BUNSEN本(ben)生(sheng)分(fen)享：HRP標(biao)記(ji)二抗的(de)科(ke)研應用(yong)

　　在生(sheng)命(ming)科(ke)學研究(jiu)的中，高(gao)靈敏度(du)、高(gao)特(te)異性(xing)的蛋(dan)白檢(jian)測(ce)技(ji)術(shu)至(zhi)關重(zhong)要。其(qi)中，辣根(gen)過(guo)氧化(hua)物(wu)酶(mei)標(biao)記(ji)的二抗堪(kan)稱(cheng)現代(dai)免疫(yi)學實驗(yan)的(de)基石之(zhi)壹(yi)。BUNSEN本(ben)生(sheng)將(jiang)為您系統解(jie)析(xi)HRP標(biao)記(ji)二抗的(de)核(he)心原理、優(you)勢及(ji)其(qi)在多(duo)種核心科研場景(jing)中的應用。

　　壹(yi)、 核心原理：為何選擇HRP?

　　HRP標(biao)記(ji)二抗，本(ben)質是將(jiang)壹(yi)種來(lai)源(yuan)於辣(la)根(gen)的(de)過(guo)氧化(hua)物(wu)酶(mei)通過(guo)化(hua)學方(fang)法(fa)共(gong)價連(lian)接(jie)到(dao)二抗(通(tong)常(chang)是抗(kang)某(mou)種屬(shu)IgG的(de)抗(kang)體(ti))上。其(qi)工(gong)作(zuo)原理是壹(yi)個精(jing)巧的“信(xin)號放大(da)"過(guo)程：

　　特異性(xing)識(shi)別(bie)：壹(yi)抗與(yu)目標(biao)抗(kang)原(yuan)(蛋(dan)白)特異性(xing)結合(he)。

　　橋聯(lian)放大(da)：HRP標(biao)記(ji)的二抗再與壹(yi)抗的(de)Fc段特異性(xing)結合(he)。壹(yi)個壹(yi)抗分(fen)子可(ke)以(yi)結合(he)多(duo)個二抗分(fen)子，實現初(chu)步(bu)信(xin)號放大(da)。

　　催(cui)化(hua)顯(xian)色：加入(ru)HRP的(de)底物後(hou)，HRP催(cui)化(hua)底(di)物發生(sheng)反(fan)應(ying)，生(sheng)成可(ke)檢(jian)測(ce)的(de)信(xin)號。壹(yi)個HRP分(fen)子在反應中可(ke)以(yi)催(cui)化(hua)成千上萬個底物分(fen)子轉(zhuan)化(hua)，實現信(xin)號的級(ji)聯(lian)放大(da)，從而將微弱(ruo)的抗原-抗(kang)體(ti)反(fan)應轉(zhuan)化(hua)為強大(da)的可(ke)檢(jian)測(ce)信(xin)號。

　　HRP的優(you)勢在於：

　　高(gao)催(cui)化(hua)效(xiao)率：信(xin)號放大(da)效果，靈敏度(du)高(gao)。

　　底(di)物多(duo)樣性(xing)：擁有(you)多(duo)種顯色、化(hua)學發(fa)光(guang)和(he)熒(ying)光(guang)底(di)物(wu)，適配(pei)不(bu)同(tong)檢(jian)測(ce)平(ping)臺(tai)和需(xu)求(qiu)。

　　穩(wen)定(ding)性(xing)好：易(yi)於儲存和(he)運(yun)輸。

　　成本(ben)低(di)廉：技(ji)術(shu)成熟(shu)，性(xing)價比(bi)高(gao)。

　　二、 核心科研應用(yong)場(chang)景

　　HRP標(biao)記(ji)二抗的(de)應(ying)用極其(qi)廣(guang)泛(fan)：

　　1. 蛋白(bai)質印跡

　　作(zuo)用：這是HRP標(biao)記(ji)二抗應(ying)用(yong)。在蛋白經(jing)電(dian)泳分(fen)離並(bing)轉(zhuan)膜後(hou)，HRP標(biao)記(ji)的二抗與(yu)結(jie)合了(le)目標(biao)蛋(dan)白(bai)的(de)壹(yi)抗反(fan)應。隨(sui)後(hou)，加入(ru)化(hua)學發(fa)光(guang)底(di)物(wu)，HRP催(cui)化(hua)底(di)物發光(guang)，通(tong)過(guo)X光(guang)膠(jiao)片(pian)或(huo)化(hua)學發(fa)光(guang)成像系統捕獲信(xin)號，從而對目標(biao)蛋(dan)白(bai)進(jin)行(xing)定(ding)性(xing)和半定(ding)量(liang)分(fen)析。

