ELISA試劑盒(he)用(yong)直接(jie)法(fa)測定抗(kang)體(ti)時(shi)為(wei)什麽(me)要(yao)加(jia)酶(mei)標抗(kang)抗(kang)體(ti)呢(ne)

　　在(zai) 直接(jie)法(fa) ELISA 中檢測抗(kang)體(ti)時(shi)，加入(ru) 酶標(biao)抗(kang)抗(kang)體(ti)(酶(mei)標二(er)抗(kang)) 的主要原因(yin)是 信號(hao)放(fang)大 和(he) 提(ti)高檢測靈敏度(du)。以下(xia)是(shi)本生小編(bian)的詳(xiang)細解釋(shi)：

　　1. 直接(jie)法(fa) vs. 間(jian)接(jie)法(fa)

　　直接(jie)法(fa)：用 酶標(biao)壹(yi)抗(kang)(即抗(kang)體(ti)本身(shen)直接(jie)標(biao)記(ji)酶(mei))檢測抗(kang)原，步(bu)驟簡單(dan)，但(dan)信號(hao)較弱(ruo)。

　　間(jian)接(jie)法(fa)：用 壹抗(kang)(未(wei)標記(ji)) + 酶(mei)標(biao)二(er)抗(kang) 檢測抗(kang)原，信(xin)號(hao)更強(qiang)(因多個二(er)抗(kang)結(jie)合(he)壹(yi)個(ge)壹(yi)抗(kang))。

　　但(dan)問(wen)題(ti)來了：

　　如果(guo)檢測目(mu)標(biao)是 抗(kang)體(ti)本身(shen)(如血清(qing)中的抗(kang)體(ti))，直(zhi)接(jie)法(fa)理論上可以用 酶標抗(kang)原 或 酶(mei)標抗(kang)抗(kang)體(ti)。

　　而實際(ji)中更常(chang)用(yong) 酶(mei)標抗(kang)抗(kang)體(ti)(酶(mei)標二(er)抗(kang))，原因(yin)如下：

　　2. 為(wei)什麽(me)加(jia)酶(mei)標(biao)抗(kang)抗(kang)體(ti)?

　　(1) 信(xin)號(hao)放(fang)大作用(yong)

　　壹(yi)抗(kang)(待(dai)測(ce)抗(kang)體(ti)) 本身(shen)未(wei)標記(ji)，無(wu)法(fa)直接(jie)產生信號(hao)。

　　酶標(biao)抗(kang)抗(kang)體(ti)(抗(kang)物種(zhong)IgG的二(er)抗(kang)) 可(ke)結(jie)合(he)多個壹抗(kang)，每(mei)個(ge)二(er)抗(kang)攜帶酶分子，催(cui)化(hua)底(di)物顯色(se)，顯著(zhu)增強(qiang)信號(hao)。

　　(例(li)如：1個壹抗(kang)可(ke)結(jie)合(he)2-3個(ge)酶(mei)標(biao)二(er)抗(kang)，信(xin)號(hao)放(fang)大數(shu)倍)

　　(2) 通(tong)用性高

　　同(tong)壹(yi)物種(zhong)來源(yuan)的抗(kang)體(ti)(如人(ren)IgG)可用(yong) 同壹(yi)種(zhong)酶標(biao)抗(kang)抗(kang)體(ti)(如HRP標記(ji)的羊抗(kang)人(ren)IgG)，無需(xu)為(wei)每(mei)種(zhong)待測(ce)抗(kang)體(ti)單(dan)獨(du)標記(ji)酶(mei)，降低成本。

　　(3) 避免(mian)抗(kang)體(ti)失活(huo)

　　直接(jie)標(biao)記(ji)壹(yi)抗(kang)(如酶標壹抗(kang))可(ke)能導致(zhi)抗(kang)體(ti)活(huo)性下降，而使用(yong)酶標二(er)抗(kang)可(ke)保(bao)留壹抗(kang)天然結(jie)合(he)能力(li)。

　　(4) 靈(ling)活(huo)性

　　若檢測不同物種(zhong)抗(kang)體(ti)(如小鼠、兔IgG)，只需(xu)更換對(dui)應(ying)的酶標抗(kang)抗(kang)體(ti)，無(wu)需(xu)重新(xin)優化(hua)實(shi)驗(yan)體系。

　　3. 實驗(yan)設計示(shi)例(li)(檢測血清(qing)抗(kang)體(ti))

　　包(bao)被(bei)抗(kang)原 → 2. 加(jia)待測血清(qing)(含壹抗(kang)) → 3. 加(jia)酶(mei)標抗(kang)抗(kang)體(ti) → 4. 顯(xian)色(se)檢測

　　(關鍵：酶標(biao)抗(kang)抗(kang)體(ti)與(yu)壹抗(kang)的物種(zhong)匹配(pei)，如人(ren)血清(qing)用 酶標抗(kang)人(ren)IgG)

　　4. 對(dui)比(bi)其他(ta)方(fang)法(fa)

　　方(fang)法(fa)標記(ji)方(fang)式(shi)優點(dian)缺(que)點(dian)

　　直(zhi)接(jie)法(fa)酶標壹(yi)抗(kang)步(bu)驟少(shao)，非特異(yi)性低信號(hao)弱(ruo)，需(xu)高濃度(du)抗(kang)體(ti)

　　間(jian)接(jie)法(fa)壹抗(kang) + 酶(mei)標(biao)二(er)抗(kang)信(xin)號(hao)強(qiang)，通(tong)用性好(hao)可能增加背(bei)景噪(zao)音(yin)

　　5. 總(zong)結(jie)

　　在(zai) 直接(jie)法(fa)測定抗(kang)體(ti) 時(shi)，加 酶(mei)標抗(kang)抗(kang)體(ti) 的核心(xin)目(mu)的是：

　　放(fang)大信(xin)號(hao)(提(ti)高靈敏度(du))

　　保留壹抗(kang)活(huo)性

　　節省成本(通(tong)用二(er)抗(kang)適(shi)配(pei)多種(zhong)壹抗(kang))

　　若跳(tiao)過(guo)酶標(biao)二(er)抗(kang)，直(zhi)接(jie)標(biao)記(ji)壹(yi)抗(kang)，可(ke)能導致(zhi)檢測限低(尤其低濃度(du)抗(kang)體(ti)樣(yang)本)。因此，間(jian)接(jie)法(fa)(酶標二(er)抗(kang)) 仍(reng)是(shi)抗(kang)體(ti)檢測的主流(liu)選擇(ze)。

　　註：以(yi)上資料僅供(gong)參考，具體請(qing)咨(zi)詢(xun)技(ji)術(shu)老(lao)師或品牌供(gong)應(ying)商。

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