輔酶(mei)F420(F420)酶(mei)聯免(mian)疫分析(xi)試(shi)劑盒(he)使(shi)用(yong)說(shuo)明書(shu)

　　本試(shi)劑盒(he)僅供研究(jiu)使(shi)用(yong)。

　　檢測範(fan)圍：

　　96T

　　1.2 ng/L -50ng/L

　　使(shi)用(yong)目的：

　　本試(shi)劑盒(he)用(yong)於(yu)測定(ding)微生物(wu)樣(yang)本中(zhong)輔酶 F420(F420)含(han)量(liang)。

　　實(shi)驗原理

　　本試(shi)劑盒(he)應(ying)用(yong)雙(shuang)抗體夾(jia)心(xin)法(fa)測定(ding)標(biao)本中(zhong)輔酶 F420(F420)水(shui)平(ping)。用(yong)純化(hua)的輔酶(mei) F420(F420)抗體包(bao)被微孔板(ban)，制成固(gu)相抗(kang)體，往(wang)包(bao)被單抗(kang)的微孔中(zhong)依次加入(ru)輔(fu)酶 F420(F420)，再與(yu) HRP 標(biao)記的輔酶(mei) F420(F420)抗體結(jie)合，形(xing)成抗(kang)體-抗(kang)原-酶(mei)標(biao)抗體復(fu)合物(wu)，經(jing)過洗滌(di)後加底(di)物(wu) TMB 顯色(se)。TMB 在 HRP 酶(mei)的催化(hua)下轉化(hua)成藍(lan)色(se)，並在酸(suan)的作用(yong)下轉化(hua)成最(zui)終(zhong)的黃色(se)。顏(yan)色(se)的深淺(qian)和樣(yang)品(pin)中(zhong)的輔酶(mei) F420(F420)呈正相關(guan)。用(yong)酶標(biao)儀(yi)在 450nm 波長下測定(ding)吸(xi)光度(OD 值(zhi))，通(tong)過標(biao)準曲(qu)線計算(suan)樣(yang)品(pin)中(zhong)輔酶 F420(F420)濃(nong)度(du)。

　　試(shi)劑盒(he)組(zu)成(cheng)

　　標(biao)本要(yao)求(qiu)

　　1.標(biao)本采(cai)集後盡早進(jin)行提(ti)取(qu)，提取(qu)按相關(guan)文(wen)獻(xian)進(jin)行，提(ti)取(qu)後應盡(jin)快(kuai)進(jin)行實(shi)驗。若不(bu)能馬(ma)上(shang)進(jin)行試(shi)驗，可(ke)將(jiang)標(biao)本放(fang)於(yu)-20℃保(bao)存(cun)，但(dan)應避(bi)免(mian)反(fan)復(fu)凍融

　　2.不(bu)能檢測含(han) NaN3 的樣(yang)品(pin)，因 NaN3 抑制辣根(gen)過氧(yang)化(hua)物(wu)酶(mei)的(HRP)活性(xing)。

　　操作(zuo)步(bu)驟

　　1. 標(biao)準品的稀釋(shi)：本試(shi)劑盒(he)提(ti)供(gong)原倍(bei)標(biao)準品壹(yi)支(zhi)，用(yong)戶可(ke)按照(zhao)下(xia)列圖(tu)表(biao)在(zai)小試(shi)管(guan)中(zhong)進(jin)行稀釋(shi)。

