在(zai)使用BUNSEN生(sheng)化(hua)試(shi)劑盒(he)進行實(shi)驗時，可(ke)能(neng)會遇(yu)到壹些影響結(jie)果(guo)的(de)問題。本指南(nan)旨(zhi)在(zai)幫(bang)助您快速定位(wei)問題根(gen)源(yuan)並(bing)找(zhao)到(dao)解(jie)決方(fang)案，確(que)保實(shi)驗的(de)準(zhun)確(que)性(xing)和可(ke)靠性(xing)。

　　壹、 標(biao)準曲線(xian)/結(jie)果(guo)不佳(jia)類問題

　　問題：標(biao)準曲線(xian)線(xian)性(xing)差(R² < 0.99)

　　可(ke)能(neng)原(yuan)因及解決方(fang)案：

　　標(biao)準品(pin)配制(zhi)錯誤：檢(jian)查標(biao)準品(pin)復溶(rong)體積是否(fou)正(zheng)確(que)，稀(xi)釋是(shi)否精(jing)確(que)，是(shi)否使用(yong)了指定的(de)稀(xi)釋液。建(jian)議(yi)使用(yong)校準過(guo)的(de)移(yi)液器並(bing)嚴格按說(shuo)明(ming)書步驟(zhou)操作。

　　移(yi)液操作不精(jing)確(que)：確(que)保移(yi)液器精(jing)度(du)可(ke)靠，吸(xi)頭(tou)與(yu)移(yi)液器匹配(pei)且氣(qi)密性良好(hao)。吸(xi)取(qu)不同(tong)濃度(du)標(biao)準品(pin)時務(wu)必(bi)更換(huan)吸(xi)頭(tou)，避(bi)免(mian)交叉(cha)汙(wu)染(ran)。

　　孵(fu)育(yu)時間(jian)或(huo)溫度(du)不壹致：確(que)保酶標(biao)板(ban)在(zai)孵育時被(bei)嚴密蓋(gai)好，防(fang)止(zhi)蒸(zheng)發造成(cheng)邊緣(yuan)效應(ying)，並(bing)使(shi)用(yong)穩(wen)定的(de)恒溫孵育(yu)箱。

　　試(shi)劑未(wei)充分平衡(heng)至(zhi)室溫：所(suo)有試(shi)劑必(bi)須(xu)在實(shi)驗前(qian)平衡(heng)至(zhi)室溫(18-25℃)，否則反應(ying)速(su)率(lv)不壹致，導致OD值(zhi)偏(pian)差。

　　問題：吸(xi)光(guang)度(du)值(zhi)普遍(bian)偏低(di)，靈(ling)敏度(du)不足(zu)

　　可(ke)能(neng)原(yuan)因及解決方(fang)案：

　　孵育(yu)時間(jian)不足(zu)：確(que)保每壹步反應(ying)都(dou)在(zai)說(shuo)明(ming)書規定的(de)時間(jian)內完成，尤其(qi)是顯色步驟(zhou)。

　　試(shi)劑過(guo)期或儲(chu)存(cun)不當：檢(jian)查試(shi)劑盒(he)有效期及儲存(cun)條件(jian)(如(ru)2-8℃避(bi)光(guang))。切勿使用(yong)過期試(shi)劑。某些組分(如(ru)標(biao)準品(pin)、酶制(zhi)品(pin))開蓋(gai)前需(xu)離心，防(fang)止(zhi)粉(fen)末(mo)損(sun)失(shi)。

　　洗(xi)滌過於(yu)劇(ju)烈(lie)或洗(xi)滌次數(shu)過(guo)多(duo)：導致結合(he)的(de)酶標(biao)記物被(bei)洗(xi)脫。請遵循說明(ming)書推(tui)薦(jian)的(de)洗(xi)滌次數(shu)和浸泡(pao)時間(jian)。

　　樣(yang)本中待測物濃度(du)過(guo)低(di)：確(que)認(ren)樣本是否(fou)需要(yao)進(jin)行濃縮處(chu)理，或選(xuan)用更高靈(ling)敏(min)度(du)的(de)試(shi)劑盒(he)。

　　問題：吸(xi)光(guang)度(du)值(zhi)普遍(bian)偏高(gao)，背(bei)景深(shen)

　　可(ke)能(neng)原(yuan)因及解決方(fang)案：

　　洗(xi)滌不凈：確(que)保每孔(kong)都加滿(man)洗(xi)滌液，每(mei)次(ci)洗(xi)滌後均在(zai)吸(xi)水(shui)紙(zhi)上(shang)拍幹(gan)，防(fang)止(zhi)液體殘(can)留。檢(jian)查洗(xi)板(ban)機(ji)通道是(shi)否堵塞。

