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BUNSEN課(ke)堂(tang):區分ELISA試(shi)劑盒的(de)方法
掌(zhang)握(wo)區(qu)分(fen)方法不(bu)僅(jin)能(neng)幫(bang)助您(nin)選(xuan)擇(ze)適(shi)合實驗的試(shi)劑盒,還(hai)能(neng)確保(bao)實驗結果的準確(que)性和可(ke)靠(kao)性。我(wo)們可(ke)以(yi)從(cong)以下幾(ji)個(ge)核心(xin)維度進行區分:
第壹(yi)維度:根據“檢測原理"區分(最根(gen)本的(de)區分(fen))
這(zhe)是選(xuan)擇(ze)試(shi)劑盒的(de)首(shou)要(yao)步驟(zhou),決定了(le)實驗的設(she)計(ji)和(he)結果的分析方式(shi)。
直(zhi)接(jie)法(fa) ELISA
原理:將酶直接標記在(zai)壹抗(kang)上(shang),直(zhi)接(jie)與抗(kang)原結合進(jin)行檢測。
特點(dian):步(bu)驟(zhou)少,耗(hao)時(shi)短,交叉(cha)反(fan)應(ying)少。但信號可(ke)能(neng)較弱(ruo),且每(mei)種壹抗(kang)都(dou)需(xu)要(yao)單(dan)獨(du)標記,靈(ling)活性差。
區分關(guan)鍵詞(ci):操作簡(jian)單(dan)、快速、壹(yi)抗(kang)直(zhi)接(jie)標記。
間接法(fa) ELISA
原理:壹抗(kang)與抗(kang)原結合後(hou),再(zai)用(yong)酶(mei)標記的(de)二抗(kang)去識(shi)別並結合壹(yi)抗(kang)。
特(te)點(dian):信(xin)號(hao)放(fang)大作用(yong)強(壹(yi)個(ge)抗(kang)原可結合多個(ge)二抗(kang)),靈(ling)敏(min)度高,無(wu)需(xu)標記每(mei)種壹(yi)抗(kang),成(cheng)本(ben)低(di)應(ying)用廣泛。
區分(fen)關(guan)鍵詞(ci):靈敏(min)度高、常用、使(shi)用(yong)酶(mei)標二抗(kang)。
夾(jia)心(xin)法(fa) ELISA
原理:需要(yao)兩種(zhong)特(te)異(yi)性抗(kang)體(捕獲抗(kang)體和檢測抗(kang)體),分別識(shi)別抗(kang)原的不(bu)同表位(wei)。先(xian)將捕獲抗(kang)體包被(bei)在(zai)板(ban)子上,捕(bu)獲抗(kang)原後(hou),再(zai)加(jia)入(ru)檢測抗(kang)體和酶標二抗(kang)。
特(te)點(dian):靈(ling)敏(min)度最高(gao),特異(yi)性強,適(shi)用於(yu)復(fu)雜(za)樣(yang)品(如(ru)血(xue)清(qing)、細(xi)胞培(pei)養(yang)液(ye))中(zhong)微量(liang)抗(kang)原的檢測。但要(yao)求抗(kang)原至(zhi)少有(you)兩個(ge)以上(shang)的(de)表(biao)位(wei)。
區(qu)分關(guan)鍵詞(ci):高靈(ling)敏(min)度、高特(te)異(yi)性、適(shi)用於(yu)復(fu)雜(za)樣(yang)品、需要(yao)配對(dui)抗(kang)體。
競爭法(fa) ELISA
原理:樣(yang)本(ben)中(zhong)的抗(kang)原和酶(mei)標抗(kang)原競爭結合有(you)的抗(kang)體。樣(yang)本(ben)中(zhong)抗(kang)原越(yue)多,酶標抗(kang)原結合的(de)就越(yue)少(shao),最終(zhong)顯色(se)信(xin)號就越(yue)弱(ruo)。
特(te)點(dian):適(shi)用於(yu)小(xiao)分(fen)子抗(kang)原(半抗(kang)原),如(ru)激素(su)、藥(yao)物(wu)等,因為(wei)小(xiao)分子很難(nan)同時被(bei)兩(liang)個(ge)抗(kang)體結合(無(wu)法(fa)做夾(jia)心(xin)法(fa))。
區分(fen)關(guan)鍵詞(ci):小分(fen)子檢測、信號(hao)與濃度成反(fan)比(bi)、競爭。
課(ke)堂(tang)小結壹:先(xian)看說明(ming)書(shu)中(zhong)的原理圖(tu)!
