實驗(yan)幹(gan)貨—ELISA實驗顯(xian)性(xing)淡、靈(ling)敏度低(di)是(shi)為什(shen)麽(me)?怎麽(me)解(jie)決?

　　Elisa 實(shi)驗(yan)以(yi)靈(ling)敏度較(jiao)高(gao)、特異(yi)性(xing)較(jiao)好的特點(dian)在臨(lin)床上(shang)得(de)到(dao)了(le)廣泛的(de)應(ying)用(yong)，但操(cao)作中(zhong)的各個(ge)環節對試驗的檢(jian)測效(xiao)果影(ying)響較(jiao)大，如(ru)不(bu)註意，有(you)可(ke)能導致(zhi)顯(xian)色不(bu)全(quan)、花板等結果(guo)。

　　酶(mei)聯免(mian)疫(yi)吸附(fu)實驗(yan)

　　壹(yi)、顯(xian)色淡，靈(ling)敏度偏低(di)

　　可(ke)能原因(yin)及(ji)解(jie)決方(fang)法(fa)：

　　試(shi)劑盒(he)從2~8℃冰(bing)箱(xiang)取(qu)出(chu)後(hou)打(da)開(kai)盒(he)蓋，於(yu)室(shi)溫平(ping)試劑盒(he)未充分(fen)平(ping)衡(heng)衡(heng)至少(shao)20分鐘(zhong)，確保(bao)所(suo)有(you)試劑已平(ping)衡(heng)至室(shi)溫(約(yue)25℃)樣品(pin)壹(yi)般選(xuan)擇培(pei)養上(shang)清(qing)、血(xue)清(qing)、血(xue)漿(jiang)。其(qi)他樣品(pin)

　　2、樣品(pin)不(bu)適(shi)合(he)做(zuo)ELISA檢(jian)測形式可(ke)能不(bu)適(shi)合(he)做(zuo)ELISA檢(jian)測或(huo)者需要(yao)優(you)化檢測的條件(例如(ru)稀釋(shi)液的成分(fen))

　　3、酶(mei)標板在貯(zhu)存或(huo)洗後(hou)拍幹時(shi)過分(fen)防止板過於(yu)幹燥，幹燥

　　4、包(bao)被抗體(ti)遭(zao)到破壞(huai) 操(cao)作溫和(he)，移(yi)液槍(qiang)不(bu)能碰(peng)到(dao)孔(kong)底(di)

　　5、樣本和抗體孵育(yu)條件不(bu)合(he)適(shi)，按(an)照說明(ming)書條(tiao)件(jian)，建議孵(fu)育(yu)過程(cheng)中全程(cheng)振蕩(dang)孵(fu)育(yu)

　　6、洗滌浸(jin)泡(pao)時(shi)間(jian)過長(chang)，按(an)照說明(ming)書操(cao)作，勿(wu)人(ren)為增加(jia)漫(man)泡(pao)時(shi)間(jian)

　　7、偶聯HRP試(shi)劑汙染棄(qi)去試(shi)劑，重新(xin)配(pei)置(zhi)

　　8、錯(cuo)誤(wu)的(de)稀釋(shi)偶聯HRP試(shi)劑棄(qi)去試(shi)劑，重新(xin)配(pei)置(zhi)確定合(he)適(shi)的(de)孵育(yu)時(shi)間(jian):人(ren)為判(pan)定(ding)-最(zui)高(gao)濃(nong)度(du)的(de)標準TMB底(di)物孵(fu)育(yu)時(shi)間(jian)過短(duan)，因非(fei)人(ren)。

　　9、品(pin)出(chu)現深(shen)藍色;S4-5有(you)淡藍色;機器(qi)判(pan)定(ding)620n為因素(su)影(ying)響(xiang)，需要(yao)優(you)化孵育(yu)時(shi)間(jian)m波長(chang)下(xia)測定OD值(zhi)達(da)到0.6-0.65

　　10、樣(yang)本濃(nong)度(du)過高(gao)或(huo)存在基(ji)質(zhi)效(xiao)應(ying)建議做(zuo)不(bu)同(tong)稀釋(shi)倍數(shu)，確認(ren)樣本最(zui)佳(jia)稀釋(shi)倍數(shu)酶(mei)標儀(yi)濾(lv)光(guang)片(pian)設(she)置(zhi)有(you)問題(ti)或(huo)者波(bo)

　　11、確(que)認(ren)儀(yi)器(qi)設(she)置(zhi)及(ji)選(xuan)擇正(zheng)確的(de)波長(chang)檢(jian)測長(chang)選(xuan)擇不(bu)對不(bu)能使用(yong)細(xi)胞培養板(ban)，建議使(shi)用(yong)ELISA專用(yong)高(gao)吸

　　12、酶(mei)標板不(bu)適(shi)合(he)做(zuo)ELISA附(fu)力(li)板子(zi)

　　二(er)、出(chu)現白板(ban)，陽(yang)性(xing)對照不(bu)顯(xian)色

　　可(ke)能原因(yin)及(ji)解(jie)決方(fang)法(fa)：

　　1、顯(xian)色液變(bian)質(zhi)更(geng)換(huan)新(xin)的(de)顯(xian)色液

　　2、洗滌液配制有(you)誤請(qing)按(an)說明(ming)書所(suo)示(shi)稀釋(shi)倍數(shu)配制

　　3、未加酶(mei)結合(he)物而(er)認(ren)為已加(jia)入註意不(bu)要(yao)漏加(jia)

