人(ren)血管內(nei)皮生(sheng)長(chang)因子A(VEGF-A)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)實(shi)驗使(shi)用說明(ming)書(shu)

　　BS-9809人(ren)血管內(nei)皮生(sheng)長(chang)因子A(VEGF-A)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)

　　壹(yi)、產品(pin)概(gai)述

　　本(ben)試(shi)劑(ji)盒(he)采(cai)用雙抗體(ti)夾(jia)心(xin)酶聯免(mian)疫(yi)吸附(fu)法(fa)(ELISA)，專(zhuan)用於檢測人(ren)血清、血漿(jiang)、組(zu)織勻漿(jiang)、細(xi)胞(bao)培(pei)養上清等樣(yang)本中的(de)VEGF-A濃度。僅(jin)供科研使(shi)用。

　　二、試(shi)劑(ji)盒(he)組(zu)成

　　預包(bao)被(bei)微(wei)孔板(ban)‌：12孔×8條(tiao)(96孔規格)或(huo)12孔×4條(tiao)(48孔規格)，預包(bao)被(bei)抗VEGF-A捕(bu)獲(huo)抗體(ti)。

　　標(biao)準品(pin)‌：凍幹(gan)粉，需(xu)用標準品(pin)稀(xi)釋(shi)液復溶後(hou)倍(bei)比稀(xi)釋(shi)(建議(yi)濃度梯度：10、3.33、1.11、0.37、0.12、0.04、0 ng/mL)。

　　檢測抗體(ti)-HRP‌：辣(la)根過(guo)氧(yang)化(hua)物酶(mei)標記的(de)抗VEGF-A抗體(ti)。

　　洗(xi)滌緩(huan)沖(chong)液‌：20×濃縮(suo)液，需用蒸(zheng)餾水(shui)按1:20稀釋(shi)。

　　底物溶(rong)液‌：TMB顯色液A/B，使(shi)用前1:1混(hun)合(he)，15分鐘內用完(wan)。

　　終(zhong)止液‌：2M溶液。

　　樣本稀釋(shi)液‌：用於稀釋(shi)高濃度樣(yang)本(ben)。

　　封板(ban)膜(mo)‌：2張(zhang)，用於溫(wen)育時(shi)密(mi)封微(wei)孔板(ban)。

　　三(san)、實驗原理(li)

　　VEGF-A與預包(bao)被(bei)捕(bu)獲(huo)抗體(ti)結合(he)，形(xing)成“抗體(ti)-抗原(yuan)"復(fu)合(he)物;加(jia)入(ru)HRP標(biao)記(ji)檢測抗體(ti)後(hou)，形(xing)成“夾(jia)心(xin)結構(gou)"。經(jing)洗(xi)滌(di)去除(chu)未結合(he)物質(zhi)，加(jia)入(ru)TMB底(di)物顯(xian)色(藍色)，終(zhong)止液終止反應(ying)後(hou)變黃(huang)色(se)。450nm波長(chang)測定吸(xi)光(guang)度(OD值(zhi))，濃度與OD值(zhi)呈(cheng)正(zheng)比(bi)。

　　四、實驗(yan)步(bu)驟

　　樣本準備(bei)‌

　　血清/血漿(jiang)：離(li)心(xin)去除(chu)顆粒(li)物，避(bi)免(mian)溶血;2-8℃保存(cun)≤48小時(shi)，長(chang)期保存需-20℃/-80℃(避(bi)免(mian)反復(fu)凍融(rong))。

　　細(xi)胞(bao)上清：離心(xin)取(qu)上清，避免(mian)含(han)高(gao)濃度蛋(dan)白(bai)酶(mei)劑(ji)。

　　試(shi)劑(ji)準備(bei)‌

　　洗滌(di)液：濃縮(suo)洗(xi)滌(di)液室(shi)溫(wen)結晶(jing)時(shi)，40℃水(shui)浴(yu)溶解後(hou)按1:20稀釋(shi)。

