幹(gan)貨分享—細胞(bao)培(pei)養常(chang)見(jian)問(wen)題、可(ke)能(neng)原(yuan)因(yin)及解(jie)決方法

　　問(wen)題1：培(pei)養液pH 值變(bian)化(hua)太快

　　可(ke)能(neng)原(yuan)因(yin)：

　　(1)CO2 張力不(bu)對(dui)

　　(2)培(pei)養瓶(ping)蓋擰得(de)太緊(jin)

　　(3)NaHCO3緩沖系統緩(huan)沖力不(bu)足

　　(4)培(pei)養液中鹽(yan)濃(nong)度不正確

　　(5)細菌、酵母(mu)或(huo)真菌汙(wu)染

　　建議(yi)解(jie)決方法：

　　(1)按(an)培(pei)養液中NaHCO3濃(nong)度(du)增(zeng)加(jia)或(huo)減(jian)少培(pei)養箱內(nei)CO2 濃(nong)度(du)，2.0g/L 到(dao)3.7g/L 濃(nong)度NaHCO3對(dui)應CO2濃(nong)度(du)為(wei)5% 到10%。

　　(2)松(song)開(kai)瓶(ping)蓋1/4 圈。

　　(3)改用(yong)不(bu)依(yi)賴(lai)CO2 培(pei)養液。加HEPES 緩(huan)沖液至10 到(dao)25mM 終(zhong)濃度(du)。

　　(4)在CO2 培(pei)養環(huan)境中(zhong)改用(yong)基於Earle′s 鹽(yan)配(pei)制的培(pei)養液，在大氣培(pei)養環(huan)境中(zhong)培(pei)養改用(yong)Hanks 鹽(yan)配(pei)制的培(pei)養液。

　　(5)丟棄培(pei)養物，或(huo)用(yong)抗生素除(chu)菌。

　　問(wen)題2：培(pei)養液出(chu)現(xian)沈(chen)澱(dian)，但pH值(zhi)不變(bian)

　　可(ke)能(neng)原(yuan)因(yin)：

　　(1)洗滌劑(ji)清(qing)洗後(hou)殘留(liu)有磷(lin)酸(suan)鹽(yan)，將(jiang)培(pei)養基成分沈(chen)澱(dian)下(xia)來(lai)

　　(2)冰凍保(bao)存(cun)培(pei)養液

　　建議(yi)解(jie)決方法：

　　(1)用(yong)去(qu)離子水反復沖洗玻璃(li)器(qi)皿(min)，然(ran)後(hou)滅(mie)菌。

　　(2)將(jiang)培(pei)養液加熱(re)到37℃，搖動使(shi)其(qi)溶(rong)解(jie)如(ru)沈(chen)澱(dian)仍(reng)然(ran)存(cun)在，丟棄培(pei)養液。

　　問(wen)題3：培(pei)養液出(chu)現(xian)沈(chen)澱(dian)， 同時(shi)pH 發生變(bian)化(hua)

　　可(ke)能(neng)原(yuan)因(yin)：

　　細菌或(huo)真菌汙(wu)染

　　建議(yi)解(jie)決方法

　　丟棄培(pei)養物，或(huo)用(yong)抗生素除(chu)菌。

　　問(wen)題4：培(pei)養細胞(bao)不貼(tie)壁

　　可(ke)能(neng)原(yuan)因(yin)：

　　(1)胰蛋(dan)白酶(mei)消化(hua)過(guo)度

　　(2)支(zhi)原(yuan)體(ti)汙染

　　(3)培(pei)養瓶(ping)瓶(ping)底不(bu)幹(gan)凈

　　(4)培(pei)養液pH值過(guo)堿(NaHCO3分解(jie))

　　(5)消化(hua)液(ye)或(huo)培(pei)養液配制錯誤、過(guo)期儲(chu)存(cun)、儲(chu)存(cun)不(bu)當(dang)

　　(6)細胞(bao)老化(hua)(如(ru)傳代前細胞(bao)已匯(hui)合(he)導致(zhi)失去(qu)貼(tie)附(fu)性(xing))

