酶免(mian)反應顯色(se)淡、靈(ling)敏度偏(pian)低的原(yuan)因及(ji)解決方(fang)案

　　壹(yi)、主要原(yuan)因分析

　　標本(ben)問題(ti)‌

　　目標蛋白濃(nong)度過低‌：標本(ben)中待測物質(zhi)濃度低於檢(jian)測下限(xian)，導致(zhi)抗原(yuan)-抗(kang)體(ti)結(jie)合(he)不足‌。

　　幹(gan)擾物(wu)質(zhi)存在(zai)‌：如高濃(nong)度脂質、血(xue)紅蛋白、類風(feng)濕(shi)因子或(huo)防腐劑(如疊(die)氮鈉)抑制(zhi)反應‌。

　　試(shi)劑與(yu)操作(zuo)問題(ti)‌

　　抗(kang)體效價(jia)不足‌：壹(yi)抗(kang)/二(er)抗(kang)保存不當(dang)(反復(fu)凍(dong)融、過期)或(huo)稀(xi)釋(shi)比(bi)例不匹(pi)配(pei)‌。

　　孵(fu)育(yu)條件不當(dang)‌：溫度或(huo)時(shi)間(jian)未(wei)達(da)標(如(ru)37℃孵(fu)育(yu)不足30分鐘)‌。

　　洗(xi)滌(di)不凈(jing)：殘留(liu)未結(jie)合(he)抗體或(huo)幹(gan)擾物(wu)，或(huo)洗(xi)液(ye)配制(zhi)錯(cuo)誤(wu)(如(ru)濃(nong)縮(suo)洗(xi)液(ye)未按比例稀釋(shi))‌。

　　儀(yi)器與(yu)參(can)數(shu)問題(ti)‌

　　酶(mei)標儀(yi)濾(lv)光(guang)片設置錯(cuo)誤(wu)‌：波(bo)長(chang)選擇不當(dang)(如TMB底物(wu)應選(xuan)450nm)‌。

　　顯色(se)時間(jian)不足‌：TMB底物(wu)孵(fu)育(yu)時(shi)間(jian)過(guo)短(建議15分鐘以上)‌。

　　二(er)、針(zhen)對(dui)性解決方(fang)案

　　優(you)化(hua)標本(ben)處理‌

　　低濃度標本(ben)可通(tong)過(guo)超濾(lv)離心濃縮(suo)‌。

　　添加(jia)蛋白酶(mei)抑制(zhi)劑或(huo)稀(xi)釋(shi)樣(yang)本(ben)以減少(shao)基質幹(gan)擾‌。

　　驗證試(shi)劑與(yu)操作(zuo)‌

　　檢(jian)查抗(kang)體(ti)效價(jia)，重新滴定(ding)工作(zuo)濃(nong)度(如抗(kang)體套裝(zhuang)，效價(jia)≥1:5000)‌。

　　嚴格(ge)控(kong)溫控(kong)時(shi)(37℃振蕩(dang)孵(fu)育(yu))，避(bi)免(mian)酶標板(ban)幹(gan)燥‌。

　　規範(fan)儀(yi)器使用(yong)‌

　　校準(zhun)酶(mei)標儀(yi)波(bo)長(chang)(如TMB底物(wu)450nm)‌。

　　延(yan)長(chang)顯色(se)時間(jian)(TMB孵(fu)育(yu)15分鐘)並(bing)避(bi)光(guang)操作(zuo)‌。

　　三(san)、擴展閱(yue)讀(du)

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