影響酶促(cu)反(fan)應(ying)的(de)因(yin)素:溫(wen)度、PH及抑制劑(ji)作(zuo)用

　　酶作(zuo)為生物催(cui)化(hua)劑與壹般(ban)催(cui)化(hua)劑壹(yi)樣呈(cheng)現(xian)溫(wen)度效應。酶促(cu)反(fan)應(ying)開始時，反(fan)應(ying)速(su)度隨(sui)溫(wen)度升(sheng)高增(zeng)快。達到(dao)最大反(fan)應(ying)速(su)度時的(de)溫(wen)度稱(cheng)為(wei)某(mou)種酶的(de)最適(shi)溫(wen)度。由(you)於絕(jue)大多數酶是(shi)又(you)活(huo)性的(de)蛋白(bai)質，當達(da)到(dao)最適溫(wen)度後，繼(ji)續(xu)升(sheng)高溫(wen)度，引起蛋白(bai)質變(bian)性(xing)，酶促(cu)反(fan)應(ying)速(su)度反(fan)而(er)逐步(bu)下降，以致(zhi)停(ting)止。

　　酶(mei)的(de)最適(shi)溫(wen)度不(bu)是(shi)壹個常數，與作(zuo)用時間長(chang)短有(you)關(guan)。測(ce)定(ding)酶活(huo)性均在(zai)酶促反(fan)應(ying)最(zui)適溫(wen)度下進(jin)行(xing)。大多數動物來(lai)源(yuan)的(de)酶最(zui)適溫(wen)度為37-40℃，植物(wu)來(lai)源(yuan)的(de)酶最(zui)適溫(wen)度為50-60℃。

　　酶的(de)催(cui)化(hua)活(huo)性與環(huan)境(jing)PH有(you)密(mi)切關(guan)系(xi)，通常各(ge)種(zhong)酶只(zhi)在(zai)壹(yi)定(ding)PH範圍內(nei)具(ju)有(you)活(huo)性，酶活(huo)性最高(gao)時的(de)PH，稱(cheng)為(wei)酶(mei)的(de)最適(shi)PH。高於(yu)或低(di)於(yu)此(ci)PH時酶的(de)活(huo)性逐漸(jian)降低。

　　酶(mei)的(de)最適(shi)PH不(bu)是(shi)壹個特征物(wu)理(li)常數，對於(yu)同壹(yi)個(ge)酶(mei)，其(qi)最(zui)適(shi)PH因(yin)緩沖液和底(di)物的(de)性質(zhi)不(bu)同(tong)而(er)又(you)差異(yi)。

　　在酶(mei)促反(fan)應(ying)過程(cheng)中(zhong)，抑制對(dui)酶(mei)的(de)抑制作(zuo)用可分為可(ke)逆抑制和不(bu)可(ke)逆抑制。可(ke)逆抑制有(you)根據(ju)抑制劑(ji)和底(di)物的(de)關(guan)系(xi)分為(wei)三(san)種(zhong)類型;競爭(zheng)性抑制，非(fei)競(jing)爭(zheng)性(xing)抑制和反(fan)競(jing)爭(zheng)性抑制。

　　實(shi)例(li)如(ru)下(xia)：

　　壹、試劑

　　5%三(san)氯醋酸溶液。1mmol/L苯(ben)甲脒;稱(cheng)取(qu)19.25g苯(ben)甲(jia)脒，用少(shao)量(liang)水(shui)溶(rong)解，定(ding)容至(zhi)100ml。

　　1%酪(lao)蛋白(bai)溶液(ye);取(qu)1g酪(lao)蛋白(bai)，加0.1mol/L氫(qing)氧(yang)化(hua)鈉溶(rong)液10ml、水(shui)40ml，置(zhi)60℃水(shui)浴(yu)加入至(zhi)溶(rong)解，放(fang)置(zhi)室溫(wen)後，加水(shui)稀(xi)釋(shi)成(cheng)100ml，並(bing)調至(zhi)PH8.0.

　　0.1mol/L硼(peng)酸緩沖液;

　　A液(ye)，0.1mol/L硼酸(H2BO3);稱(cheng)取(qu)6.18gH3BO3溶(rong)於(yu)1000mL水(shui)中(zhong)。

　　B液(ye)，0.025mol/L硼砂(Na2B4O7·10H2O);

　　稱(cheng)取(qu)9.54g硼(peng)砂(sha)(Na2B4O7·10H2O)溶(rong)液1000ml水(shui)中(zhong)。

　　PH7.4硼(peng)酸緩沖液;90ml A液(ye)+10ml B液

　　PH8.0硼(peng)酸緩沖液;70ml A液(ye)+30ml B液

　　PH9.0硼(peng)酸緩沖液;20ml A液(ye)+80ml B液、

　　材(cai)料(liao)