　　(7)接(jie)種細胞(bao)起始濃度太低(di)或(huo)太高

　　建議(yi)解(jie)決方法：

　　(1)縮(suo)短胰蛋(dan)白酶(mei)消化(hua)時(shi)間(jian)或(huo)降(jiang)低(di)胰(yi)蛋白酶(mei)濃度(du)。

　　(2)分離培(pei)養物，檢測(ce)支(zhi)原(yuan)體(ti)。清(qing)潔支(zhi)架(jia)和(he)培(pei)養箱。如(ru)發現支(zhi)原(yuan)體(ti)汙染，丟棄培(pei)養物。

　　(3)註意(yi)刷(shua)洗(xi)，或(huo)換用(yong)壹次(ci)性(xing)塑(su)料(liao)培(pei)養瓶(ping)

　　(4)使用(yong)無(wu)菌醋(cu)酸(suan)溶(rong)液(ye)調(tiao)整pH值或(huo)充入(ru)無菌CO2(將(jiang)培(pei)養液敞(chang)口(kou)放(fang)入(ru)培(pei)養箱也可(ke))

　　(5)重(zhong)新配(pei)置(zhi)消化(hua)液或(huo)培(pei)養液

　　(6)啟用(yong)新的保(bao)種細胞(bao)

　　(7)調(tiao)節最佳(jia)接(jie)種細胞(bao)濃度(du)

　　問(wen)題5：懸(xuan)浮(fu)細胞(bao)成簇(cu)

　　可(ke)能(neng)原(yuan)因(yin)：

　　(1)培(pei)養液中含(han)鈣、鎂(mei)離子

　　(2)支(zhi)原(yuan)體(ti)汙染

　　(3)蛋(dan)白酶(mei)過(guo)度消(xiao)化使(shi)得(de)細胞(bao)裂(lie)解(jie)釋(shi)

　　(4)DNA汙染(ran)

　　建議(yi)解(jie)決方法：

　　(1)用(yong)無(wu)鈣(gai)鎂(mei)平衡(heng)鹽(yan)溶(rong)液洗滌細胞(bao)，輕輕(qing)吹(chui)吸細胞(bao)獲得(de)單細胞(bao)懸液(ye)。

　　(2)分離培(pei)養物，檢測(ce)支(zhi)原(yuan)體(ti)。如(ru)發現支(zhi)原(yuan)體(ti)汙染，丟棄培(pei)養物。

　　(3)用(yong)DNase I 處(chu)理(li)細胞(bao)。

　　問(wen)題6：原(yuan)代細胞(bao)培(pei)養物汙染(ran)

　　可(ke)能(neng)原(yuan)因(yin)：

　　原代培(pei)養組織在進入培(pei)養前已汙(wu)染(ran)

　　建議(yi)解(jie)決方法：

　　培(pei)養前用(yong)含(han)高濃(nong)度(du)抗生素的平衡(heng)鹽(yan)溶(rong)液反復沖洗組織。

　　問(wen)題7：培(pei)養細胞(bao)生長減(jian)慢

　　可(ke)能(neng)原(yuan)因(yin)：

　　(1)由(you)於更(geng)換不(bu)同培(pei)養液或(huo)血(xue)清(qing)

　　(2)培(pei)養液中壹些細胞(bao)生長必需成分如(ru)谷(gu)氨酰(xian)胺或(huo)生長因(yin)子耗(hao)盡(jin)或(huo)缺(que)乏(fa)或(huo)已被(bei)破(po)壞(huai)。

　　(3)培(pei)養物中有(you)少量細菌或(huo)真菌汙(wu)染

　　(4)試(shi)劑保(bao)存(cun)不(bu)當(dang)

　　(5)接種細胞(bao)起始濃度太低(di)

　　(6)細胞(bao)已老(lao)化(hua)

　　(7)支(zhi)原(yuan)體(ti)汙染

　　建議(yi)解(jie)決方法：

　　(1)比(bi)較新培(pei)養液與原培(pei)養液成分，比(bi)較新血(xue)清(qing)與舊血(xue)清(qing)支(zhi)持細胞(bao)生長實(shi)驗(yan)。讓細胞(bao)逐漸(jian)適(shi)應(ying)新培(pei)養液。

