貼(tie)壁(bi)細胞(bao)培(pei)養常見(jian)問題(ti)分(fen)析原(yuan)因(yin)及對(dui)應解決方(fang)法(fa)!

　　貼(tie)壁(bi)細胞(bao)在培(pei)養時(shi)要(yao)貼(tie)附於培(pei)養(瓶(ping))器(qi)皿(min)壁(bi)上，細胞(bao)壹經(jing)貼(tie)壁(bi)就(jiu)迅速(su)鋪(pu)展(zhan)，然(ran)後(hou)開始(shi)有(you)絲分(fen)裂(lie)，並很快進入(ru)對(dui)數生。貼(tie)壁(bi)細胞(bao)因其(qi)培(pei)養過(guo)程較為繁瑣，所以(yi)培(pei)養時(shi)更(geng)容(rong)易(yi)出現(xian)問題(ti)。BUNSEN小編(bian)總(zong)結了(le)貼(tie)壁(bi)細胞(bao)培(pei)養中常見(jian)問題(ti)，並詳(xiang)細介紹(shao)原(yuan)因(yin)和(he)解(jie)決方(fang)法(fa)，若培(pei)養時(shi)遇(yu)到(dao)這些情況(kuang)，可(ke)參(can)考(kao)對(dui)應解決方(fang)法(fa)處理(li)。

　　壹、貼(tie)壁(bi)細胞(bao)培(pei)養，細胞(bao)不貼(tie)壁(bi)

　　常見(jian)原因(yin)：胰(yi)蛋白酶(mei)消化過(guo)度;支原(yuan)體汙染;培(pei)養基(ji)pH值(zhi)過堿(jian)(NaHCO3分(fen)解);細胞(bao)老(lao)化(hua);接(jie)種細胞(bao)起(qi)始(shi)濃(nong)度太(tai)低(di)或太(tai)高(gao)。

　　解(jie)決方(fang)法(fa)：縮短(duan)胰(yi)蛋白酶(mei)消化時(shi)間(jian)或降(jiang)低胰(yi)蛋白酶(mei)濃度;分(fen)離培(pei)養物(wu)，檢測支原(yuan)體。清潔(jie)支架(jia)或(huo)培(pei)養箱。如發(fa)現(xian)支原(yuan)體汙染，丟(diu)棄(qi)培(pei)養物(wu);使(shi)用(yong)無菌醋(cu)酸(suan)溶液調(tiao)整(zheng)pH值(zhi)或充(chong)入(ru)無菌CO2;啟(qi)用新(xin)的(de)保(bao)種(zhong)細胞(bao);調(tiao)節(jie)接(jie)種細胞(bao)濃度。

　　二(er)、培(pei)養細胞(bao)生長緩(huan)慢(man)

　　常見(jian)原因(yin)：由於(yu)更換不同培(pei)養液或血清(qing);培(pei)養液中壹些細胞(bao)生長必須成分(fen)如谷氨(an)酰(xian)胺或(huo)生長因子(zi)耗盡或缺乏(fa)或已被(bei)破(po)壞;培(pei)養物(wu)中有(you)少量(liang)細菌或(huo)真菌汙染;試劑(ji)保(bao)存不當(dang);接(jie)種細胞(bao)起(qi)始(shi)濃(nong)度太(tai)低(di);細胞(bao)已老(lao)化(hua);支原(yuan)體汙染。

