BUNSEN本(ben)生分(fen)享(xiang)：熒光定(ding)量PCR耗(hao)材(cai)的(de)選擇(ze)

　　PCR是分(fen)子生物(wu)學研(yan)究的(de)基礎(chu)實(shi)驗(yan)，用(yong)於在(zai)短時(shi)間(jian)內(nei)將單(dan)拷貝(bei)的(de)目標(biao)DNA序列擴增(zeng)至數(shu)百(bai)萬(wan)拷貝。除(chu)了選擇(ze)可靠(kao)的(de)PCR儀外(wai)，用(yong)於PCR反(fan)應的(de)塑料(liao)耗(hao)材(cai)除考(kao)慮(lv)兼(jian)容(rong)性，還要求避免(mian)存(cun)在(zai)汙染物(wu)和(he)抑(yi)制(zhi)劑(ji)，同時又(you)具有可(ke)保(bao)障最佳(jia)PCR效果(guo)的(de)高質(zhi)量。因此，如(ru)何(he)選擇(ze)作(zuo)為用(yong)戶(hu)，了解如(ru)何(he)選擇(ze)PCR / qPCR耗(hao)材(cai)，顯得(de)尤其(qi)重(zhong)要。

　　第壹步(bu)，選(xuan)擇(ze)通量

　　根據(ju)樣(yang)品(pin)數量選擇(ze)通量，PCR耗(hao)材(cai)的(de)最常見規格為：

　　管(guan)：0.5 mL, 0.2 mL, 0.1 mL

　　96 孔(kong)板：0.2 mL, 0.1 mL

　　384 孔(kong)板：0.02 mL

　　單(dan)管(guan)

　　8聯(lian)管(guan)

　　96孔(kong)板

　　384孔(kong)板

　　第(di)二步(bu)， 選擇(ze)加樣(yang)體(ti)積：不同(tong)類(lei)型(xing)管(guan)，可(ke)供(gong)選擇(ze)的(de)容量體積不同(tong)。

　　單(dan)管(guan): 0.5 mL, 0.2 mL(標(biao)準(zhun)), 0.1 mL(低(di)容(rong)，或(huo)稱(cheng)快速)

　　8聯管(guan)： 0.2 mL(標(biao)準(zhun)), 0.1 mL(低(di)容(rong)，或(huo)稱(cheng)快速)

　　96 孔(kong)板：0.2 mL(標(biao)準(zhun)), 0.1 mL(低(di)容(rong)，或(huo)稱(cheng)快速)

　　384 孔(kong)板：0.02 mL

　　“(低(di)容(rong))"意(yi)味著高度(du)更(geng)低(di)。 低(di)容(rong)耗(hao)材(cai)更(geng)短(duan)的(de)設計(ji)程度(du)減(jian)少(shao)了反應(ying)體系上(shang)方的(de)空間(jian)，降低(di)了蒸發(fa)的(de)影響(xiang)並提高了熱傳導(dao)效(xiao)率(lv)，因此(ci)也被(bei)稱(cheng)為“快速"管(guan)或(huo)板(ban)。

　　第(di)三(san)步， 對(dui)於PCR板的(de)選擇(ze)，需要進(jin)壹步(bu)根(gen)據(ju)實(shi)驗(yan)類(lei)型(xing)和(he)儀(yi)器(qi)選(xuan)擇(ze)裙邊(bian)、切割(ge)角(jiao)、顏(yan)色(se)等。

　　3.1裙(qun)邊(bian)： 根(gen)據(ju)儀(yi)器加(jia)熱模(mo)塊(kuai)類(lei)型(xing)選(xuan)擇(ze)

　　無裙邊(bian):

　　兼(jian)容(rong)絕(jue)大多數(shu)PCR儀和(he)實(shi)時(shi)PCR儀的(de)模塊(kuai)，易於(yu)剪裁，但(dan)不適(shi)用(yong)於自動(dong)化應用(yong)。