檢測大分(fen)子蛋白(bai),選(xuan)擇(ze)夾(jia)心(xin)法(fa)。
檢測小分(fen)子化合物(wu),選(xuan)擇(ze)競爭法(fa)。
如(ru)果只是檢測抗(kang)體效(xiao)價(jia)(如(ru)血(xue)清(qing)抗(kang)體),常用間接法(fa)。
第二(er)維度:根據“樣(yang)品類型"和“檢測指標"區分(fen)
物(wu)種來源
試劑盒的(de)抗(kang)體是針對(dui)人 (Human)、大(da)鼠(shu) (Rat)、小鼠(shu) (Mouse)、豬(zhu) (Porcine) 等哪個(ge)物(wu)種的?必須匹(pi)配(pei)您(nin)的(de)實驗樣(yang)品物(wu)種。
樣(yang)品基質
您(nin)的(de)樣(yang)品是血(xue)清(qing)、血(xue)漿(jiang)、細(xi)胞培(pei)養(yang)上(shang)清(qing)液(ye)、組織裂解液(ye)還(hai)是(shi)尿(niao)液(ye)?不(bu)同基質可能(neng)會產(chan)生(sheng)幹(gan)擾(rao)。好的(de)試(shi)劑盒會(hui)提供明(ming)確的樣(yang)品稀(xi)釋範(fan)圍和預(yu)處(chu)理建(jian)議。
檢測指標
明(ming)確您(nin)要(yao)檢測的是(shi)哪種(zhong)蛋白(bai)或(huo)因子,例(li)如(ru) IL-6, TNF-α, Insulin 等。
第三(san)維度:根據“性能(neng)參數(shu)"區(qu)分(判(pan)斷質量高(gao)低(di))
靈(ling)敏(min)度
指試劑盒能(neng)夠檢測出的(de)低(di)濃(nong)度。值(zhi)越(yue)低(di),靈(ling)敏(min)度越(yue)高(gao),越(yue)能(neng)檢測低(di)豐(feng)度指標。
檢測範(fan)圍
指標準曲(qu)線的最小(xiao)濃度到最大(da)濃度之(zhi)間的線(xian)性範(fan)圍。確保您(nin)樣(yang)品中(zhong)待(dai)測物(wu)的預(yu)估(gu)濃(nong)度落(luo)在這(zhe)個(ge)範(fan)圍內(nei)。
精密(mi)度
包括(kuo)板(ban)內(nei)精密(mi)度(同壹塊(kuai)板(ban)內(nei)重復(fu)孔的(de)差異(yi))和板(ban)間精密(mi)度(不同板子間的差異(yi)),通常用變(bian)異(yi)系(xi)數 (CV%) 表示,CV% < 10% 表明(ming)精密(mi)度良好。
回(hui)收(shou)率(lv)
向樣(yang)品中(zhong)添加(jia)已(yi)知濃度的標準品,檢測到的(de)值(zhi)與理論值(zhi)的(de)比(bi)率。通(tong)常在 80%-120% 之(zhi)間表明(ming)準確(que)性好,抗(kang)幹(gan)擾(rao)能(neng)力強。
特(te)異(yi)性
指試劑盒只(zhi)識(shi)別目(mu)標抗(kang)原,而不(bu)與其他(ta)類似物(wu)發生(sheng)交叉(cha)反(fan)應(ying)。說明(ming)書(shu)會(hui)列(lie)出已(yi)測試(shi)的交叉(cha)反(fan)應(ying)物(wu)質。
第四(si)維度:根據“試劑盒組成(cheng)"和(he)“便利性"區分(fen)
試(shi)劑是否(fou)預(yu)包被(bei)?
