大鼠(shu)谷(gu)胱甘肽(tai)還(hai)原(yuan)酶(mei)(GSR)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)實驗說(shuo)明書

　　BS-3507大鼠(shu)谷(gu)胱甘肽(tai)還(hai)原(yuan)酶(mei)(GSR)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)

　　壹、實驗原(yuan)理

　　本試劑(ji)盒(he)采(cai)用(yong)雙抗體夾(jia)心酶(mei)聯(lian)免(mian)疫(yi)吸附法(fa)(ELISA)檢測(ce)大鼠(shu)谷(gu)胱甘肽(tai)還(hai)原(yuan)酶(mei)(GSR)活(huo)性(xing)。 將抗大鼠(shu)GSR抗體包被於微(wei)孔(kong)板中，加入(ru)待測(ce)樣本後(hou)，樣本中的(de)GSR與(yu)包被抗體結(jie)合(he)。隨後(hou)加入(ru)生(sheng)物(wu)素(su)標(biao)記(ji)的檢測(ce)抗體，形(xing)成(cheng)“抗體-抗原-酶(mei)標(biao)抗體"復(fu)合(he)物(wu)。 加入(ru)辣(la)根過氧(yang)化物(wu)酶(mei)(HRP)標(biao)記(ji)的鏈(lian)黴(mei)親和(he)素(su)(SABC)後(hou)，通過TMB底(di)物(wu)顯色(se)，在450nm波(bo)長(chang)下(xia)測(ce)定(ding)吸光(guang)度(du)(OD值(zhi))，OD值與樣本中GSR濃度(du)呈正相(xiang)關。

　　二(er)、試劑盒組成

　　組分 48孔(kong)配置 96孔配(pei)置 保存條(tiao)件

　　預包被酶(mei)標(biao)板 8×6條(tiao) 8×12條(tiao) 2-8℃

　　標(biao)準品(pin)(凍(dong)幹) 1支(zhi) 1支(zhi) 2-8℃

　　標(biao)準品(pin)/樣品(pin)稀釋(shi)液 10mL 15mL 2-8℃

　　生(sheng)物(wu)素(su)化檢測(ce)抗體 60μL(100×) 120μL(100×) -20℃

　　生(sheng)物(wu)素(su)化抗體稀(xi)釋(shi)液 6mL 12mL 2-8℃

　　SABC復(fu)合(he)物(wu) 6mL 12mL 2-8℃

　　TMB顯色(se)液(A/B) 各(ge)3mL 各(ge)6mL 避光2-8℃

　　終止液 6mL 12mL 2-8℃

　　20×濃縮(suo)洗滌(di)液 30mL 60mL 室(shi)溫(wen)

　　封板膜 2片(pian) 4片(pian) 室(shi)溫(wen)

　　說(shuo)明(ming)書 1份 1份(fen) -

　　三、樣本處理

　　血(xue)清/血(xue)漿(jiang)樣本‌：

　　全血(xue)室溫(wen)靜置2小時(shi)或(huo)4℃過夜(ye)，1000g離心20分鐘(zhong)，取上清。

　　避免(mian)溶(rong)血(xue)或(huo)高血(xue)脂樣本，2-8℃可保存48小時(shi);長(chang)期(qi)保存需-20℃或(huo)-80℃，避免(mian)反復(fu)凍(dong)融(rong)。

　　組織/細胞樣本‌：

　　組織勻漿(jiang)或(huo)細胞裂解(jie)後(hou)，離心取上清，蛋白(bai)濃度(du)調(tiao)整(zheng)至(zhi)推(tui)薦(jian)範(fan)圍。

　　四、實驗步(bu)驟

　　洗滌(di)液配(pei)制(zhi)‌：

　　將20×濃縮(suo)洗滌(di)液用(yong)蒸餾水(shui)稀(xi)釋(shi)20倍(如(ru)1mL濃縮(suo)液+19mL蒸餾水(shui))。

　　標(biao)準品(pin)稀釋(shi)‌：

　　取7支離心管，標(biao)註(zhu)1/2、1/4、1/8、1/16、1/32、1/64、空白(bai)(Blank)。

　　每(mei)管加入(ru)200μL標(biao)準品(pin)/樣品(pin)稀釋(shi)液，首(shou)管加入(ru)200μL標(biao)準品(pin)原液，混(hun)勻後(hou)逐級稀(xi)釋(shi)。