　　半裙(qun)邊(bian)：

　　板(ban)的(de)邊(bian)緣周圍具有(you)短的(de)邊(bian)緣，加熱或(huo)移(yi)液(ye)過程中(zhong)提供(gong)足夠(gou)的(de)支撐(cheng)，不宜(yi)變(bian)形(xing)彎(wan)曲(qu)

　　全(quan)裙(qun)邊(bian)：

　　有(you)覆(fu)蓋板(ban)高度(du)的(de)邊(bian)緣，適(shi)用(yong)於自動(dong)化操作(zuo)

　　3.2顏(yan)色(se)： 透明(ming)或(huo)白(bai)色(se)

　　PCR板(ban)通(tong)常提供(gong)透明(ming)、磨(mo)砂或(huo)白(bai)色(se)不同(tong)的(de)顏(yan)色(se)形(xing)式(shi)，以(yi)適(shi)用(yong)於不同(tong)類(lei)型(xing)PCR反(fan)應(ying)。在(zai)實(shi)時(shi)PCR的(de)反應(ying)時，與(yu)透明(ming)耗(hao)材(cai)相比(bi)，我們(men)更(geng)推(tui)薦使用(yong)白(bai)色(se)塑(su)料(liao)耗(hao)材(cai)，以(yi)實(shi)現(xian)靈敏和(he)準(zhun)確的(de)熒光檢測(ce)。

　　白(bai)色(se)耗(hao)材(cai)通過阻止熒光折(zhe)射出(chu)管(guan)來(lai)提高qPCR數據(ju)的(de)靈敏(min)度(du)和(he)壹致(zhi)性。折射(she)被(bei)最小(xiao)化時，更(geng)多的(de)信號(hao)被(bei)反射回檢測(ce)器(qi)，從而(er)增(zeng)加信(xin)噪(zao)比(bi)(圖B)。此外，白(bai)色(se)管(guan)壁可阻止(zhi)熒光信(xin)號(hao)傳遞(di)至PCR儀(yi)模(mo)塊(kuai)，避免(mian)被吸收(shou)或(huo)不壹致(zhi)地反射熒光信(xin)號(hao)，從(cong)而(er)使重復實(shi)驗(yan)中的(de)差異(yi)降至低(di)。在(zai)極少(shao)數情(qing)況(kuang)下，如(ru)果(guo)熒光探(tan)測(ce)器(qi)由(you)於(yu)白(bai)色(se)孔(kong)的(de)信號(hao)反(fan)射增(zeng)強(qiang)而(er)過飽和(he)，可(ke)以(yi)使用(yong)磨砂孔(kong)替代(dai)。

　　3.4 切角(jiao)

　　切角(jiao)是對(dui)PCR板的(de)壹個角(jiao)缺(que)失(shi)，取(qu)決於(yu)所(suo)需要適(shi)配(pei)的(de)儀器(qi)。切角(jiao)可(ke)能(neng)位於96孔(kong)板的(de)H1，H12或(huo)A12位置(zhi)，或(huo)384孔(kong)板的(de)A24位置(zhi)

　　3.5品(pin)牌(pai)選(xuan)擇(ze)

　　市場(chang)上(shang)有許多品(pin)牌(pai)和(he)廠(chang)家(jia)提供(gong)PCR耗(hao)材(cai)，選擇(ze)時需要考(kao)慮(lv)哪(na)些(xie)因(yin)素呢? PCR耗(hao)材(cai)品(pin)質(zhi)由(you)包(bao)括原(yuan)料(liao)、無汙染、壹致(zhi)性等決定(ding)。

　　1. 原(yuan)料(liao)：Thermo Scientific選用(yong)優質(zhi)的(de)全(quan)新(xin)醫用(yong)級聚(ju)丙烯原(yuan)料(liao)

　　2. 生產環(huan)節(jie)：十萬(wan)級(ji)潔凈車間生產，無RNase、DNase和(he)外(wai)源(yuan)DNA汙染

　　3. 批間(jian)壹致(zhi)性：遵循(xun)嚴(yan)格的(de)生產標(biao)準(zhun)和(he)檢測(ce)標(biao)準(zhun)，由(you)資(zi)深(shen)專(zhuan)家(jia)使用(yong)的(de)設備進(jin)行生產，確(que)