　　酪蛋(dan)白(bai)酶溶(rong)液(ye)：50-200ug/ml，用(yong)0.1mol/L,PH8.0硼酸緩沖液配(pei)制。可(ke)用(yong)粗(cu)提的(de)豬胰(yi)蛋(dan)白(bai)酶，用(yong)量(liang)根(gen)據(ju)實(shi)際測得(de)比活(huo)值而定(ding)。

　　儀器(qi)：

　　試管1.5cm x15cm(x19);移液管1ml(x7)，2mL(x3)，5mL(x5);量(liang)筒(tong)100mL(x1)，恒(heng)溫(wen)水(shui)浴(yu)(0℃);白(bai)瓷板;膠(jiao)頭滴(di)管(guan)。

　　操作(zuo)方(fang)法;

　　溫(wen)度對酶活(huo)力的(de)影響

　　取3只(zhi)試(shi)管，按下表(biao)操作(zuo);

　　空(kong)白(bai)管;現(xian)在(zai)試(shi)管中(zhong)加入1.0mL 1%酪蛋白(bai)溶液(ye)和3.0mL 5%三(san)率(lv)醋酸溶液，搖(yao)勻後，再加入0.2ml酶液，0.8mL蒸(zheng)餾(liu)水(shui)，在(zai)37℃保溫(wen)10min。

　　將樣品管(guan)和空(kong)白(bai)管分(fen)別(bie)離心，3000r/min，5分鐘，取上清(qing)液(ye)於280nm處(chu)測定(ding)各(ge)管(guan)的(de)吸光(guang)值(zhi)，並(bing)比較之。

　　Ph對酶(mei)活(huo)力的(de)影響

　　取3支(zhi)試(shi)管(guan)按下表(biao)操作(zuo);

　　空(kong)白(bai)管;現(xian)在(zai)試(shi)管中(zhong)加入1.0ml1%酪蛋白(bai)溶液(ye)和3.0ml5%三(san)氯(lv)醋酸溶液，搖(yao)勻後，在(zai)加入0.2ml酶液，0.8ml蒸(zheng)餾(liu)水(shui)，在(zai)37℃保溫(wen)10min。

　　將樣品管(guan)和空(kong)白(bai)管分(fen)別(bie)離心，3000r/min，5分鐘，取上清(qing)液(ye)於280nm處(chu)測定(ding)各(ge)管(guan)的(de)吸光(guang)值(zhi)，並(bing)比較值(zhi)。

　　抑制劑(ji)對(dui)酶(mei)活(huo)力的(de)影響

　　取3之試管(guan)，按下表(biao)操作(zuo);

　　空(kong)白(bai)管;現(xian)在(zai)試(shi)管中(zhong)加入1.0mL1%酪蛋白(bai)溶液(ye)和3.0mL5%三(san)氯(lv)酸溶液，搖(yao)勻後，再加入0.2mL酶液，0.8mL蒸(zheng)餾(liu)水(shui)，在(zai)37℃保溫(wen)10min。

　　將樣品管(guan)和空(kong)白(bai)管分(fen)別(bie)離心，3000r/min，5分鐘，取上清(qing)液(ye)於280nm處(chu)測定(ding)各(ge)管(guan)的(de)吸光(guang)值(zhi)，並(bing)比較之。

　　註意(yi)事(shi)項;

　　1、由(you)於胰(yi)蛋(dan)白(bai)酶活(huo)力不(bu)同(tong)，因(yin)此(ci)實驗(yan)應(ying)隨(sui)時檢查反(fan)應(ying)進(jin)行(xing)情況(kuang)。如(ru)反(fan)應(ying)進(jin)行(xing)的(de)太(tai)快，應適(shi)當稀(xi)釋(shi)酶液;則應減(jian)少酶(mei)溶(rong)液(ye)的(de)稀釋(shi)倍(bei)數。

　　2、註意(yi)不(bu)要(yao)在(zai)檢查反(fan)應(ying)程(cheng)度時使各(ge)管(guan)溶液(ye)混(hun)雜(za)。

　　試(shi)劑盒 本生(sheng)壹(yi)直視質量(liang)控(kong)制(zhi)為(wei)企業(ye)的(de)生命(ming)，追求(qiu)企業(ye)競爭(zheng)力的(de)不(bu)斷(duan)提升(sheng)。公(gong)司(si)在(zai)經(jing)營(ying)中(zhong)始(shi)終秉承(cheng)：遵紀(ji)守法(fa)，嚴於律(lv)己(ji)，寬仁(ren)以待(dai)，敢於(yu)承(cheng)擔的(de)企業(ye)精神(shen)作(zuo)為標準(zhun)，以過硬(ying)的(de)質量(liang)和優良(liang)的(de)服(fu)務(wu)來(lai)維護(hu)和拓展市場(chang)，較大限度的(de)滿(man)足客戶的(de)需求(qiu)。與客戶的(de)共贏(ying)，是(shi)我們(men)的(de)發展(zhan)目標。本生(sheng)!您(nin)信任的(de)合作(zuo)夥伴。我們(men)願與您真誠(cheng)合作(zuo)，共創美好的(de)未來(lai)。