人Wnt-3a蛋(dan)白(WNT3A)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)免(mian)費代測

人(ren)Wnt-3a蛋(dan)白(WNT3A)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)本生(sheng)生(sheng)物(wu)公(gong)司(si)供(gong)應(ying)：ELISA試(shi)劑(ji)盒(he),動物血清,熒光定量(liang)PCR耗(hao)材(cai),移(yi)液器(qi)吸(xi)嘴,微量(liang)離(li)心(xin)管,進口(kou)凍(dong)存管,細(xi)胞(bao)培養(yang)皿(min),培養(yang)板,培(pei)養(yang)瓶,進口(kou)吸(xi)頭(tou),儀(yi)器(qi)及手(shou)套,色譜耗(hao)材(cai),針頭(tou)過(guo)濾器(qi),分(fen)光光(guang)度計。

本試(shi)劑(ji)盒(he)僅供(gong)研究使(shi)用

檢測範圍(wei)： 96T

使(shi)用目的(de)：

本試(shi)劑(ji)盒(he)用於(yu)測定人血清、血漿(jiang)及相(xiang)關液體樣本中人(ren)Wnt-3a蛋(dan)白(WNT3A)含(han)量(liang)。

實驗(yan)原理(li)

本試(shi)劑(ji)盒(he)應(ying)用雙(shuang)抗體夾心(xin)法測(ce)定標本Wnt-3a蛋(dan)白(WNT3A)水(shui)平。用(yong)純(chun)化的(de)Wnt-3a蛋(dan)白(WNT3A)抗體包(bao)被微孔(kong)板，制成(cheng)固相(xiang)抗體，往(wang)包(bao)被單(dan)抗的(de)微孔(kong)中依(yi)次加(jia)入Wnt-3a蛋(dan)白(WNT3A)，再(zai)與(yu)HRP 標(biao)記的(de)Wnt-3a蛋(dan)白(WNT3A)抗體結(jie)合(he)，形(xing)成(cheng)抗體-抗原-酶(mei)標(biao)抗體復合(he)物(wu)，經過(guo)*洗滌(di)後(hou)加(jia)底物TMB 顯(xian)色。TMB 在HRP 酶的(de)催(cui)化下轉化(hua)成(cheng)藍色，並在酸的(de)作用下(xia)轉化(hua)成(cheng)終的(de)黃(huang)色。顏色的(de)深(shen)淺和樣品(pin)中的(de)Wnt-3a蛋(dan)白(WNT3A)呈正(zheng)相(xiang)關。用酶標儀(yi)在450nm 波長下(xia)測(ce)定吸(xi)光(guang)度(OD 值(zhi))，通(tong)過標(biao)準(zhun)曲線(xian)計算樣(yang)品(pin)中人(ren)Wnt-3a蛋(dan)白(WNT3A)濃(nong)度。

試(shi)劑(ji)盒(he)組成(cheng)：

1 30 倍(bei)濃(nong)縮(suo)洗滌(di)液 20ml×1 瓶 ; 2 酶標(biao)試(shi)劑(ji) 6ml×1 瓶

3 酶標(biao)包(bao)被板 12 孔(kong)×8 條 ; 4 樣(yang)品(pin)稀(xi)釋液(ye) 6ml×1 瓶

5 顯色劑A 液(ye) 6ml×1 瓶 ; 6 顯色劑B 液(ye) 6ml×1/瓶

7 終止(zhi)液(ye) 6ml×1 瓶; 8 標準(zhun)品(pin)(48ng/ml) 0.5ml×1 瓶

9 標準(zhun)品(pin)稀(xi)釋液(ye) 1.5ml×1 瓶; 10 說明(ming)書 1 份(fen)

11 封(feng)板膜(mo) 2 張; 12 密(mi)封(feng)袋 1 個

標本要(yao)求(qiu)

1. 標(biao)本采(cai)集(ji)後(hou)盡(jin)早(zao)進行提(ti)取(qu)，提取(qu)按相(xiang)關文(wen)獻進行，提(ti)取(qu)後(hou)應(ying)盡快(kuai)進行實驗(yan)。若(ruo)不(bu)能馬(ma)上(shang)進行試(shi)驗(yan)，可將(jiang)標本放(fang)於-20℃保(bao)存，但應(ying)避免(mian)反(fan)復凍(dong)融(rong)

2. 不(bu)能檢測含(han) NaN3 的(de)樣(yang)品(pin)，因 NaN3 抑制可溶性血管內(nei)皮(pi)細(xi)胞(bao)蛋(dan)白C受(shou)體(sEPCR)活性(xing)。