　　(2)換入(ru)新鮮配制培(pei)養液，或(huo)補(bu)加(jia)谷(gu)氨酰(xian)胺及生長因(yin)子。

　　(3)用(yong)無(wu)抗生素培(pei)養液培(pei)養，如(ru)發現汙(wu)染(ran)，丟棄培(pei)養物。或(huo)用(yong)抗生素除(chu)菌。

　　(4)血(xue)清(qing)需保(bao)存(cun)在-5℃ 到-20℃。培(pei)養液需在2-8℃避光保(bao)存(cun)。含(han)血(xue)清(qing)培(pei)養液在2-8℃保存(cun)，並(bing)在2 周內(nei)用(yong)完(wan)。

　　(5)增(zeng)加接種細胞(bao)起始濃度。

　　(6)換用(yong)新的保(bao)種細胞(bao)。

　　(7)分離培(pei)養物，檢測(ce)支(zhi)原(yuan)體(ti)。清(qing)潔支(zhi)架(jia)和(he)培(pei)養箱。如(ru)發現支(zhi)原(yuan)體(ti)汙染，丟棄培(pei)養物。

　　問(wen)題8：培(pei)養細胞(bao)死(si)亡

　　可(ke)能(neng)原(yuan)因(yin)：

　　(1)培(pei)養箱內(nei)無(wu)CO2

　　(2)培(pei)養箱內(nei)溫(wen)度(du)波(bo)動太大

　　(3)細胞(bao)凍存(cun)或(huo)復蘇(su)過(guo)程(cheng)中(zhong)損傷(shang)

　　(4)培(pei)養液滲透壓(ya)不正確

　　(5)培(pei)養液種有(you)毒代謝(xie)產(chan)物堆(dui)積(ji)

　　(6)更(geng)多原(yuan)因(yin)參考(kao)問(wen)題4和(he)問(wen)題7

　　建議(yi)解(jie)決方法：

　　(1)檢(jian)測培(pei)養箱內(nei)CO2

　　(2)檢(jian)查培(pei)養箱內(nei)溫(wen)度(du)

　　(3)取(qu)新的保(bao)存(cun)細胞(bao)種

　　(4)檢(jian)測培(pei)養液滲透壓(ya)。註意(yi)：大多(duo)數(shu)哺乳(ru)動(dong)物(wu)細胞(bao)能耐(nai)受滲透壓(ya)為260 – 350 mOsm/kg。加(jia)入額(e)外試劑如(ru)HEPES都有(you)可(ke)能(neng)影(ying)響培(pei)養液滲透壓(ya)。

　　(5)換入(ru)新鮮培(pei)養液

　　(6)更(geng)多解(jie)決方法參考(kao)問(wen)題4和(he)問(wen)題7

　　細胞(bao)培(pei)養板(ban)本(ben)生壹直視(shi)質量(liang)控(kong)制為企(qi)業(ye)的生命(ming)，追(zhui)求(qiu)企(qi)業(ye)競(jing)爭力的不(bu)斷(duan)提升(sheng)。公(gong)司(si)在經(jing)營(ying)中始終(zhong)秉承：遵紀守(shou)法(fa)，嚴(yan)於律己(ji)，寬(kuan)仁以待，敢(gan)於承擔(dan)的企(qi)業(ye)精(jing)神(shen)作為(wei)標(biao)準(zhun)，以(yi)過(guo)硬的質(zhi)量(liang)和優良(liang)的服(fu)務(wu)來(lai)維(wei)護和(he)拓展市(shi)場(chang)，較(jiao)大限度的滿(man)足客(ke)戶(hu)的需求(qiu)。與客戶(hu)的共(gong)贏(ying)，是我(wo)們(men)的發展目(mu)標(biao)。本(ben)生!您(nin)信任的合(he)作夥(huo)伴。我(wo)們(men)願(yuan)與您(nin)真誠合(he)作，共(gong)創美(mei)好(hao)的未來(lai)。