　　標準品(pin)：復(fu)溶(rong)後(hou)倍(bei)比稀(xi)釋(shi)，現配(pei)現用。

　　底物：TMB A/B液1:1混合(he)，避光(guang)保存。

　　操作(zuo)流程‌

　　加樣(yang)‌：每孔加入(ru)100μL標(biao)準品(pin)/樣(yang)本(ben)，37℃孵(fu)育90分鐘。

　　洗滌‌：甩(shuai)幹孔內液體，用洗滌(di)液浸(jin)泡(pao)1分鐘/次，重(zhong)復3次。

　　加檢測抗體(ti)‌：每(mei)孔加入(ru)100μL HRP標(biao)記(ji)抗體(ti)，37℃孵(fu)育60分鐘。

　　洗滌‌：同步(bu)驟2。

　　顯色‌：每(mei)孔加入(ru)90μL TMB底(di)物，37℃避(bi)光孵(fu)育15-20分鐘。

　　終止‌：每孔加入(ru)100μL終(zhong)止液，混勻後(hou)30分鐘內測定OD值(zhi)。

　　結果(guo)計(ji)算‌

　　以標準品(pin)濃度(ng/mL)為橫(heng)坐標(biao)，OD值(zhi)為縱(zong)坐標(biao)繪制標準曲(qu)線(xian)。

　　根(gen)據(ju)樣本(ben)OD值(zhi)代(dai)入(ru)曲(qu)線(xian)計(ji)算濃度，乘(cheng)以稀釋(shi)倍(bei)數(shu)得(de)結果(guo)。

　　五(wu)、註意事(shi)項(xiang)

　　試(shi)劑(ji)保(bao)存(cun)‌：未使(shi)用試(shi)劑(ji)盒(he)需(xu)2-8℃避光(guang)保(bao)存(cun)，有效(xiao)期6個月;復溶(rong)標(biao)準品(pin)可(ke)分(fen)裝(zhuang)凍存(cun)，避(bi)免(mian)反復(fu)凍融(rong)。

　　樣(yang)本(ben)處理‌：避免(mian)使(shi)用含(han)的(de)樣(yang)本(ben)，防(fang)止HRP活性(xing)。

　　操作(zuo)規(gui)範(fan)‌：移液需，避免(mian)氣泡(pao);洗(xi)滌需(xu)，防止交叉(cha)汙(wu)染。

　　安(an)全(quan)防護‌：終(zhong)止液含(han)強(qiang)酸，需(xu)戴手(shou)套(tao)操作(zuo)。

　　六、預期結果(guo)

　　靈(ling)敏(min)度‌：≤1.54 pg/mL(實(shi)際(ji)以說明(ming)書(shu)為準)。

　　檢測範(fan)圍‌：典型(xing)範(fan)圍為3.12-200 pg/mL，部分(fen)試(shi)劑(ji)盒(he)擴(kuo)展至(zhi)62.5-2000 pg/mL。

　　重(zhong)復性(xing)‌：板(ban)內(nei)/板(ban)間(jian)變異系(xi)數(shu)分(fen)別(bie)<10%和(he)<15%。

　　七(qi)、常(chang)見問(wen)題(ti)解答

　　Q‌：顯色過(guo)淺(qian)或(huo)過(guo)深?

　　A‌：調(tiao)整樣(yang)本稀(xi)釋(shi)倍(bei)數(shu)或(huo)孵(fu)育時(shi)間(jian);確(que)保(bao)底物新(xin)鮮(xian)配制。

　　Q‌：標(biao)準曲(qu)線(xian)線(xian)性(xing)差(cha)?

　　A‌：檢查(zha)復溶(rong)操作(zuo)，避(bi)免(mian)氣泡(pao);更(geng)換移液器(qi)吸頭(tou)。

　　註：以上僅供參(can)考(kao)，本產品(pin)僅(jin)供科研使(shi)用，不作(zuo)為實際(ji)數(shu)據(ju)，實驗(yan)需嚴(yan)格遵(zun)循說明(ming)或(huo)咨詢(xun)技術老(lao)師。

　　天(tian)津(jin)本生(sheng)壹(yi)直(zhi)視(shi)質(zhi)量控(kong)制(zhi)為企業(ye)的(de)生(sheng)命，追(zhui)求企(qi)業競(jing)爭(zheng)力的(de)不斷提(ti)升(sheng)。公(gong)司在(zai)經營(ying)中始終(zhong)秉(bing)承：遵(zun)紀守法(fa)，嚴(yan)於律己，寬仁以待，敢(gan)於承擔(dan)的(de)企(qi)業(ye)精(jing)神(shen)作(zuo)為標準，以過硬(ying)的(de)質(zhi)量和(he)優良(liang)的(de)服(fu)務(wu)來維護和(he)拓(tuo)展市場，較大(da)限度的(de)滿(man)足客(ke)戶的(de)需(xu)求。與客(ke)戶的(de)共(gong)贏，是(shi)我們的(de)發(fa)展目(mu)標(biao)。本生(sheng)!您(nin)信任(ren)的(de)合(he)作(zuo)夥(huo)伴(ban)。我們願與您真誠(cheng)合(he)作(zuo)，共(gong)創(chuang)美(mei)好的(de)未(wei)來。