操作步驟

1. 標準品(pin)的(de)稀(xi)釋：本試(shi)劑(ji)盒(he)提供(gong)原倍(bei)標(biao)準(zhun)品(pin)壹支，用(yong)戶(hu)可按(an)照(zhao)下(xia)列(lie)圖(tu)表在小試(shi)管中進行稀(xi)釋。

60 ng/L5 號(hao)標準(zhun)品(pin)150µl 的(de)原倍(bei)標(biao)準(zhun)品(pin)加(jia)入 150µl 標(biao)準品(pin)稀(xi)釋液(ye)

30 ng/L4 號(hao)標準(zhun)品(pin)150µl 的(de) 5 號(hao)標準(zhun)品(pin)加(jia)入 150µl 標(biao)準品(pin)稀(xi)釋液(ye)

15 ng/L3 號(hao)標準(zhun)品(pin)150µl 的(de) 4 號(hao)標準(zhun)品(pin)加(jia)入 150µl 標(biao)準品(pin)稀(xi)釋液(ye)

7.5 ng/L2 號(hao)標準(zhun)品(pin)150µl 的(de) 3 號(hao)標準(zhun)品(pin)加(jia)入 150µl 標(biao)準品(pin)稀(xi)釋液(ye)

3.75 ng/L1 號(hao)標準(zhun)品(pin)150µl 的(de) 2 號(hao)標準(zhun)品(pin)加(jia)入 150µl 標(biao)準品(pin)稀(xi)釋液(ye)

2. 加(jia)樣：分(fen)別設(she)空(kong)白孔(kong)(空白對(dui)照孔(kong)不(bu)加(jia)樣品(pin)及酶(mei)標試(shi)劑(ji)，其(qi)余各步操作相(xiang)同(tong))、標(biao)準孔(kong)、待測(ce)樣(yang)品(pin)孔(kong)。在酶標(biao)包(bao)被板上(shang)標(biao)準品(pin)準(zhun)確(que)加(jia)樣 50µl，待測(ce)樣(yang)品(pin)孔(kong)中先加(jia)樣品(pin)稀(xi)釋液(ye) 40µl，

然後(hou)再(zai)加(jia)待測樣(yang)品(pin) 10µl(樣(yang)品(pin)終稀(xi)釋度為(wei) 5 倍(bei))。加(jia)樣將(jiang)樣品(pin)加(jia)於酶標(biao)板孔(kong)底部(bu)，盡(jin)

量(liang)不(bu)觸及孔(kong)壁，輕輕晃(huang)動混勻。

3. 溫(wen)育：用封(feng)板膜(mo)封(feng)板後(hou)置(zhi) 37℃溫(wen)育 30 分(fen)鐘。

4. 配(pei)液(ye)：將(jiang) 30 倍(bei)濃(nong)縮(suo)洗滌(di)液用蒸餾(liu)水(shui) 30 倍(bei)稀(xi)釋後(hou)備(bei)用(yong)

5. 洗滌(di)：小心(xin)揭(jie)掉(diao)封(feng)板膜(mo)，棄(qi)去液體，甩幹(gan)，每(mei)孔(kong)加(jia)滿(man)洗滌(di)液，靜置 30 秒(miao)後(hou)棄(qi)去，如(ru)此重復 5 次(ci)，拍(pai)幹(gan)。

6. 加(jia)酶：每孔(kong)加(jia)入酶(mei)標試(shi)劑(ji) 50µl，空(kong)白孔(kong)除(chu)外(wai)。

7. 溫(wen)育：操作同 3。

8. 洗滌(di)：操作同 5。

9. 顯(xian)色：每孔(kong)先加(jia)入顯(xian)色劑 A50µl，再(zai)加(jia)入顯(xian)色劑 B50µl，輕輕震(zhen)蕩(dang)混勻，37℃避光(guang)顯色

15 分(fen)鐘.

