elisa試劑盒加(jia)入終止液(ye)後(hou)沒有(you)立(li)即(ji)測(ce)定(ding)影響大嗎?

　　在ELISA實驗(yan)中，加(jia)入終止液(ye)後(hou)未立(li)即(ji)測(ce)定(ding)可能(neng)會(hui)對(dui)結果產生(sheng)壹(yi)定(ding)影響，具體(ti)取(qu)決(jue)於(yu)以(yi)下(xia)幾(ji)個(ge)因素(su)：

　　1. 終止液(ye)的(de)作用

　　終止液(ye))的(de)作用是(shi)終止酶(mei)(如(ru)HRP)與底(di)物(如(ru)TMB)的反(fan)應(ying)，使顯(xian)色反應停止。壹(yi)旦終止液(ye)加(jia)入，顏(yan)色會(hui)迅速(su)穩(wen)定(ding)(如(ru)TMB從(cong)藍(lan)色變為黃色)。

　　2. 延遲測(ce)定(ding)的潛(qian)在影響

　　顏色穩(wen)定(ding)性：大多(duo)數(shu)ELISA試劑盒(如(ru)TMB底物體(ti)系)在(zai)終止後(hou)顏(yan)色可穩(wen)定(ding)數(shu)小時(通常2-4小時，具(ju)體(ti)參考(kao)說(shuo)明書)。但(dan)長時(shi)間(jian)放(fang)置(zhi)(如(ru)超過24小時)可能(neng)導致吸(xi)光(guang)度(du)(OD值)略(lve)微下(xia)降(jiang)或(huo)背(bei)景升(sheng)高。

　　環(huan)境因素(su)：如(ru)果板子暴(bao)露(lu)在強(qiang)光(guang)或(huo)高溫下(xia)，可能(neng)加(jia)速(su)顏(yan)色變化，導致結(jie)果偏(pian)差(cha)。

　　特(te)殊(shu)底(di)物：某(mou)些底(di)物(如(ru)OPD)在終止後(hou)穩(wen)定(ding)性較差(cha)，需(xu)盡快檢(jian)測(ce)。

　　3. 建(jian)議操作

　　立(li)即(ji)測(ce)定(ding)最(zui)佳(jia)：大多(duo)數(shu)說明書建(jian)議終止後(hou)10-30分(fen)鐘(zhong)內完(wan)成(cheng)讀數(shu)，以確(que)保準(zhun)確(que)性。

　　短期(qi)延遲(1-2小時)：若無(wu)法立(li)即(ji)檢測(ce)，可將反(fan)應(ying)板(ban)避光(guang)保(bao)存於(yu)室(shi)溫(避免(mian)低(di)溫導致沈(chen)澱(dian))，通常影(ying)響較小。

　　長期(qi)延遲：如(ru)需(xu)長時間(jian)保存(cun)，建(jian)議先讀(du)取(qu)數(shu)據後再存(cun)檔樣本(ben)，避(bi)免(mian)依(yi)賴延遲測(ce)定(ding)。

　　4. 驗(yan)證方(fang)法

　　如(ru)果不(bu)確(que)定(ding)影響程(cheng)度(du)，可進(jin)行(xing)對(dui)比實驗(yan)：

　　立(li)即(ji)測(ce)定(ding)壹(yi)組孔，延遲測(ce)定(ding)另壹(yi)組(如(ru)1小時、2小時後(hou))，觀(guan)察OD值變(bian)化趨(qu)勢。

　　結(jie)論：短時間(jian)延遲(如(ru)1小時內)通常影(ying)響不(bu)大，但(dan)應(ying)盡量(liang)按(an)說(shuo)明書要(yao)求操(cao)作，避免(mian)人(ren)為誤差(cha)。若延遲較(jiao)久，需(xu)評估試劑盒的(de)穩(wen)定(ding)性或(huo)優化實驗(yan)流程(cheng)。

　　註：以上(shang)資料僅供(gong)參考(kao)，如(ru)需(xu)具體(ti)品牌試劑盒的(de)完(wan)整說明，可咨詢(xun)技術老(lao)師(shi)或(huo)品牌供(gong)應商(shang)的(de)詳細文檔(dang)。

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