　　解決方(fang)法(fa)：比較(jiao)新(xin)培(pei)養液與原(yuan)培(pei)養液成分(fen)，比較新血清與舊(jiu)血(xue)清(qing)支持(chi)細胞(bao)生長實驗(yan)，讓(rang)細胞(bao)逐漸(jian)適(shi)應新培(pei)養液;換入(ru)新鮮配(pei)置培(pei)養液，或補(bu)加(jia)谷氨(an)酰(xian)胺及生長因子(zi);用無抗生素培(pei)養液培(pei)養，如發(fa)現(xian)汙染，丟(diu)棄(qi)培(pei)養物(wu);血清需保(bao)存在-10到(dao)-20℃。培(pei)養液需在2-8℃避光保(bao)存。含(han)血(xue)清(qing)培(pei)養液在2-8℃保(bao)存，需在(zai)1周(zhou)內(nei)用完(wan);增加接(jie)種細胞(bao)起(qi)始(shi)濃(nong)度;換(huan)用(yong)新的(de)保(bao)種(zhong)細胞(bao);分(fen)離培(pei)養物(wu)，檢測支原(yuan)體。清潔(jie)支架(jia)和(he)培(pei)養箱。如發(fa)現(xian)支原(yuan)體汙染，丟(diu)棄(qi)培(pei)養物(wu)。

　　三、細胞(bao)生長周(zhou)期(qi)變慢

　　常見(jian)原因(yin)及解決方(fang)法(fa)：

　　1、細胞(bao)傳(chuan)代時(shi)密(mi)度太(tai)稀(xi)或(huo)太(tai)密(mi)：建(jian)議(yi)細胞(bao)密(mi)度達80%左(zuo)右進行(xing)傳(chuan)代，傳(chuan)代密(mi)度適(shi)中，密(mi)度過(guo)低(di)會延(yan)長生長周(zhou)期(qi);

　　2、傳(chuan)代操作不當(dang)：根(gen)據(ju)細胞(bao)特性(xing)決定細胞(bao)消化(hua)時(shi)間(jian)，壹般(ban)在顯微鏡(jing)下觀察(cha)細胞(bao)回縮(suo)變(bian)圓並有(you)少量(liang)細胞(bao)脫(tuo)落即(ji)可(ke)終止(zhi)消(xiao)化(hua)，難消化的(de)細胞(bao)可(ke)分(fen)次(ci)消化，每(mei)次(ci)時(shi)間(jian)不超過5min;頻(pin)繁(fan)換(huan)液或者清(qing)洗細胞(bao)也(ye)會導(dao)致(zhi)細胞(bao)狀(zhuang)態(tai)變差，常規(gui)換(huan)液時(shi)間(jian)間(jian)隔為(wei)2~3天(tian)。

　　四(si)、傳(chuan)代後部分(fen)細胞(bao)漂(piao)浮

　　常見(jian)原因(yin)及解決方(fang)法(fa)：

　　1、傳(chuan)代細胞(bao)密(mi)度太(tai)大：壹般(ban)細胞(bao)匯合(he)度達到(dao)80%時(shi)可(ke)進行(xing)傳(chuan)代操作，傳(chuan)代密(mi)度需(xu)適(shi)中，傳(chuan)代密(mi)度過(guo)高(gao)也(ye)會導(dao)致(zhi)傳(chuan)代後漂(piao)浮;

　　2、細胞(bao)狀(zhuang)態(tai)不好(hao)：可(ke)通過(guo)提(ti)高(gao)血(xue)清(qing)比(bi)例、穩定培(pei)養環(huan)境(jing)等(deng)方(fang)法(fa)進行(xing)改善;

　　3、吹打(da)次(ci)數過多造成機(ji)械損(sun)傷(shang)：輕柔(rou)吹打(da)，細胞(bao)呈單(dan)顆(ke)粒時(shi)可(ke)停止(zhi)吹打(da)，吹打(da)過程避免氣(qi)泡(pao)產生;

　　4、培(pei)養基(ji)更換(huan)後(hou)不適應：更換回原來(lai)的(de)培(pei)養基(ji);或者(zhe)與原(yuan)培(pei)養基(ji)比例(li)混合(he)後使(shi)用(yong)，使(shi)細胞(bao)有(you)個(ge)適(shi)應期。

　　五(wu)、傳(chuan)代後細胞(bao)全部飄(piao)起(qi)

