BUNSEN本生(sheng)：ELISA試(shi)劑(ji)操(cao)作常見(jian)問題及(ji)解(jie)決方(fang)案

　　壹、為什(shen)麽(me)所有(you)試(shi)劑(ji)和(he)檢(jian)測(ce)樣本要(yao)平(ping)衡(heng)至室(shi)溫(wen)後再(zai)進(jin)行(xing)加樣操(cao)作

　　溫(wen)度是ELISA結合(he)反應(ying)的重要(yao)影響因素。為了使所有(you)樣本在壹致的溫(wen)度下(xia)反應(ying)，實驗(yan)前務(wu)必(bi)將所有(you)試(shi)劑(ji)平(ping)衡(heng)至室(shi)溫(wen)，包括檢(jian)測(ce)樣本。避免因溫(wen)度的動力(li)學(xue)反應(ying)差異而導致ELISA試劑(ji)盒(he)檢(jian)測(ce)結(jie)果的不準(zhun)確。

　　二(er)、如何(he)獲得(de)良(liang)好線性的標(biao)準(zhun)曲線

　　按照推薦方式(shi)保(bao)存(cun)標(biao)準(zhun)品;溶解(jie)標(biao)準(zhun)品之(zhi)前(qian)需短暫離心，che底收(shou)集粉(fen)末;確(que)保(bao)標(biao)準(zhun)品wan全溶解(jie)和(he)混(hun)勻(yun)(大約10min)，然(ran)後再(zai)進(jin)行(xing)後續(xu)的系列稀(xi)釋步驟，確(que)保(bao)每壹步都(dou)充(chong)分混勻且移液;顯(xian)色(se)的恰當(dang)終止;選擇(ze)合(he)適(shi)的數學(xue)擬合(he)方(fang)程(cheng)繪(hui)制(zhi)標(biao)準(zhun)曲線。

　　三(san)、ELISA實驗(yan)為什(shen)麽(me)必(bi)須(xu)設(she)置(zhi)復(fu)孔(kong)

　　為獲得(de)準(zhun)確的實驗(yan)結果，強(qiang)烈建(jian)議標(biao)準(zhun)品及(ji)樣本進(jin)行(xing)復(fu)孔(kong)檢(jian)測(ce)。因(yin)為(wei)復(fu)孔(kong)檢(jian)測(ce)可以(yi)：計算平均值，確(que)保(bao)實驗(yan)結果準(zhun)確;解(jie)決實驗(yan)中(zhong)誤操(cao)作造(zao)成的跳孔(kong)現象(xiang);計(ji)算CV值，對(dui)實驗(yan)的操作和(he)試(shi)劑(ji)盒(he)的度進(jin)行(xing)評(ping)估。

　　四、為什(shen)麽(me)實驗(yan)過(guo)程(cheng)中(zhong)孵育(yu)、洗(xi)滌需要(yao)振(zhen)蕩，如(ru)何(he)振(zhen)蕩

　　振(zhen)蕩孵育(yu)使(shi)反應(ying)充(chong)分，振(zhen)蕩洗(xi)滌使背(bei)景(jing)幹(gan)凈。建議(yi)使(shi)用酶標(biao)專用(yong)96孔微孔板振(zhen)蕩器(qi)。孵育(yu)過(guo)程(cheng)振(zhen)蕩，可以(yi)加快(kuai)、加強(qiang)抗原抗(kang)體(ti)分子(zi)間(jian)的相互碰(peng)撞接觸(chu)，使(shi)得反應(ying)過(guo)程(cheng)加wan全(quan)，OD值通常會(hui)比未(wei)振(zhen)蕩孵育(yu)的結果要(yao)高(gao);洗(xi)滌過(guo)程(cheng)振(zhen)蕩，可以(yi)使洗(xi)板幹(gan)凈，在很大程(cheng)度上(shang)能降(jiang)低(di)背(bei)景(jing)值，同(tong)時可以(yi)提高試劑(ji)盒(he)檢(jian)測(ce)的靈敏(min)度。

　　五(wu)、何(he)時終止ELISA反應(ying)

　　ELISA實驗(yan)終需要(yao)酶催(cui)化底物(wu)顯色(se)反應(ying)來(lai)完成，在佳(jia)時間(jian)終止反應(ying)是ELISA試劑(ji)盒(he)實驗(yan)成功的重要(yao)因(yin)素。在HRP-TMB酶促(cu)反應(ying)系統(tong)中(zhong)，S5出現淡藍(lan)色，S1–S3有(you)明(ming)顯的階梯型藍色，便需要(yao)終止反應(ying)。

　　六、為什(shen)麽(me)酶標(biao)儀讀(du)數時必(bi)須(xu)選用雙(shuang)波(bo)長

　　首先(xian)，酶標(biao)儀使(shi)用前務(wu)必(bi)預(yu)熱(re)10-15min，使(shi)測(ce)讀(du)結(jie)果穩定(ding)。其(qi)次，ELISA實驗(yan)采用雙(shuang)波(bo)長測(ce)定(ding)吸(xi)光度，可以(yi)排除(chu)單(dan)波(bo)長檢(jian)測(ce)時的測(ce)定(ding)幹(gan)擾(標(biao)本的濃度(du)，幹(gan)擾色(se)等(deng))。壹般采(cai)用(yong)大波(bo)長作為(wei)參照(zhao)波(bo)長，在參照(zhao)波(bo)長下(xia)，檢(jian)測(ce)物(wu)的吸光(guang)值小，檢(jian)測(ce)波(bo)長和(he)參照(zhao)波(bo)長的吸光(guang)值之(zhi)差可以(yi)消(xiao)除(chu)非特(te)異性吸收;因此(ci)，雙(shuang)波(bo)長測(ce)定(ding)可大限(xian)度(du)的消(xiao)除(chu)指紋、雜(za)質及(ji)不(bu)透光(guang)的物質(zhi)對(dui)酶標(biao)儀讀(du)數帶來的誤差，以(yi)保(bao)證(zheng)實驗(yan)數據的準(zhun)確度。

　　ELISA試劑(ji)盒(he)本生(sheng)壹直視(shi)質(zhi)量(liang)控(kong)制(zhi)為企業的生(sheng)命(ming)，追(zhui)求(qiu)企業競爭力(li)的不斷提升(sheng)。公(gong)司在經(jing)營(ying)中(zhong)始(shi)終秉承(cheng)：遵紀守法(fa)，嚴(yan)於律(lv)己(ji)，寬(kuan)仁以(yi)待，敢(gan)於(yu)承(cheng)擔(dan)的企業精(jing)神作為(wei)標(biao)準(zhun)，以(yi)過(guo)硬(ying)的質量(liang)和(he)優(you)良(liang)的服務(wu)來(lai)維護和(he)拓(tuo)展(zhan)市(shi)場，較大限(xian)度(du)的滿(man)足客戶的需求(qiu)。與(yu)客戶的共贏(ying)，是我(wo)們(men)的發展(zhan)目(mu)標(biao)。本生(sheng)!您(nin)信任的合(he)作夥(huo)伴(ban)。我(wo)們(men)願與(yu)您(nin)真(zhen)誠(cheng)合(he)作，共(gong)創美(mei)好(hao)的未(wei)來。本生(sheng)試(shi)劑(ji)盒(he)