　　非(fei)特(te)異性結(jie)合(he)：樣(yang)本中可(ke)能(neng)含(han)有幹擾(rao)物質。確(que)保樣本已(yi)按說(shuo)明(ming)書要(yao)求(qiu)進(jin)行適當稀(xi)釋或(huo)預處(chu)理(如離心去(qu)除沈(chen)澱(dian)物)。

　　顯色時間(jian)過(guo)長：TMB底(di)物顯色時間(jian)需(xu)嚴格控(kong)制(zhi)，壹旦(dan)標(biao)準曲線(xian)最高點(dian)出現明(ming)顯藍(lan)色即可(ke)終止(zhi)。過(guo)度(du)顯色會導(dao)致(zhi)背(bei)景過(guo)高(gao)。

　　酶結(jie)合(he)物或檢(jian)測抗(kang)體濃度(du)過(guo)高：確(que)認(ren)是否按說(shuo)明(ming)書比例(li)稀(xi)釋，嚴禁自行改變試(shi)劑用(yong)量。

　　二(er)、 操作與(yu)重復性(xing)類問題

　　問題：復孔(kong)間差異大(da)(重復性(xing)差)

　　可(ke)能(neng)原(yuan)因及解決方(fang)案：

　　移(yi)液誤差：這是(shi)最常見(jian)的(de)原(yuan)因。檢查移(yi)液器精(jing)度(du)，確(que)保吸(xi)頭(tou)內壁液體被(bei)排(pai)出(chu)，操作手(shou)法(fa)保持壹致。

　　樣本未混(hun)勻(yun)：加(jia)樣(yang)前，所(suo)有液體(樣本、標(biao)準品(pin)、試(shi)劑)應(ying)通過輕(qing)微(wei)渦(wo)旋(xuan)或(huo)反復吹(chui)打(da)的(de)方(fang)式(shi)充分混勻(yun)。

　　微(wei)孔(kong)板(ban)底(di)部(bu)有殘(can)留液體或氣(qi)泡(pao)：洗(xi)板(ban)後務(wu)必(bi)拍幹(gan)，加(jia)液後檢查孔(kong)內是否(fou)有氣(qi)泡(pao)，可(ke)用幹(gan)凈槍(qiang)頭戳(chuo)破(po)。

　　部(bu)分(fen)孔(kong)反應(ying)液蒸(zheng)發(fa)：孵育(yu)時務(wu)必(bi)使用(yong)高(gao)質(zhi)量的(de)封(feng)板(ban)膜密(mi)封(feng)板(ban)孔(kong)，確(que)保密封(feng)性(xing)。

　　問題：整板(ban)顏(yan)色不均勻(yun)(邊緣(yuan)效應(ying))

　　可(ke)能(neng)原(yuan)因及解決方(fang)案：

　　孵育(yu)溫度(du)不均：確(que)保酶標(biao)板(ban)在(zai)孵育時離開冰(bing)箱(xiang)冷(leng)凝(ning)水(shui)，並(bing)水(shui)平放(fang)置在(zai)孵(fu)育(yu)箱內部(bu)，不要(yao)靠近(jin)箱(xiang)門或(huo)邊緣(yuan)。

　　板(ban)孔(kong)間溫差：孵育時不要(yao)疊(die)放(fang)多(duo)塊(kuai)板(ban)子(zi)，以免(mian)阻礙(ai)熱(re)傳(chuan)導。

　　操作時間(jian)差異過大(da)：從加(jia)樣(yang)到(dao)孵育的(de)間(jian)隔時間(jian)應(ying)盡(jin)量(liang)短(duan)，避(bi)免(mian)板(ban)孔(kong)內反應(ying)時間(jian)不壹致。

　　三(san)、 樣(yang)本相(xiang)關類問題

　　問題：計算結(jie)果(guo)異常(過(guo)高(gao)或(huo)過低(di))

　　可(ke)能(neng)原(yuan)因及解決方(fang)案：

　　樣本類型不符(fu)：確(que)認(ren)您使用(yong)的(de)樣(yang)本類型(血清、血漿(jiang)、細胞上(shang)清、組織勻(yun)漿(jiang)等(deng))是(shi)否在(zai)試(shi)劑盒(he)說明(ming)書的(de)檢(jian)測範圍(wei)內。不同(tong)樣(yang)本需使(shi)用不同(tong)的(de)稀(xi)釋液或(huo)預(yu)處(chu)理方(fang)法。