　　解決方(fang)法(fa)：檢查(zha)所(suo)使(shi)用(yong)的(de)培(pei)養基(ji)的(de)顏色(se)是(shi)否(fou)偏紫色(se)，檢(jian)查瓶蓋是(shi)否(fou)透(tou)氣(qi)，不透(tou)氣(qi)瓶蓋是(shi)否(fou)被擰松(song)。

　　通常培(pei)養基(ji)偏堿，顏(yan)色(se)就(jiu)會偏紫，主(zhu)要(yao)是(shi)因(yin)為培(pei)養基(ji)裏的(de)酚紅(hong)指(zhi)示(shi)劑(ji)遇酸變黃、遇堿(jian)變(bian)紫，培(pei)養基(ji)量(liang)太(tai)少，或(huo)培(pei)養基(ji)存放時(shi)間(jian)太(tai)長(chang)時(shi)都(dou)會(hui)變(bian)堿(jian)。建議(yi)配(pei)好(hao)培(pei)養基(ji)後分(fen)裝(zhuang)到(dao)50mL離心(xin)管(guan)並於壹周(zhou)內(nei)用完(wan)，量(liang)少時(shi)放(fang)到(dao)15mL離心(xin)管(guan)裏保(bao)存。

　　六、傳(chuan)代後細胞(bao)成團

　　解(jie)決方(fang)法(fa)：

　　1、低密(mi)度接(jie)種，延(yan)長換液時(shi)間(jian)，防止(zhi)細胞(bao)脫(tuo)落;

　　2、使(shi)用(yong)多聚(ju)賴(lai)氨(an)酸(suan)包(bao)被(bei)培(pei)養器(qi)皿(min)，以增(zeng)加(jia)細胞(bao)貼(tie)壁(bi)牢(lao)固度，降(jiang)低細胞(bao)聚集(ji)成團的(de)幾率(lv);

　　3、重新(xin)鋪(pu)板，並更換(huan)新配(pei)制(zhi)的(de)培(pei)養基(ji)，加大血清比例(li)(增(zeng)加(jia)比例(li)不超過5%);

　　4、接(jie)種時(shi)，減(jian)少培(pei)養基(ji)量(liang)(如T25加3mL)以(yi)加快細胞(bao)貼(tie)壁(bi)速(su)度，等(deng)待(dai)細胞(bao)貼(tie)壁(bi)後(hou)(約8-12小時(shi))，再(zai)補(bu)加(jia)培(pei)養基(ji)到(dao)正(zheng)常用量(liang)。

　　註：以上資(zi)訊僅(jin)供(gong)參(can)考(kao)，本公(gong)司(si) 不承(cheng)擔任(ren)何風(feng)險，產(chan)品信(xin)息具體請咨(zi)詢(xun)。

　　培(pei)養皿(min)本生壹直(zhi)視質(zhi)量(liang)控(kong)制(zhi)為企(qi)業(ye)的(de)生命，追(zhui)求企業(ye)競(jing)爭力的(de)不斷(duan)提(ti)升(sheng)。公(gong)司(si)在經(jing)營中始(shi)終秉(bing)承(cheng)：遵紀(ji)守法，嚴(yan)於(yu)律己(ji)，寬仁以(yi)待(dai)，敢於承(cheng)擔的(de)企業(ye)精神作為標(biao)準(zhun)，以(yi)過硬(ying)的(de)質(zhi)量(liang)和(he)優(you)良(liang)的(de)服務來(lai)維護和(he)拓(tuo)展(zhan)市場(chang)，較大限度的(de)滿足客(ke)戶的(de)需求(qiu)。與客(ke)戶的(de)共贏(ying)，是(shi)我(wo)們的(de)發(fa)展(zhan)目(mu)標。本(ben)生!您信(xin)任(ren)的(de)合(he)作夥(huo)伴。我(wo)們願與您真誠(cheng)合(he)作，共創美好(hao)的(de)未(wei)來(lai)。