　　BUNSEN提示(shi)：化(hua)學發(fa)光(guang)法(fa)具(ju)有(you)靈敏度(du)高(gao)、動(dong)態範圍(wei)廣的優(you)點，是Western Blot的(de)選擇檢(jian)測(ce)方(fang)法(fa)。

　　2. 酶(mei)聯(lian)免疫(yi)吸附(fu)實驗(yan)(ELISA)

　　作(zuo)用：在ELISA中，HRP標(biao)記(ji)的二抗是信(xin)號輸出的關鍵(jian)。無論是直(zhi)接法(fa)、間(jian)接(jie)法(fa)還(hai)是夾(jia)心法(fa)ELISA，最(zui)終都需要HRP標(biao)記(ji)的二抗與(yu)固相(xiang)上捕獲的(de)壹(yi)抗-抗(kang)原復(fu)合(he)物結(jie)合(he)。加入(ru)顯(xian)色底物後(hou)，HRP催(cui)化(hua)底(di)物產生(sheng)顏(yan)色(se)變(bian)化(hua)，通(tong)過(guo)酶(mei)標(biao)儀(yi)測(ce)定(ding)吸光(guang)度(du)值(zhi)進(jin)行(xing)定(ding)量(liang)。

　　BUNSEN提示(shi)：常(chang)用(yong)的(de)顯色底(di)物(wu)有(you)TMB、OPD等(deng)。

　　3. 免疫(yi)組(zu)織(zhi)化(hua)學/免疫(yi)細胞化(hua)學(IHC/ICC)

　　作(zuo)用：用於在組(zu)織(zhi)切片(pian)或(huo)細(xi)胞爬片(pian)上定(ding)位(wei)目標(biao)蛋(dan)白(bai)的(de)表達和(he)分(fen)布(bu)。HRP標(biao)記(ji)的二抗與(yu)壹(yi)抗結(jie)合後(hou)，加入(ru)顯(xian)色底物，在蛋白所(suo)在位(wei)置生(sheng)成不(bu)溶(rong)性(xing)的有(you)色沈澱物(如(ru)DAB產生(sheng)棕(zong)色(se)沈澱)，從而在顯微鏡下(xia)清(qing)晰(xi)可(ke)見(jian)。

　　4. 免疫(yi)斑點/蛋白(bai)芯(xin)片(pian)

　　作(zuo)用：原理與Western Blot和(he)ELISA類(lei)似，用於檢(jian)測(ce)固定(ding)在膜上或(huo)芯(xin)片(pian)上的特(te)定(ding)蛋白(bai)。HRP標(biao)記(ji)的二抗同(tong)樣通(tong)過(guo)催(cui)化(hua)底(di)物顯色(se)或(huo)發(fa)光(guang)來(lai)產生(sheng)信(xin)號。

　　三(san)、 關鍵(jian)選擇因素與實驗(yan)優(you)化(hua)

　　為了(le)獲得(de)最(zui)佳的(de)實驗(yan)結(jie)果，在選擇和使用HRP標(biao)記(ji)二抗時(shi)，需(xu)考慮(lv)以(yi)下幾(ji)點(dian)：

　　二抗的(de)宿(xiu)主來(lai)源(yuan)與特異性(xing)：必(bi)須(xu)針對壹(yi)抗的(de)宿(xiu)主物種(zhong)選擇相應的二抗。例如，壹(yi)抗是小(xiao)鼠(shu)來(lai)源(yuan)的IgG，則(ze)應選擇抗小鼠(shu)的(de)HRP標(biao)記(ji)二抗。同(tong)時，應(ying)選擇經(jing)過(guo)吸附(fu)處(chu)理的雙重(zhong)或(huo)多(duo)重(zhong)吸附(fu)二抗，以(yi)避免與(yu)樣本(ben)中其(qi)他(ta)免疫(yi)球蛋白(bai)發(fa)生(sheng)交(jiao)叉反(fan)應。

