人(ren)γ幹擾(rao)素(IFN-γ)ELISA檢測(ce)試(shi)劑盒技(ji)術(shu)說明書(shu)

　　BS-0033人(ren)γ幹擾(rao)素(IFN-γ)ELISA試(shi)劑盒

　　壹(yi)、檢測(ce)原(yuan)理

　　本試(shi)劑盒采(cai)用(yong)雙(shuang)抗體(ti)夾心法酶聯(lian)免(mian)疫(yi)吸(xi)附試(shi)驗(ELISA)。將抗(kang)人(ren)IFN-γ單克(ke)隆(long)抗體(ti)預包(bao)被(bei)於(yu)微(wei)孔板(ban)，依(yi)次加(jia)入(ru)樣(yang)本、標(biao)準品(pin)及生(sheng)物素標(biao)記的(de)檢測(ce)抗(kang)體(ti)，形成(cheng)抗(kang)體(ti)-抗原(yuan)-酶(mei)標(biao)抗體(ti)復(fu)合物。經洗滌(di)後，加(jia)入(ru)辣根過(guo)氧(yang)化物(wu)酶標(biao)記的(de)鏈(lian)黴(mei)親和(he)素(Streptavidin-HRP)結(jie)合，通過(guo)TMB底(di)物(wu)顯色(se)。顏(yan)色(se)深淺與樣(yang)本中IFN-γ濃度呈(cheng)正(zheng)相關，利用酶標(biao)儀測(ce)定吸光度(OD值(zhi))進行定量分析。

　　二、試(shi)劑盒組(zu)成(cheng)

　　組(zu)分 96孔配置(zhi) 48孔配置(zhi) 保(bao)存條(tiao)件

　　預(yu)包被(bei)微(wei)孔板(ban) 12孔×8條(tiao) 12孔×4條(tiao) 2-8℃

　　凍(dong)幹標(biao)準品(pin) 1管 1管(guan) 2-8℃(復(fu)溶後-20℃)

　　生物素標(biao)記抗(kang)體(ti) 100μL 100μL 2-8℃(避光)

　　鏈黴(mei)親和(he)素-HRP 100μL 100μL 2-8℃(避(bi)光)

　　樣(yang)本稀(xi)釋(shi)液 30mL 15mL 2-8℃

　　20×洗滌(di)緩沖液 20mL 10mL 2-8℃

　　TMB底(di)物(wu)液 10mL 5mL 2-8℃避(bi)光

　　終止液 10mL 5mL 2-8℃

　　封(feng)板(ban)膜 4張 2張(zhang) 室溫

　　三(san)、樣(yang)本要(yao)求(qiu)

　　1. 樣(yang)本類(lei)型

　　血清/血漿‌：使(shi)用EDTA或(huo)肝(gan)素抗(kang)凝(ning)，避(bi)免(mian)溶血。

　　細胞培(pei)養上清‌：離(li)心去除(chu)顆粒物，避免(mian)反復(fu)凍(dong)融。

　　其他生(sheng)物體(ti)液‌：如(ru)腦(nao)脊液、胸腹(fu)水，需(xu)澄清後(hou)檢測(ce)。

　　2. 樣(yang)本處理(li)

　　稀(xi)釋(shi)比(bi)例‌：血清/血漿建(jian)議(yi)1:5稀(xi)釋(shi)(樣(yang)本:稀(xi)釋(shi)液=1:4)，細胞上清建(jian)議(yi)1:2稀(xi)釋(shi)。

　　保(bao)存條(tiao)件‌：短(duan)期(≤7天)2-8℃保(bao)存，長(chang)期(qi)需(xu)分裝凍(dong)存於(yu)-80℃(避(bi)免反復(fu)凍(dong)融)。

　　四(si)、實驗步(bu)驟

　　1. 試(shi)劑準備(bei)

　　洗滌(di)液‌：用(yong)蒸(zheng)餾(liu)水將(jiang)20×濃縮(suo)液稀(xi)釋(shi)為1×工(gong)作(zuo)液(如(ru)20mL濃(nong)縮(suo)液+380mL水)。

　　標(biao)準品(pin)復(fu)溶‌：凍(dong)幹標(biao)準品(pin)加(jia)入(ru)1mL標(biao)準品(pin)稀(xi)釋(shi)液，靜(jing)置(zhi)15分鐘，配成(cheng)高(gao)濃度母(mu)液。

　　梯(ti)度(du)稀(xi)釋(shi)‌：取7支EP管，每(mei)管加(jia)500μL稀(xi)釋(shi)液，從(cong)母液轉(zhuan)移(yi)500μL至壹管(guan)混勻，依(yi)次倍(bei)比(bi)稀(xi)釋(shi)(示例：1000→500→250→125→62.5→31.25→15.625 pg/mL)。

　　2. 加(jia)樣(yang)與溫育(yu)

　　每(mei)孔加(jia)入(ru)100μL標(biao)準品(pin)或稀(xi)釋(shi)後樣(yang)本(建(jian)議(yi)復(fu)孔檢測(ce))。

　　37℃避(bi)光溫育(yu)90分鐘，封(feng)板(ban)膜密(mi)封(feng)。

　　3. 洗滌(di)