　　2. 加(jia)樣(yang)：分別(bie)設(she)空白孔(空白對照(zhao)孔(kong)不(bu)加樣(yang)品(pin)及(ji)酶標(biao)試(shi)劑，其(qi)余(yu)各步(bu)操作(zuo)相同)、標(biao)準孔、待(dai)測樣(yang)品(pin)孔。在酶標(biao)包(bao)被板上(shang)標(biao)準品準(zhun)確加樣(yang) 50μl，待(dai)測樣(yang)品(pin)孔中(zhong)先加樣(yang)品(pin)稀釋(shi)液(ye) 40μl，然(ran)後再加(jia)待測樣(yang)品(pin) 10μl(樣(yang)品(pin)最終稀釋(shi)度(du)為 5 倍(bei))。加樣(yang)將(jiang)樣(yang)品(pin)加於(yu)酶(mei)標(biao)板孔底(di)部，盡量(liang)不(bu)觸及(ji)孔壁(bi)，輕輕晃動混勻(yun)。

　　3. 溫(wen)育(yu)：用(yong)封板(ban)膜封(feng)板(ban)後置 37℃溫(wen)育(yu) 30 分鐘。

　　4. 配(pei)液(ye)：將(jiang) 30 倍(bei)濃縮(suo)洗(xi)滌(di)液(ye)用(yong)蒸(zheng)餾(liu)水(shui) 30 倍(bei)稀釋(shi)後備(bei)用(yong)

　　5. 洗滌(di)：小心(xin)揭掉(diao)封板(ban)膜，棄(qi)去液(ye)體，甩(shuai)幹，每(mei)孔加滿(man)洗(xi)滌(di)液(ye)，靜置 30 秒(miao)後棄(qi)去，如(ru)此重(zhong)復 5 次，拍幹(gan)。

　　6. 加(jia)酶：每孔(kong)加入(ru)酶(mei)標(biao)試(shi)劑 50μl，空白孔除外(wai)。

　　7. 溫(wen)育(yu)：操作(zuo)同 3。

　　8. 洗滌(di)：操作(zuo)同 5。

　　9. 顯色(se)：每孔(kong)先(xian)加(jia)入顯色(se)劑 A50μl，再(zai)加(jia)入(ru)顯色(se)劑 B50μl，輕輕震蕩(dang)混(hun)勻(yun)，37℃避(bi)光顯色(se)

　　10 分鐘.

　　10. 終止(zhi)：每孔(kong)加(jia)終(zhong)止(zhi)液(ye) 50μl，終(zhong)止反(fan)應(ying)(此時(shi)藍(lan)色(se)立轉黃色(se))。

　　11. 測定(ding)：以(yi)空白孔調(tiao)零，450nm 波(bo)長(chang)依(yi)序(xu)測量(liang)各孔的吸光度(OD 值(zhi))。 測定(ding)應(ying)在加(jia)終止(zhi) 液(ye)後 15 分鐘以(yi)內進(jin)行。

　　操作(zuo)程序(xu)總結：

　　計算(suan)

　　以(yi)標(biao)準物(wu)的濃度(du)為橫坐(zuo)標(biao)，OD 值為縱(zong)坐標(biao)，在坐標(biao)紙上繪出標(biao)準曲(qu)線，根(gen)據(ju)樣(yang)品(pin)的OD 值由(you)標(biao)準曲(qu)線查(zha)出相應(ying)的濃度(du);再乘以(yi)稀釋(shi)倍(bei)數;或用(yong)標(biao)準物(wu)的濃度(du)與(yu) OD 值計(ji)算(suan)出標(biao)準曲(qu)線的直(zhi)線回(hui)歸方程式(shi)，將(jiang)樣(yang)品(pin)的 OD 值代入方程式(shi)，計(ji)算(suan)出樣(yang)品(pin)濃度，再乘以(yi)稀釋(shi)倍(bei)數，即(ji)為樣(yang)品(pin)的實(shi)際(ji)濃度(du)。

　　註意事項

　　1.試(shi)劑盒(he)從(cong)冷(leng)藏環境中(zhong)取(qu)出應在(zai)室(shi)溫(wen)平(ping)衡 15-30 分鐘後方可(ke)使用(yong)，酶標(biao)包(bao)被板開(kai)封後如未(wei)用(yong)完，板(ban)條應裝入(ru)密(mi)封(feng)袋中(zhong)保(bao)存(cun)。