10. 終止(zhi)：每(mei)孔(kong)加(jia)終止(zhi)液(ye) 50µl，終止(zhi)反(fan)應(ying)(此時藍(lan)色立轉黃(huang)色)。

11. 測定：以(yi)空(kong)白空(kong)調(tiao)零(ling)，450nm 波長依(yi)序(xu)測(ce)量(liang)各孔(kong)的(de)吸(xi)光(guang)度(OD 值(zhi))。 測定應(ying)在加(jia)終止(zhi)液(ye)後(hou) 15 分(fen)鐘以(yi)內(nei)進行。

人(ren)Wnt-3a蛋(dan)白(WNT3A)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)免(mian)費代測

操(cao)作程序(xu)總(zong)結(jie)：

計算:

以(yi)標(biao)準物的(de)濃(nong)度為(wei)橫坐標(biao)，OD 值(zhi)為縱(zong)坐(zuo)標，在坐標(biao)紙(zhi)上(shang)繪(hui)出(chu)標準(zhun)曲(qu)線，根(gen)據樣(yang)品(pin)的(de)OD 值(zhi)由(you)標準(zhun)曲(qu)線查(zha)出(chu)相(xiang)應(ying)的(de)濃(nong)度;再(zai)乘以(yi)稀(xi)釋倍(bei)數(shu);或(huo)用標(biao)準(zhun)物(wu)的(de)濃(nong)度與(yu) OD 值(zhi)計算出(chu)標準(zhun)曲(qu)線的(de)直線(xian)回歸(gui)方程(cheng)式(shi)，將(jiang)樣品(pin)的(de) OD 值(zhi)代入方程(cheng)式(shi)，計算出(chu)樣品(pin)濃(nong)度，再(zai)乘以(yi)稀(xi)釋倍(bei)數(shu)，

即(ji)為(wei)樣(yang)品(pin)的(de)實際(ji)濃度。

註意事(shi)項(xiang)

1. 試(shi)劑(ji)盒(he)從冷(leng)藏環境(jing)中取(qu)出(chu)應(ying)在室溫(wen)平衡 15-30 分(fen)鐘後(hou)方可使(shi)用，酶(mei)標(biao)包(bao)被板開(kai)封(feng)後(hou)如(ru)未用(yong)完(wan)，板條(tiao)應(ying)裝入密(mi)封(feng)袋中保(bao)存。

2. 濃洗滌(di)液可能會有結(jie)晶析(xi)出(chu)，稀(xi)釋時(shi)可在水(shui)浴中加(jia)溫(wen)助溶，洗滌(di)時不(bu)影響結(jie)果(guo)。

3. 各步加(jia)樣均應(ying)使(shi)用加(jia)樣器(qi)，並經(jing)常(chang)校(xiao)對(dui)其(qi)準確(que)性，以(yi)避(bi)免(mian)試(shi)驗(yan)誤差。壹次加(jia)樣時間控(kong)制在 5 分(fen)鐘內(nei)，如(ru)標本數(shu)量(liang)多(duo)，推(tui)薦(jian)使(shi)用排(pai)槍(qiang)加(jia)樣。

4. 請(qing)每次(ci)測(ce)定的(de)同(tong)時做(zuo)標準曲線，做(zuo)復孔(kong)。如(ru)標本中待(dai)測物質含(han)量(liang)過(guo)高(樣(yang)本 OD 值(zhi)大於標(biao)準(zhun)品(pin)孔(kong)孔(kong)的(de) OD 值(zhi))，請(qing)先用樣品(pin)稀(xi)釋液(ye)稀(xi)釋壹定倍(bei)數(shu)(n 倍(bei))後(hou)再(zai)測定，計算時(shi)請(qing)後(hou)乘以(yi)總(zong)稀(xi)釋倍(bei)數(shu)(×n×5)。

5. 封(feng)板膜(mo)只限(xian)壹次性(xing)使(shi)用，以(yi)避(bi)免(mian)交叉(cha)汙(wu)染(ran)。6.底物(wu)請(qing)避光(guang)保(bao)存。

7. 嚴格(ge)按(an)照(zhao)說明(ming)書的(de)操(cao)作進行，試(shi)驗(yan)結(jie)果(guo)判定必須(xu)以(yi)酶(mei)標儀讀(du)數為準.

8. 所(suo)有樣(yang)品(pin)，洗滌(di)液和各種廢棄(qi)物都應(ying)按傳染(ran)物處理。

9. 本試(shi)劑(ji)不(bu)同批(pi)號(hao)組分(fen)不(bu)得混(hun)用(yong)。

10. 如(ru)與(yu)英(ying)文(wen)說(shuo)明(ming)書有異(yi)，以(yi)英(ying)文(wen)說(shuo)明(ming)書為(wei)準。

保(bao)存條件及有效期

1. 試(shi)劑(ji)盒(he)保存：;2-8℃。

2. 有效期：6 個(ge)月(yue)

人Wnt-3a蛋(dan)白(WNT3A)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)相(xiang)關產品(pin)推(tui)薦(jian)：