　　加樣與(yu)孵(fu)育(yu)‌：

　　每(mei)孔加入(ru)100μL標(biao)準品(pin)或(huo)樣本，37℃孵(fu)育(yu)90分鐘(zhong)。

　　棄(qi)去(qu)液體(ti)，洗(xi)滌(di)3次(ci)(每(mei)次(ci)浸(jin)泡1-2分(fen)鐘(zhong))。

　　酶(mei)標(biao)抗體反(fan)應(ying)‌：

　　每(mei)孔加入(ru)100μL生(sheng)物(wu)素(su)化檢測(ce)抗體(按(an)1:100稀(xi)釋(shi))，37℃孵(fu)育(yu)60分鐘(zhong)。

　　洗(xi)滌(di)3次(ci)。

　　SABC復(fu)合物(wu)反(fan)應(ying)‌：

　　每(mei)孔加入(ru)100μL SABC復(fu)合(he)物(wu)，37℃孵(fu)育(yu)30分鐘(zhong)。

　　洗(xi)滌(di)3次(ci)。

　　顯色(se)與終(zhong)止(zhi)‌：

　　每(mei)孔加入(ru)90μL TMB顯色(se)液(A/B液等(deng)量(liang)混(hun)合(he))，避光37℃孵(fu)育(yu)15分鐘(zhong)。

　　每(mei)孔加入(ru)50μL終(zhong)止(zhi)液，混(hun)勻後(hou)立(li)即(ji)測(ce)定(ding)。

　　五(wu)、結果計(ji)算(suan)

　　以(yi)標(biao)準品(pin)濃度(du)為橫(heng)坐標(biao)(X)，OD值為縱坐標(biao)(Y)，繪制(zhi)標(biao)準曲線(xian)。

　　根(gen)據(ju)樣本OD值代(dai)入(ru)標(biao)準曲線(xian)方(fang)程，計算(suan)GSR濃度(du)。

　　六(liu)、註(zhu)意事(shi)項(xiang)

　　試劑(ji)保存‌：

　　標(biao)準品(pin)、生物(wu)素(su)化抗體需-20℃保存，避免(mian)反復(fu)凍(dong)融(rong);其他(ta)組分2-8℃保存。

　　樣本處理‌：

　　避免(mian)使用(yong)溶(rong)血(xue)、高血(xue)脂或(huo)渾(hun)濁(zhuo)樣本;組織樣本需充(chong)分(fen)勻漿(jiang)。

　　操作(zuo)規(gui)範‌：

　　移液需精確，避免(mian)交叉(cha)汙染;洗滌(di)需ganj ，殘(can)留(liu)液體(ti)影響結(jie)果。

　　儀(yi)器(qi)校準‌：

　　酶(mei)標(biao)儀波(bo)長(chang)需校準至450nm，空(kong)白(bai)孔(kong)調(tiao)零。

　　安(an)全防護‌：

　　終止液含(han)硫(liu)酸，操作(zuo)時(shi)佩戴(dai)手套和(he)護目鏡。

　　七、預期(qi)結(jie)果

　　靈敏度(du)：可(ke)檢測(ce)低(di)至(zhi)0.156ng/mL的GSR。

　　線(xian)性(xing)範(fan)圍：0.156-10ng/mL。

　　八、應(ying)用(yong)範圍

　　本試劑(ji)盒(he)適用(yong)於大鼠(shu)血(xue)清、血(xue)漿(jiang)、組織勻漿(jiang)及細胞培養(yang)上(shang)清液中(zhong)GSR的(de)定(ding)量(liang)檢測(ce)，科(ke)研用(yong)途(tu)。

　　提(ti)示‌：具體(ti)操作(zuo)請(qing)以(yi)實際(ji)試劑(ji)盒說(shuo)明書為準，實驗前(qian)需閱讀(du)完整(zheng)說(shuo)明並確認(ren)組分完整(zheng)性(xing)。

　　註(zhu)：以(yi)上僅(jin)供參(can)考，本試劑(ji)僅(jin)供(gong)科(ke)研使用(yong)，不作(zuo)為實際(ji)數據(ju)，實驗需嚴格(ge)遵循說明(ming)或(huo)咨詢(xun)技術老(lao)師(shi)。