照孔不(bu)加(jia)樣品及酶標(biao)試(shi)劑(ji)，其余(yu)各(ge)步(bu)操(cao)作(zuo)相同(tong)）、標(biao)準(zhun)孔(kong)、待測(ce)樣品孔。在(zai)酶標(biao)包(bao)被(bei)板(ban)上(shang)標(biao)準(zhun)品(pin)準(zhun)確加(jia)樣 50µl，待測(ce)樣品孔中(zhong)先加(jia)樣品稀(xi)釋液(ye) 40µl，然(ran)後再(zai)加(jia)待測(ce)樣品 10µl（樣品最終稀(xi)釋度(du)為 5倍(bei)）。加(jia)樣將(jiang)樣品加(jia)於酶標(biao)板(ban)孔底(di)部，盡(jin)量(liang)不(bu)觸及孔壁(bi)，輕輕晃(huang)動(dong)混勻(yun)。
3. 溫育(yu)：用封(feng)板膜(mo)封(feng)板後置 37℃溫育(yu)30分鐘(zhong)。
4. 配(pei)液(ye)：將(jiang) 30倍(bei)濃(nong)縮(suo)洗(xi)滌(di)液(ye)用(yong)蒸餾(liu)水(shui)  30倍(bei)稀(xi)釋後備(bei)用(yong)
5. 洗(xi)滌(di)：小心(xin)揭掉(diao)封(feng)板膜(mo)，棄(qi)去(qu)液(ye)體，甩(shuai)幹(gan)，每(mei)孔加(jia)滿洗(xi)滌(di)液(ye)，靜置(zhi) 30秒後棄(qi)去(qu)，如此(ci)重(zhong)復(fu) 5次(ci)，拍幹(gan)。
6.加(jia)酶：每(mei)孔加(jia)入酶標(biao)試(shi)劑(ji) 50µl，空白孔(kong)除外。
7.溫育(yu)：操(cao)作(zuo)同(tong) 3。
8.洗(xi)滌(di)：操(cao)作(zuo)同(tong) 5。
9.顯色：每(mei)孔先(xian)加(jia)入顯色劑(ji) A50µl，再(zai)加(jia)入顯色劑(ji) B50µl，輕輕震(zhen)蕩(dang)混(hun)勻(yun)，37℃避(bi)光(guang)顯色15分鐘.
10.終止(zhi)：每(mei)孔加(jia)終止液(ye)    50µl，終(zhong)止反應(ying)（此(ci)時藍色立轉(zhuan)黃(huang)色）。
11.測(ce)定：以空(kong)白空(kong)調(tiao)零(ling)，450nm波(bo)長依(yi)序測(ce)量(liang)各(ge)孔的(de)吸光(guang)度(du)（OD 值）。測(ce)定應(ying)在加(jia)終止液(ye)後 15分鐘(zhong)以內進(jin)行(xing)。
雞過氧化氫酶（CAT）酶聯免疫分(fen)析(xi)試(shi)劑(ji)盒操(cao)作(zuo)程序總(zong)結：

計(ji)算(suan)
以標(biao)準(zhun)物(wu)的濃(nong)度(du)為橫坐標(biao)， OD值為縱坐標(biao)，在(zai)坐標(biao)紙(zhi)上繪出(chu)標(biao)準(zhun)曲(qu)線，根(gen)據樣品的OD值由(you)標(biao)準(zhun)曲(qu)查出相應(ying)的濃(nong)度(du)；再(zai)乘(cheng)以稀(xi)釋倍(bei)數；或用標(biao)準(zhun)物(wu)的濃(nong)度(du)與  OD值計(ji)算(suan)出標(biao)準(zhun)曲(qu)線的直(zhi)線回歸方(fang)程式(shi)，樣品的 OD值代(dai)入(ru)方(fang)程式(shi)，計(ji)算(suan)出樣品濃(nong)度(du)，再(zai)乘(cheng)以稀(xi)釋倍(bei)數，即(ji)為樣品的實(shi)際濃(nong)度(du)。
註(zhu)意(yi)事項(xiang)
1．試(shi)劑(ji)盒從冷(leng)藏(zang)環境中取出應在室(shi)溫平(ping)衡 15-30分(fen)鐘後方(fang)可(ke)使(shi)用(yong)，酶標(biao)包(bao)被(bei)板(ban)開(kai)封(feng)後如未用完，板條應裝(zhuang)入(ru)密(mi)封(feng)袋(dai)中(zhong)保(bao)存。
2．濃(nong)洗(xi)滌(di)液(ye)可(ke)能會有(you)結(jie)晶析出(chu)，稀(xi)釋時可(ke)在(zai)水(shui)浴(yu)中加(jia)溫助(zhu)溶，洗(xi)滌(di)時不(bu)影(ying)響(xiang)結(jie)果(guo)。
3．各(ge)步(bu)加(jia)樣均應使(shi)用加(jia)樣器，並經(jing)常校對其準(zhun)確性，以避(bi)免試(shi)驗誤(wu)差。壹次(ci)加(jia)樣時間(jian)最好控(kong)制(zhi)在 5分(fen)鐘(zhong)內，如標(biao)本(ben)數量(liang)多，推(tui)薦使用排槍(qiang)加(jia)樣。
4．雞過氧化氫酶（CAT）酶聯免疫分(fen)析(xi) 試(shi)劑(ji)盒請(qing)每(mei)次(ci)測(ce)定的(de)同(tong)時做(zuo)標(biao)準(zhun)曲(qu)線，最好做(zuo)復(fu)孔(kong)。如標(biao)本(ben)中待測(ce)物(wu)質含(han)量(liang)過高(gao)（樣本(ben)  OD值大(da)於(yu)標(biao)準(zhun)品(pin)孔第壹孔(kong)的 OD值），請(qing)先(xian)用樣品稀(xi)釋液(ye)稀(xi)釋壹(yi)定倍數（n倍(bei)）後再(zai)測(ce)定，計(ji)算(suan)時請(qing)最後乘以總(zong)稀(xi)釋倍(bei)數（×n×5）。
5．封(feng)板膜(mo)只限壹次(ci)性使(shi)用(yong)，以避(bi)免交(jiao)叉汙染(ran)。
6．底(di)物(wu)請(qing)避(bi)光(guang)保(bao)存。
7．嚴格(ge)按(an)照說明(ming)書的(de)操(cao)作(zuo)進(jin)行(xing)，試(shi)驗結(jie)果(guo)判(pan)定(ding)必(bi)須(xu)以酶標(biao)儀讀數為準(zhun).
8．所(suo)有(you)樣品，洗(xi)滌(di)液(ye)和(he)各(ge)種(zhong)廢棄(qi)物(wu)都應(ying)按(an)傳(chuan)染(ran)物(wu)處(chu)理。
9．本(ben)試(shi)劑(ji)不(bu)同(tong)批(pi)號(hao)組分(fen)不(bu)得混用。
10.如與英文說明(ming)書有(you)異(yi)，以英文說明(ming)書為準(zhun)。
保(bao)存條件(jian)及有(you)效(xiao)期
1．試(shi)劑(ji)盒保(bao)存：2-8℃。
2．有(you)效(xiao)期：6個月(yue)