　　4、終止液誤作洗(xi)滌液稀釋(shi)或(huo)當底(di)物液使用(yong)每(mei)次(ci)加液前均應(ying)看清(qing)標簽請(qing)按(an)照說明(ming)書所(suo)示(shi)配(pei)置(zhi)說(shuo)明(ming)書，註意

　　5、標準品(pin)稀釋(shi)方法(fa)錯(cuo)誤(wu)/或(huo)標準品(pin)有(you)問題(ti)單位(wei)和稀釋(shi)倍數(shu)，建議使(shi)用(yong)同(tong)批次(ci)試劑盒(he)，不(bu)能混用(yong)不(bu)

　　6、不(bu)同(tong)試劑盒(he)或(huo)不(bu)同(tong)批號(hao)的(de)試劑混用(yong)，同(tong)試劑盒(he)或(huo)不(bu)同(tong)批號(hao)的(de)試劑

　　三、不(bu)正(zheng)常的標準曲(qu)線

　　可(ke)能原因(yin)及(ji)解(jie)決方(fang)法(fa)：

　　1、錯(cuo)誤(wu)的(de)方(fang)法(fa)重(zhong)懸(xuan)標準品(pin)加入(ru)正(zheng)確(que)量(liang)的溶(rong)液重懸(xuan)標準品(pin)，重懸(xuan)充分(fen)

　　2、標準品(pin)稀釋(shi)錯(cuo)誤(wu)按(an)照說明(ming)書要(yao)求稀釋(shi)標準品(pin)

　　3、標準品(pin)汙染用(yong)壹(yi)次(ci)性(xing)的(de)滅菌吸頭(tou)，標準品(pin)貯存於2-8℃

　　4、錯(cuo)誤(wu)的(de)倍(bei)比稀釋(shi)步驟(zhou)按(an)照說明(ming)書倍(bei)比(bi)稀釋(shi)標準品(pin)TMB為底(di)物和(he)以(yi)OPD為底(di)物的(de)試(shi)劑盒(he)均有(you)使用(yong)，

　　5、波長(chang)選(xuan)擇錯(cuo)誤(wu)而(er)前者比(bi)色波(bo)長(chang)為450nm，後(hou)者為492nm。雙波(bo)長(chang)比(bi)色分(fen)析(xi)優(you)於單波(bo)長(chang)

　　6、標準品(pin)混用(yong)不(bu)同(tong)批號(hao)試(shi)劑勿(wu)混用(yong)

　　7、試劑盒(he)在運(yun)輸途(tu)中(zhong)時(shi)間(jian)太盡(jin)量(liang)縮(suo)短運(yun)輸時(shi)間(jian)，夏季(ji)應(ying)放冰(bing)塊降(jiang)溫長(chang)，溫度(du)太高(gao)，標準品(pin)失(shi)ELISA未終止而直接檢(jian)測4顯(xian)色需終止後(hou)檢(jian)測，否(fou)則(ze)會出(chu)現620nm比(bi)450nm讀

　　8、50nm和620nm數(shu)高(gao)的現象(xiang)。

　　四(si)、OD值(zhi)超出(chu)正常(chang)範圍

　　可(ke)能原因(yin)及(ji)解(jie)決方(fang)法(fa)：

　　1、錯(cuo)誤(wu)的(de)樣(yang)品(pin)或(huo)標準品(pin)的稀釋(shi)按(an)照說明(ming)書稀釋(shi)

　　2、偶聯抗(kang)體(ti)濃(nong)度(du)過高(gao)按(an)照說明(ming)書調整到最(zui)佳(jia)的(de)濃(nong)度(du)

　　3、TMB底(di)物孵(fu)育(yu)時(shi)間(jian)過長(chang)調整到合(he)適(shi)的(de)孵育(yu)時(shi)間(jian)

　　4、樣品(pin)或(huo)標準品(pin)汙染避免汙染

　　5、錯(cuo)誤(wu)的(de)孵(fu)育(yu)時(shi)間(jian)或(huo)溫度(du)按(an)照說明(ming)書

　　6、孵(fu)育(yu)時(shi)未加蓋導(dao)致(zhi)溶(rong)液揮發(fa)和(he)汙染 貼封(feng)片(pian)或(huo)加蓋

　　elisa試(shi)劑盒(he)本生壹(yi)直視質(zhi)量(liang)控(kong)制為企業的(de)生命(ming)，追求(qiu)企業競爭力(li)的不(bu)斷提(ti)升(sheng)。公(gong)司在經營(ying)中始(shi)終秉承：遵(zun)紀(ji)守法(fa)，嚴(yan)於(yu)律己，寬仁(ren)以(yi)待(dai)，敢(gan)於(yu)承(cheng)擔(dan)的企業精(jing)神作為標準，以(yi)過硬(ying)的質(zhi)量(liang)和優(you)良(liang)的(de)服務來維(wei)護和拓(tuo)展市(shi)場，較大(da)限度(du)的(de)滿足(zu)客戶的(de)需求。與(yu)客戶(hu)的(de)共贏，是(shi)我(wo)們(men)的(de)發(fa)展目(mu)標。本生!您(nin)信任的合(he)作夥(huo)伴。我(wo)們(men)願(yuan)與(yu)您(nin)真(zhen)誠合(he)作，共創(chuang)美(mei)好(hao)的(de)未來。