以(yi)下是本生(sheng)技(ji)術(shu)小(xiao)編(bian)對ELISA試劑(ji)盒(he)實(shi)驗(yan)操作(zuo)的(de)規範(fan)詳(xiang)解，結合雙(shuang)抗(kang)體(ti)夾(jia)心(xin)法的(de)通(tong)用流(liu)程(cheng)及註意事(shi)項：

　　壹(yi)、實(shi)驗(yan)前準備(bei)‌

　　試劑(ji)平(ping)衡‌

　　試劑(ji)盒(he)從(cong)冰箱(xiang)取出(chu)後(hou)，需室(shi)溫平(ping)衡20-30分鐘(zhong)(避(bi)免溫度差(cha)異影響反(fan)應(ying))‌。

　　設(she)備(bei)校準‌

　　移(yi)液器需定(ding)期(qi)校準，選(xuan)擇(ze)密(mi)封性好(hao)的槍(qiang)頭，避(bi)免加(jia)樣(yang)誤差(cha)(誤差(cha)可(ke)超(chao)5%)‌。

　　二(er)、加(jia)樣(yang)規範(fan)‌

　　標(biao)準品(pin)與樣(yang)本處(chu)理(li)‌

　　標準品(pin)需按說(shuo)明書渦旋溶(rong)解(jie)，靜置(zhi)10-30分鐘至溶解，避(bi)免吹(chui)打導致蛋(dan)白損失(shi)‌。

　　樣(yang)本需離(li)心(xin)(2000×g，15分鐘(zhong))去除(chu)顆粒物(wu)，血(xue)清/血(xue)漿避免(mian)溶(rong)血(xue)或脂血(xue)幹(gan)擾‌。

　　加樣(yang)操作(zuo)‌

　　垂直懸空(kong)加(jia)液(ye)，避免貼(tie)壁或產(chan)生(sheng)氣泡(pao)，每孔(kong)加樣(yang)量(liang)需壹(yi)致(zhi)(如(ru)50μL標(biao)準品(pin)或樣(yang)本)‌。

　　建議設置(zhi)復孔(kong)(至少2孔(kong)/樣(yang)本)，提高數據可(ke)靠(kao)性‌。

　　三(san)、孵育(yu)與洗滌(di)‌

　　孵育(yu)條(tiao)件‌

　　37℃恒(heng)溫箱孵育(yu)60分鐘(zhong)(雙(shuang)抗(kang)體(ti)夾(jia)心(xin)法)，封(feng)板膜(mo)密封(feng)防止蒸(zheng)發‌。

　　震蕩(dang)孵育(yu)可(ke)增(zeng)強(qiang)抗(kang)原(yuan)抗(kang)體(ti)結合效(xiao)率(lv)(OD值(zhi)更(geng)高(gao))‌。

　　洗滌(di)步(bu)驟‌

　　手(shou)工(gong)洗板：每(mei)孔(kong)加滿(man)洗滌液(350μL)，靜置1分(fen)鐘(zhong)後(hou)拍(pai)幹(gan)，重復5次‌。

　　機器洗板：檢(jian)查沖洗(xi)頭(tou)是否堵塞，確保洗(xi)滌凈(jing)。

　　四、顯色(se)與檢測(ce)‌

　　底物(wu)反(fan)應(ying)‌

　　加(jia)入TMB底物後(hou)避(bi)光孵育(yu)15分鐘(zhong)，顯色(se)呈藍色(se)‌。

　　終(zhong)止液(ye)加入後(hou)5分(fen)鐘(zhong)內測(ce)定(ding)OD值(zhi)(450nm)，避(bi)免(mian)延遲導(dao)致(zhi)信(xin)號衰減(jian)‌。

　　數據計(ji)算‌

　　標準(zhun)曲線(xian)需線(xian)性良(liang)好(hao)(R²≥0.99)，樣(yang)本濃度通(tong)過曲線(xian)方(fang)程(cheng)計算‌。

　　五(wu)、常(chang)見問題(ti)與解決(jue)‌

　　問題(ti)‌ ‌可(ke)能(neng)原因(yin)‌ ‌解決(jue)方(fang)案‌

　　空(kong)白孔(kong)OD值(zhi)過(guo)高(gao) 洗滌(di)不(bu)凈(jing)或試劑汙(wu)染 更換新(xin)鮮(xian)洗滌(di)液(ye)，重復洗板‌

　　平(ping)行(xing)孔(kong)CV值(zhi)>10% 加(jia)樣(yang)誤差(cha)或孵育(yu)溫度波(bo)動(dong) 校準移(yi)液器，使用(yong)恒(heng)溫箱‌

　　顯色(se)不(bu)均勻 底物(wu)混合不(bu)充(chong)分 顯色(se)前充(chong)分搖(yao)勻試劑(ji)‌

　　六、關(guan)鍵註意事(shi)項‌

　　試劑(ji)保存‌：未用完板條(tiao)需密(mi)封幹(gan)燥(zao)保存，濃縮(suo)洗滌(di)液結晶需37℃水浴溶解(jie)‌。

　　樣(yang)本稀釋‌：若說(shuo)明書要(yao)求(qiu)稀(xi)釋(shi)樣(yang)本(如5倍)，最(zui)終(zhong)結果(guo)需乘以(yi)稀釋(shi)倍數‌。

　　以(yi)上規範(fan)適(shi)用於多數ELISA試劑(ji)盒，具(ju)體(ti)操(cao)作(zuo)需以(yi)試劑(ji)盒說(shuo)明書為準。實(shi)驗(yan)失敗時建議(yi)優先檢查加(jia)樣(yang)精度和洗(xi)滌(di)步(bu)驟‌。

　　註：以(yi)上資料(liao)僅供(gong)參(can)考(kao)，具(ju)體(ti)其(qi)他信(xin)息請咨(zi)詢(xun)技(ji)術(shu)老(lao)師(shi)或品(pin)牌(pai)供(gong)應(ying)商(shang)。

　　Elisa試劑盒 本生(sheng)壹(yi)直(zhi)視質量(liang)控制(zhi)為(wei)企業的生(sheng)命(ming)，追(zhui)求(qiu)企業競爭(zheng)力的(de)不(bu)斷(duan)提(ti)升(sheng)。公(gong)司(si)在經營(ying)中(zhong)始終(zhong)秉承(cheng)：遵(zun)紀守(shou)法，嚴(yan)於(yu)律(lv)己(ji)，寬仁(ren)以(yi)待，敢(gan)於承(cheng)擔的(de)企業精神(shen)作(zuo)為(wei)標準(zhun)，以(yi)過硬(ying)的質量(liang)和優良(liang)的(de)服務來(lai)維(wei)護和拓(tuo)展(zhan)市(shi)場(chang)，較大限度的滿(man)足客戶的(de)需求(qiu)。與客戶的(de)共(gong)贏，是我們(men)的(de)發展目標(biao)。本生(sheng)!您信(xin)任的(de)合作(zuo)夥伴(ban)。我們(men)願(yuan)與您真(zhen)誠(cheng)合作(zuo)，共(gong)創(chuang)美(mei)好(hao)的未(wei)來(lai)。