　　檢(jian)測(ce)方(fang)法(fa)的(de)選擇：根(gen)據(ju)實驗(yan)平(ping)臺(tai)選擇相應的底物。

　　化(hua)學發(fa)光(guang)：用(yong)於Western Blot，靈敏度(du)最(zui)高(gao)。

　　比(bi)色法(fa)：用(yong)於ELISA、IHC，肉眼(yan)或(huo)酶(mei)標(biao)儀(yi)可(ke)見(jian)。

　　熒(ying)光(guang)法(fa)：有(you)新型的HRP熒(ying)光(guang)底(di)物(wu)，可(ke)用(yong)於多(duo)色檢(jian)測(ce)，但不如化(hua)學發(fa)光(guang)常(chang)用(yong)。

　　避(bi)免內(nei)源(yuan)性(xing)過(guo)氧化(hua)物(wu)酶(mei)幹擾：在富含內源(yuan)性(xing)過(guo)氧化(hua)物(wu)酶(mei)的組(zu)織(zhi)中做(zuo)IHC時(shi)，需(xu)進(jin)行(xing)過(guo)氧化(hua)氫(qing)阻(zu)斷步(bu)驟，以(yi)避免假(jia)陽(yang)性(xing)信(xin)號。

　　優(you)化(hua)稀(xi)釋比例：需通過(guo)預實驗(yan)確(que)定(ding)二抗的(de)最(zui)佳工(gong)作(zuo)濃度(du)，濃(nong)度(du)過(guo)高(gao)會(hui)導致(zhi)背(bei)景(jing)深，過(guo)低(di)則(ze)信(xin)號弱(ruo)。

　　四、 BUNSEN本(ben)生(sheng)總結(jie)

　　HRP標(biao)記(ji)的二抗憑(ping)借(jie)其(qi)高(gao)效(xiao)的信(xin)號放大(da)能力(li)和(he)靈活的應(ying)用(yong)適配(pei)性(xing)，已成為免疫(yi)學研究(jiu)中的工(gong)具。從分(fen)子水(shui)平的(de)Western Blot定(ding)量(liang)，到(dao)細(xi)胞水平的(de)ICC定(ding)位(wei)，再到(dao)溶(rong)液(ye)中的ELISA精(jing)確定(ding)量(liang)，其(qi)身(shen)影(ying)無處(chu)不在。

　　核心價值(zhi)在於：它將特異的免疫(yi)識(shi)別(bie)與高(gao)效(xiao)的酶(mei)催(cui)化(hua)反(fan)應相結(jie)合，將(jiang)不(bu)可(ke)見(jian)的(de)生(sheng)物(wu)分(fen)子相(xiang)互作(zuo)用，轉化(hua)為可(ke)見(jian)、可(ke)讀(du)、可(ke)量(liang)化(hua)的(de)科學數(shu)據(ju)。

　　註意：以(yi)上僅供(gong)參(can)考，不作(zuo)為實際(ji)數(shu)據(ju)，實驗(yan)需(xu)嚴(yan)格遵循說明(ming)或(huo)咨(zi)詢(xun)技(ji)術(shu)老師(shi)。

　　HRP標(biao)記(ji)二抗 天津(jin)本(ben)生(sheng)壹(yi)直(zhi)視(shi)質量(liang)控制為企業(ye)的生(sheng)命(ming)，追(zhui)求(qiu)企(qi)業(ye)競(jing)爭(zheng)力(li)的(de)不(bu)斷(duan)提升。公司在經(jing)營(ying)中始終秉(bing)承：遵紀守(shou)法(fa)，嚴(yan)於律(lv)己，寬(kuan)仁以(yi)待，敢(gan)於承擔(dan)的企業精(jing)神作(zuo)為標(biao)準，以(yi)過(guo)硬(ying)的質量(liang)和優(you)良的(de)服務(wu)來(lai)維護(hu)和拓(tuo)展市(shi)場，較(jiao)大(da)限度(du)的(de)滿(man)足客戶(hu)的(de)需求(qiu)。與(yu)客戶(hu)的(de)共(gong)贏(ying)，是我(wo)們(men)的發(fa)展目標(biao)。本(ben)生(sheng)!您(nin)信(xin)任(ren)的合(he)作(zuo)夥伴。我們(men)願與(yu)您(nin)真(zhen)誠(cheng)合(he)作(zuo)，共(gong)創美(mei)好的未(wei)來(lai)。本(ben)生(sheng)試(shi)劑盒