ELISA實(shi)驗中(zhong)標曲和樣本(ben)的(de)顯色(se)問(wen)題(ti)

　　以(yi)下(xia)是天津(jin)本(ben)生ELISA實(shi)驗中(zhong)關於(yu) ‌標曲和樣本(ben)顯色(se)問(wen)題(ti)‌ 的(de)常見(jian)原因及(ji)解決(jue)方(fang)案，綜合(he)多篇文獻分析(xi)整(zheng)理：

　　壹(yi)、標曲不(bu)顯色(se)或(huo)顯色(se)弱(ruo)，樣本(ben)正常

　　標準(zhun)品(pin)溶解不(bu)充分‌

　　溶(rong)解時未渦旋(xuan)震(zhen)蕩(dang)，導(dao)致(zhi)標準(zhun)品(pin)未溶解或稀釋(shi)不(bu)均。

　　解決(jue)‌：使(shi)用(yong)渦旋(xuan)震(zhen)蕩(dang)器(qi)充分混勻標(biao)準(zhun)品(pin)及(ji)稀(xi)釋液(ye)。

　　孵(fu)育(yu)條件不(bu)當‌

　　靜置孵育(yu)導(dao)致(zhi)抗(kang)原抗(kang)體接觸(chu)不(bu)充分，建(jian)議(yi)使(shi)用(yong)微(wei)孔板(ban)振(zhen)蕩(dang)器(qi)(37℃)。

　　試劑漏(lou)加(jia)或(huo)失效‌

　　可能漏加(jia)檢測(ce)抗(kang)體、酶標(biao)試劑，或(huo)試劑因(yin)反復凍(dong)融失(shi)活(huo)。

　　解決(jue)‌：分裝(zhuang)保存(cun)試劑，操(cao)作(zuo)時(shi)標(biao)記(ji)步(bu)驟(zhou)避(bi)免(mian)遺(yi)漏(lou)。

　　二、標(biao)曲和樣本(ben)均不(bu)顯色(se)

　　系(xi)統性(xing)問題‌

　　酶(mei)標(biao)試劑(如(ru)HRP)失活(huo)、底物(wu)(TMB)汙染(ran)或(huo)過(guo)期。

　　解決(jue)‌：更(geng)換新(xin)鮮(xian)底物(wu)，檢查試劑保(bao)存(cun)條(tiao)件(避光(guang)、防(fang)潮)。

　　操(cao)作(zuo)失(shi)誤(wu)‌

　　未(wei)按說明(ming)書(shu)步(bu)驟(zhou)操(cao)作(zuo)(如(ru)漏加(jia)關(guan)鍵(jian)組(zu)分)。

　　解決(jue)‌：嚴(yan)格(ge)遵(zun)循操(cao)作(zuo)流程，新手(shou)建(jian)議使用帶(dai)染(ran)料(liao)的(de)試劑盒(he)輔助驗證(zheng)。

　　三(san)、標(biao)曲顯色(se)正(zheng)常，樣本(ben)不(bu)顯色(se)

　　樣本(ben)濃度(du)過(guo)低‌

　　目(mu)標蛋(dan)白(bai)濃(nong)度(du)低於檢測(ce)限(xian)，或樣本(ben)類(lei)型(xing)(如(ru)血漿(jiang)、細胞(bao)上清)不(bu)匹(pi)配。

　　解決(jue)‌：嘗(chang)試高敏(min)ELISA試劑盒(he)或濃(nong)縮(suo)樣本(ben)。

　　樣本(ben)幹擾物(wu)質(zhi)‌

　　溶(rong)血(xue)、細菌汙染(ran)、類(lei)風(feng)濕(shi)因(yin)子(zi)等導(dao)致(zhi)假(jia)陰性(xing)。

　　解決(jue)‌：離心(xin)去除雜質(zhi)，添(tian)加(jia)蛋(dan)白酶抑制劑或(huo)稀(xi)釋(shi)樣本(ben)。

　　四、顯色(se)過(guo)強(qiang)或無梯(ti)度(du)

　　洗(xi)滌(di)不(bu)凈

　　殘留HRP酶催化(hua)底(di)物過度(du)顯色(se)，尤(you)其是TMB前(qian)最(zui)後壹(yi)次(ci)洗(xi)滌(di)。

　　解決(jue)‌：確保(bao)洗(xi)液(ye)註(zhu)滿孔(kong)，拍幹(gan)液(ye)體，手(shou)動(dong)洗(xi)板(ban)時(shi)更換吸(xi)水紙(zhi)。

　　底物孵育時間過(guo)長(chang)‌

　　TMB顯色(se)超(chao)過(guo)15分鐘(zhong)可能導(dao)致(zhi)OD值飽(bao)和。

　　解決(jue)‌：顯色(se)10-15分鐘(zhong)後及(ji)時(shi)終止(最(zui)高(gao)濃度(du)孔(kong)出(chu)現(xian)深藍色(se)即可)。

　　五(wu)、其他(ta)註(zhu)意事(shi)項(xiang)

　　移液(ye)精度(du)‌：定(ding)期校準(zhun)移液(ye)器(qi)，避(bi)免(mian)加(jia)樣誤(wu)差。

　　環(huan)境控(kong)制‌：避(bi)免(mian)底(di)物(wu)(TMB)提前(qian)氧(yang)化(hua)(如(ru)避光(guang)保(bao)存)。

　　對(dui)照(zhao)設(she)置‌：陰陽(yang)性(xing)對照(zhao)可(ke)幫(bang)助區分系(xi)統誤(wu)差(cha)與樣本(ben)問題。

　　通過規範操(cao)作(zuo)和(he)針(zhen)對(dui)性(xing)排查，可(ke)顯著(zhu)改(gai)善顯色(se)異(yi)常問題。

　　註：以(yi)上資(zi)料(liao)僅(jin)供參(can)考(kao)，不(bu)作(zuo)為(wei)實(shi)驗依(yi)據，具(ju)體請咨(zi)詢技術(shu)老師(shi)或(huo)產品品牌供應商(shang)。

　　天津(jin)本(ben)生壹(yi)直視(shi)質(zhi)量(liang)控(kong)制為(wei)企業(ye)的(de)生(sheng)命(ming)，追求(qiu)企業(ye)競(jing)爭力(li)的(de)不(bu)斷提升。公(gong)司(si)在(zai)經(jing)營中(zhong)始(shi)終秉承(cheng)：遵(zun)紀守(shou)法，嚴(yan)於律己(ji)，寬(kuan)仁(ren)以(yi)待(dai)，敢於(yu)承擔的(de)企業(ye)精神(shen)作(zuo)為(wei)標(biao)準(zhun)，以(yi)過(guo)硬的(de)質(zhi)量(liang)和(he)優良(liang)的(de)服(fu)務來(lai)維護和(he)拓(tuo)展市(shi)場，較大(da)限(xian)度(du)的(de)滿足(zu)客戶的(de)需(xu)求。與客戶的(de)共贏，是我們的(de)發(fa)展目(mu)標。本(ben)生(sheng)!您(nin)信任的(de)合(he)作(zuo)夥伴(ban)。我們(men)願(yuan)與您(nin)真(zhen)誠合(he)作(zuo)，共創美(mei)好的(de)未(wei)來(lai)。