　　2.濃(nong)洗(xi)滌(di)液(ye)可(ke)能會有(you)結晶(jing)析(xi)出，稀釋(shi)時(shi)可在(zai)水(shui)浴(yu)中(zhong)加溫(wen)助溶(rong)，洗(xi)滌(di)時(shi)不(bu)影響結果(guo)。

　　3.各步(bu)加樣(yang)均(jun)應使用(yong)加樣(yang)器，並經(jing)常校對其(qi)準確性，以(yi)避(bi)免(mian)試(shi)驗誤(wu)差(cha)。壹(yi)次加樣(yang)時(shi)間最好控制在 5 分鐘內，如(ru)標(biao)本數(shu)量(liang)多，推薦使用(yong)排(pai)槍加樣(yang)。

　　4. 請(qing)每次測定(ding)的同時做標(biao)準曲(qu)線，最好做復孔。如標(biao)本中(zhong)待測物(wu)質含(han)量(liang)過高(樣(yang)本 OD 值(zhi)大(da)於(yu)標(biao)準品孔(kong)第(di)壹(yi)孔(kong)的 OD 值)，請(qing)先用(yong)樣(yang)品(pin)稀釋(shi)液(ye)稀釋(shi)壹(yi)定(ding)倍(bei)數(n 倍(bei))後再測定(ding)，計(ji)算(suan)時(shi)請(qing)最(zui)後乘以(yi)總稀釋(shi)倍(bei)數(×n×5)。

　　5. 封(feng)板(ban)膜(mo)只限(xian)壹(yi)次性使(shi)用(yong)，以(yi)避(bi)免(mian)交叉汙染(ran)。

　　6.底(di)物(wu)請(qing)避(bi)光保(bao)存(cun)。

　　7.嚴格按照說(shuo)明書(shu)的操作(zuo)進(jin)行，試(shi)驗結(jie)果(guo)判定必(bi)須以(yi)酶標(biao)儀(yi)讀數為準.

　　8.所有(you)樣(yang)品(pin)，洗滌(di)液(ye)和(he)各種廢棄(qi)物(wu)都(dou)應按(an)傳(chuan)染(ran)物(wu)處理。

　　9.本試(shi)劑不(bu)同批(pi)號組(zu)分不(bu)得混(hun)用(yong)。

　　保(bao)存(cun)條件(jian)及(ji)有(you)效(xiao)期(qi)

　　1.試(shi)劑盒(he)保(bao)存(cun)：;2-8℃。

　　2.有(you)效(xiao)期(qi)：6 個月

　　輔(fu)酶F420(F420)酶(mei)聯免(mian)疫分析(xi)試(shi)劑盒(he) 本生壹(yi)直(zhi)視質量(liang)控制為企業(ye)的生命(ming)，追(zhui)求(qiu)企(qi)業(ye)競爭力(li)的不(bu)斷提(ti)升(sheng)。公(gong)司在經(jing)營中(zhong)始(shi)終秉承(cheng)：遵(zun)紀守(shou)法(fa)，嚴於(yu)律己(ji)，寬(kuan)仁(ren)以(yi)待，敢(gan)於(yu)承(cheng)擔的企業(ye)精(jing)神作為標(biao)準，以(yi)過硬的質量(liang)和(he)優(you)良的服(fu)務(wu)來(lai)維(wei)護和拓展(zhan)市(shi)場(chang)，較(jiao)大(da)限(xian)度的滿足客(ke)戶(hu)的需求(qiu)。與(yu)客戶(hu)的共贏，是我(wo)們(men)的發(fa)展(zhan)目(mu)標(biao)。本生!您信(xin)任(ren)的合作(zuo)夥(huo)伴。我(wo)們(men)願(yuan)與(yu)您真(zhen)誠(cheng)合作(zuo)，共(gong)創美(mei)好的未來(lai)。