　　樣(yang)本稀(xi)釋倍數(shu)錯誤：計算結(jie)果(guo)時，務(wu)必(bi)記得(de)乘以(yi)樣本的(de)總稀(xi)釋倍數(shu)。

　　鉤狀(zhuang)效應(ying)(High Dose Hook Effect)：對於(yu)超(chao)高濃度(du)的(de)樣(yang)本，可(ke)能(neng)導致結(jie)果(guo)假(jia)性偏(pian)低(di)。應(ying)對樣(yang)本進行多(duo)個(ge)梯度(du)的(de)稀(xi)釋後再測，觀(guan)察(cha)結果(guo)是否(fou)隨(sui)稀(xi)釋倍數(shu)成(cheng)比例(li)變化(hua)。

　　樣本中含(han)有幹擾(rao)物質：如(ru)高脂(zhi)血癥血清可(ke)能(neng)引(yin)起濁(zhuo)度(du)幹(gan)擾(rao)，溶血樣本中的(de)血紅蛋(dan)白、類風濕因子等(deng)都(dou)可(ke)能(neng)幹擾(rao)檢測。必(bi)要時對樣(yang)本進行純(chun)化(hua)。

　　排障流(liu)程圖：快(kuai)速(su)定位(wei)問題

　　遇(yu)到問題 →

　　回(hui)顧實(shi)驗記錄(lu)：確(que)認(ren)每壹步操作是(shi)否嚴格按說(shuo)明(ming)書進(jin)行。

　　檢(jian)查儀(yi)器與(yu)試(shi)劑：移(yi)液器是否校準(zhun)?試(shi)劑是(shi)否在(zai)有效期內並(bing)正(zheng)確(que)保存(cun)?是否(fou)平衡(heng)至(zhi)室溫?

　　分析(xi)標(biao)準曲線(xian)：

　　如(ru)果(guo)標(biao)準曲線(xian)良好(hao) → 問題很可(ke)能(neng)出在樣(yang)本本身(稀(xi)釋、類型、幹擾(rao)物)。

　　如果(guo)標(biao)準曲線(xian)也出現問題 → 問題很可(ke)能(neng)出在通用操作或(huo)試(shi)劑上(shang)(洗(xi)板(ban)、移(yi)液、孵(fu)育(yu)、試(shi)劑配(pei)制(zhi))。

　　對照本指南(nan)，縮小可(ke)能(neng)原(yuan)因範圍(wei)，並(bing)進(jin)行驗證(zheng)性(xing)實(shi)驗。

　　若以上(shang)方(fang)法仍無法(fa)解決(jue)問題，請聯系BUNSEN本生(sheng)技術(shu)支(zhi)持：

　　請提(ti)供試(shi)劑盒(he)名稱(cheng)、貨號(hao)、批(pi)號(hao)。

　　詳細描述(shu)問題現象(xiang)(可(ke)附上(shang)標(biao)準曲線(xian)圖(tu)和原(yuan)始(shi)數(shu)據(ju))。

　　簡述(shu)您的(de)實(shi)驗操作流(liu)程和樣(yang)本信(xin)息(xi)。

　　註(zhu)：以上(shang)資(zi)料僅供參考，不作為(wei)實(shi)際數(shu)據(ju)，如需其他(ta)請咨詢(xun)技術(shu)老(lao)師或品(pin)牌供應(ying)商(shang)。

　　試(shi)劑盒(he) 本生(sheng)壹直視質量(liang)控(kong)制(zhi)為(wei)企(qi)業(ye)的(de)生(sheng)命(ming)，追(zhui)求企(qi)業(ye)競(jing)爭(zheng)力的(de)不斷提(ti)升。公司在經營(ying)中始(shi)終秉承：遵紀守法(fa)，嚴於律己(ji)，寬(kuan)仁以待，敢(gan)於(yu)承擔(dan)的(de)企(qi)業(ye)精(jing)神作為(wei)標(biao)準，以(yi)過硬的(de)質(zhi)量(liang)和優(you)良的(de)服務(wu)來(lai)維護(hu)和拓(tuo)展市場，較大(da)限度(du)的(de)滿(man)足(zu)客(ke)戶的(de)需(xu)求(qiu)。與(yu)客(ke)戶(hu)的(de)共(gong)贏(ying)，是(shi)我(wo)們的(de)發(fa)展目標(biao)。本生(sheng)!您(nin)信(xin)任(ren)的(de)合(he)作夥(huo)伴。我們(men)願與(yu)您(nin)真(zhen)誠(cheng)合作，共(gong)創(chuang)美好(hao)的(de)未(wei)來(lai)。