　　甩(shuai)盡(jin)孔內液體(ti)，用1×洗滌(di)液洗滌(di)3次，每(mei)次浸(jin)泡(pao)1分鐘，拍幹。

　　4. 顯色(se)與終止

　　每(mei)孔加(jia)入(ru)100μL生物素標(biao)記抗(kang)體(ti)(提前(qian)用(yong)抗體(ti)稀(xi)釋(shi)液1:100稀(xi)釋(shi))，37℃避光溫育(yu)60分鐘。

　　洗滌(di)後，每(mei)孔加(jia)入(ru)100μL鏈黴(mei)親和(he)素-HRP(提(ti)前(qian)用ABC稀(xi)釋(shi)液1:100稀(xi)釋(shi))，37℃避光溫育(yu)30分鐘。

　　洗滌(di)後，每(mei)孔加(jia)入(ru)100μL TMB底(di)物(wu)液，37℃避(bi)光顯色15-20分鐘。

　　每(mei)孔加(jia)入(ru)50μL終止液終止反應(溶液由(you)藍變(bian)黃)。

　　5. 測(ce)定

　　30分鐘內用酶標(biao)儀測(ce)定450nm波長(chang)OD值(zhi)(參(can)考波(bo)長(chang)570-630nm)。

　　五(wu)、結(jie)果計(ji)算(suan)

　　以標(biao)準品(pin)濃度(du)為橫坐標(biao)，OD值(zhi)為(wei)縱(zong)坐標(biao)繪(hui)制標(biao)準曲(qu)線(xian)(四(si)參(can)數(shu)擬(ni)合)。

　　根據(ju)樣(yang)本OD值(zhi)，通過(guo)回(hui)歸方程(cheng)計(ji)算(suan)實際濃度，若樣(yang)本稀(xi)釋(shi)需(xu)乘以稀(xi)釋(shi)倍(bei)數(shu)。

　　六(liu)、性能(neng)指標(biao)

　　參(can)數(shu) 指標(biao)

　　靈(ling)敏(min)度 ≤1.0 pg/mL

　　檢測(ce)範(fan)圍 15.63–1000 pg/mL

　　精密(mi)度 板(ban)內CV <10%

　　回(hui)收率 83%-113%

　　特異性 與人(ren)IL-2、IL-4等無(wu)交叉反應

　　七、註意事項(xiang)

　　試(shi)劑保(bao)存‌：未使用(yong)板(ban)條(tiao)需(xu)密(mi)封(feng)保(bao)存於(yu)2-8℃，避(bi)免受潮;TMB底(di)物(wu)液需(xu)避光。

　　樣(yang)本處理(li)‌：避免(mian)使(shi)用(yong)溶血、高血脂(zhi)樣(yang)本;高(gao)濃(nong)度(du)樣(yang)本需(xu)預實驗確定稀(xi)釋(shi)倍(bei)數(shu)。

　　操(cao)作(zuo)規範(fan)‌：

　　加(jia)樣(yang)時避(bi)免(mian)氣泡(pao)，槍(qiang)頭需(xu)更換(huan)。

　　溫育(yu)時間嚴格控制在規(gui)定範圍內，防(fang)止蒸發(fa)。

　　質量控制‌：每(mei)批次實驗需(xu)設空白孔(S0)及(ji)陰性(xing)對照(zhao)。

　　安全(quan)提(ti)示‌：終止液含(han)酸(suan)，需(xu)戴(dai)手(shou)套(tao)操(cao)作(zuo);廢(fei)棄(qi)物按(an)生(sheng)物(wu)危害處理(li)。

　　八、有效(xiao)期(qi)

　　試(shi)劑盒在2-8℃下(xia)有效(xiao)期(qi)為6個月(yue)，拆(chai)封(feng)後(hou)標(biao)準品(pin)建(jian)議(yi)分裝凍(dong)存於(yu)-20℃。

　　註(zhu)：以上僅供(gong)參(can)考，本(ben)產品(pin)僅供(gong)科研(yan)使(shi)用，不作(zuo)為實際數(shu)據(ju)，實驗需(xu)嚴格遵循說明或(huo)咨詢(xun)技(ji)術(shu)老(lao)師。

　　人(ren)白介素1(IL-1)ELISA試(shi)劑盒實驗使用(yong)說明書(shu) 本生(sheng)壹(yi)直(zhi)視質量控制為(wei)企業的(de)生命，追(zhui)求(qiu)企業競(jing)爭力(li)的(de)不(bu)斷(duan)提(ti)升(sheng)。公司(si)在經營中始終秉(bing)承(cheng)：遵紀(ji)守(shou)法，嚴於(yu)律(lv)己(ji)，寬(kuan)仁以待(dai)，敢於(yu)承(cheng)擔(dan)的(de)企業精神作(zuo)為標(biao)準，以過(guo)硬(ying)的(de)質量和(he)優良的服(fu)務來(lai)維(wei)護(hu)和拓(tuo)展市(shi)場(chang)，較大(da)限(xian)度的(de)滿(man)足(zu)客戶(hu)的(de)需(xu)求(qiu)。與客戶(hu)的(de)共(gong)贏，是我(wo)們(men)的(de)發(fa)展目標(biao)。本生(sheng)!您(nin)信(xin)任的(de)合作(zuo)夥(huo)伴(ban)。我(wo)們(men)願(yuan)與您(nin)真誠(cheng)合作(zuo)，共創美(mei)好的(de)未來(lai)。本(ben)生(sheng)試(shi)劑盒