預(yu)包被(bei)板(ban):捕(bu)獲(huo)抗(kang)體已(yi)經包(bao)被(bei)在(zai)板(ban)子上,開(kai)盒即(ji)用,非常方便。
未包(bao)被(bei)板(ban):需(xu)要(yao)用戶自己(ji)包被(bei)抗(kang)體,步驟(zhou)繁瑣但靈活性高,可(ke)自行優化包被(bei)條(tiao)件(jian)。
試(shi)劑是否(fou)即(ji)用型(xing)?
標準品、抗(kang)體等是否(fou)需要(yao)自行稀(xi)釋?即(ji)用型(xing) (Ready-to-use) 試(shi)劑節省時間,減少(shao)操作誤(wu)差。
孵(fu)育(yu)時間
整個(ge)實驗流程(cheng)需要(yao)多長時(shi)間?快速檢測試劑盒 (Fast ELISA) 可(ke)在(zai)2-3小(xiao)時內(nei)完成(cheng),傳統試劑盒可(ke)能(neng)需要(yao)4-5小時(shi)甚(shen)至(zhi)過夜。
BUNSEN課(ke)堂(tang)總結:區分(fen)四(si)步法
定原理:我(wo)是測(ce)大(da)分(fen)子還是(shi)小分(fen)子?決定用(yong)夾(jia)心(xin)法(fa)還是(shi)競爭法(fa)。
對(dui)物(wu)種:我(wo)的樣(yang)品是什麽來(lai)源?確(que)保試劑盒抗(kang)體能(neng)識(shi)別。
看性能(neng):我(wo)的樣(yang)品濃度大概(gai)多少?查(zha)看靈敏度和檢測範(fan)圍是否(fou)覆(fu)蓋(gai)。我(wo)的樣(yang)品復雜嗎?關(guan)註回(hui)收率(lv)和(he)特異(yi)性。
選(xuan)便利:我(wo)需要(yao)多快的(de)速度?選(xuan)擇(ze)預(yu)包被(bei)、即(ji)用型(xing)或(huo)快速試(shi)劑盒。
希(xi)望(wang)這(zhe)期BUNSEN課(ke)堂(tang)能(neng)幫(bang)助您(nin)成(cheng)為(wei)區(qu)分和(he)選(xuan)擇(ze)ELISA試(shi)劑盒的(de)專(zhuan)家(jia)!下次實驗前,記(ji)得(de)仔細(xi)閱(yue)讀(du)產(chan)品說明(ming)書(shu)哦(o)。
註意(yi):以(yi)上(shang)僅(jin)供(gong)參考(kao),不(bu)作為(wei)實際數(shu)據,實驗需嚴(yan)格(ge)遵循(xun)試劑盒說(shuo)明(ming)書(shu),避(bi)免(mian)交叉(cha)汙染,並確(que)保(bao)樣(yang)本(ben)處(chu)理(如(ru)離心(xin)、稀(xi)釋)符(fu)合要(yao)求。
天津本生(sheng)壹(yi)直視質量控(kong)制(zhi)為(wei)企業的(de)生(sheng)命,追(zhui)求(qiu)企業競爭力的不斷提升(sheng)。公(gong)司在(zai)經(jing)營(ying)中(zhong)始終(zhong)秉(bing)承:遵(zun)紀(ji)守法,嚴(yan)於(yu)律(lv)己(ji),寬仁以(yi)待(dai),敢(gan)於承擔(dan)的(de)企業精神作為(wei)標準,以(yi)過硬(ying)的質量和(he)優(you)良的服(fu)務(wu)來維護(hu)和拓(tuo)展市(shi)場,較大限(xian)度的滿(man)足(zu)客戶的需(xu)求。與客戶的共(gong)贏,是(shi)我(wo)們的(de)發展(zhan)目(mu)標。本生(sheng)!您(nin)信(xin)任(ren)的(de)合作夥(huo)伴。我(wo)們願(yuan)與您(nin)真誠(cheng)合作,共(gong)創(chuang)美好的(de)未來(lai)。
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