　　保(bao)批間(jian)壹致(zhi)性和(he)可(ke)追(zhui)溯(su)性，確保(bao)用(yong)戶(hu)獲得(de)可靠(kao)PCR實(shi)驗(yan)數據(ju)。

　　第(di)四步(bu)，選擇(ze)正(zheng)確的(de)PCR膜(mo)

　　PCR板選(xuan)好後(hou)，還需要選擇(ze)壹張好的(de)PCR膜(mo)來(lai)密(mi)封，才能(neng)保(bao)證獲得(de)準(zhun)確可(ke)靠(kao)的(de)PCR數據(ju)，這(zhe)對(dui)實(shi)時(shi)PCR尤其(qi)重(zhong)要!

　　我們的(de)Thermo Scientific™ Absolute™ qPCR粘性封口膜(mo)(貨(huo)號(hao)AB1170)產(chan)品(pin)采(cai)用(yong)壓力(li)敏(min)感(gan)密(mi)封(feng)設計(ji)。只(zhi)有在(zai)施加(jia)壓(ya)力(li)的(de)情(qing)況(kuang)下，這(zhe)種非(fei)粘性粘合產品(pin)才可(ke)以(yi)粘合到(dao)孔(kong)的(de)邊(bian)緣上。其只在(zai)需要粘合的(de)位置(zhi)產(chan)生良好(hao)的(de)密封(feng)效果(guo)，使孔(kong)開口位置(zhi)變(bian)得(de)超(chao)透明(ming)，實(shi)現(xian)的(de)熒光信(xin)號(hao)傳輸(shu)。

　　強(qiang)效壓(ya)敏(min)粘附(fu)，可產(chan)生牢(lao)固(gu)的(de)粘合效果(guo)，以(yi)盡(jin)量減少蒸(zheng)發(fa)，使每個樣(yang)本保(bao)持較(jiao)高的(de)PCR效率(lv)

　　其光(guang)學透明(ming)度(du)可(ke)用(yong)於qPCR及(ji)其他(ta)熒光應(ying)用(yong)

　　壹致(zhi)的(de)封口厚度(du)和(he)透明(ming)度(du)，確(que)保(bao)整(zheng)塊(kuai)板信(xin)號(hao)傳輸(shu)相等

　　可(ke)剝(bo)離，剝(bo)離後(hou)平(ping)板上(shang)無粘性殘留

　　膜(mo)兩(liang)端(duan)無粘性，輕松(song)進(jin)行密封和(he)去除操(cao)作(zuo)

　　適(shi)用(yong)溫(wen)度(du)範(fan)圍：–80°C至110°C

　　PCR耗(hao)材(cai) 本生壹直(zhi)視(shi)質(zhi)量控制(zhi)為企(qi)業(ye)的(de)生命，追(zhui)求(qiu)企(qi)業(ye)競(jing)爭力(li)的(de)不斷(duan)提升。公(gong)司(si)在(zai)經(jing)營(ying)中(zhong)始(shi)終秉(bing)承：遵(zun)紀守(shou)法，嚴(yan)於律(lv)己，寬(kuan)仁(ren)以(yi)待(dai)，敢於承擔(dan)的(de)企(qi)業(ye)精(jing)神作(zuo)為標(biao)準(zhun)，以(yi)過硬的(de)質(zhi)量和(he)優(you)良(liang)的(de)服務(wu)來(lai)維護和(he)拓展(zhan)市(shi)場(chang)，較(jiao)大限(xian)度(du)的(de)滿足客戶(hu)的(de)需求(qiu)。與(yu)客戶(hu)的(de)共贏，是我(wo)們(men)的(de)發(fa)展目標(biao)。本(ben)生!您信(xin)任(ren)的(de)合作(zuo)夥(huo)伴。我們(men)願與(yu)您(nin)真(zhen)誠合作(zuo)，共創美(mei)好(hao)的(de)未(wei)來(lai)。