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顯色(se)液A和(he)B液是否可(ke)以替代?
以下(xia)是關(guan)於(yu)顯色(se)液A和(he)B液是否可(ke)替代的(de)詳細分(fen)析,本生綜合(he)了不(bu)同實(shi)驗(yan)場(chang)景(jing)下的替代方(fang)案(an)與註(zhu)意(yi)事(shi)項(xiang):
壹、顯色(se)液A/B液的(de)典(dian)型成(cheng)分與作(zuo)用
HRP酶體(ti)系中
A液:通常(chang)為(wei)H₂O₂(過氧(yang)化氫(qing)),作(zuo)為HRP的(de)受(shou)氫(qing)體(ti)。
B液:多(duo)為TMB(四(si)甲(jia)基(ji)聯苯胺(an))或(huo)OPD(鄰(lin)苯二胺(an)),作(zuo)為供(gong)氫(qing)體(ti)生成顯色(se)產物(wu)。
AP酶體(ti)系中
A液:緩(huan)沖(chong)液(如(ru)Tris-HCl),維持(chi)反應(ying)pH環境(jing)。
B液:PNP(對(dui)硝基(ji)苯磷酸酯),生(sheng)成黃色產物(wu)(檢(jian)測(ce)波長(chang)405nm)。

二(er)、替代方(fang)案(an)的可(ke)行(xing)性(xing)分(fen)析(xi)
同類(lei)試劑替代
TMB與(yu)OPD互(hu)換:兩者均為(wei)HRP底(di)物(wu),但OPD毒性更(geng)高(gao)且(qie)需(xu)避(bi)光操作(zuo)。
H₂O₂濃度調整:若A液(H₂O₂)濃度不(bu)足(zu),可(ke)用3%醫用雙氧(yang)水稀釋替代(需(xu)驗(yan)證(zheng)反應(ying)效率)。
跨(kua)體(ti)系替代限制(zhi)
HRP與AP體(ti)系不(bu)可(ke)互(hu)換:HRP的(de)H₂O₂/TMB組合(he)無法(fa)替代AP的(de)PNP底(di)物(wu),因反應(ying)機(ji)制(zhi)不(bu)同。
終止(zhi)液不(bu)可(ke)省略(lve):終止(zhi)液對(dui)TMB顯色(se)產物(wu)穩定性至(zhi)關(guan)重(zhong)要(yao),不(bu)可(ke)用其(qi)他(ta)酸(如(ru)鹽酸)替代。
三(san)、替代操作(zuo)註意(yi)事(shi)項(xiang)
毒性防(fang)護(hu)
TMB/OPD具(ju)潛(qian)在致(zhi)癌性(xing),操作(zuo)需戴(dai)手(shou)套並(bing)在通風(feng)櫥(chu)中進行(xing)。
替代試劑(如丙(bing)酮(tong)或甲醇(chun))可(ke)能(neng)幹擾(rao)酶活(huo)性,需預(yu)實(shi)驗(yan)驗(yan)證(zheng)。
反應(ying)條(tiao)件控(kong)制(zhi)
酸度影響顯色(se)效果(guo),替代需(xu)嚴格匹(pi)配(pei)原(yuan)體(ti)系的pH範圍(如HRP體(ti)系pH 5-7)。
顯色(se)液現配(pei)現用,混(hun)合(he)後超過1小時會導致(zhi)靈敏度下降(jiang)。
四(si)、不(bu)推薦的替代場(chang)景(jing)
ELISA試劑盒:試劑盒的A/B液為(wei)優化配(pei)方(fang),自(zi)行(xing)替代可(ke)能(neng)影響檢(jian)測(ce)限或特(te)異性(xing)。
化學發(fa)光檢(jian)測(ce):魯米(mi)諾體(ti)系的A液(緩(huan)沖(chong)液)與(yu)B液(氧(yang)化劑)不(bu)可(ke)隨(sui)意(yi)替換(huan),需(xu)匹(pi)配(pei)激(ji)發(fa)波長(chang)。
如(ru)需進壹步探(tan)討(tao)特定(ding)實(shi)驗(yan)的(de)替代方(fang)案(an),建議(yi)參考(kao)試劑說明(ming)書(shu)或咨(zi)詢供(gong)應(ying)商(shang)技術(shu)支持(chi)。
註:以上資料僅供(gong)參考(kao),不(bu)作(zuo)為實(shi)際數據(ju),如需(xu)其(qi)他(ta)請咨(zi)詢技(ji)術(shu)老師或(huo)品(pin)牌(pai)供(gong)應(ying)商(shang)。
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