幹貨(huo)分(fen)享(xiang)：細(xi)胞(bao)培養板的(de)選(xuan)擇(ze)與常(chang)見(jian)問題解(jie)答

　　細胞(bao)培養板依(yi)底部(bu)形(xing)狀的不(bu)同可(ke)分(fen)為(wei)平(ping)底(di)和(he)圓(yuan)底(U型和V型);培養孔的孔數有6、12、24、48、96、384、1536 孔等(deng);具體(ti)選擇(ze)時(shi)根(gen)據(ju)培養細胞(bao)的(de)類(lei)型(xing)、所(suo)需培養體積(ji)及(ji)不(bu)同的(de)實(shi)驗(yan)目(mu)的而(er)定(ding)。

　　(1)平(ping)底(di)和(he)圓(yuan)底(U型和V型)培養板的(de)區(qu)別(bie)和選(xuan)擇(ze)：

　　貼(tie)壁(bi)細(xi)胞(bao)壹(yi)般用(yong)平(ping)底(di)培養板。懸(xuan)浮型(xing)細(xi)胞(bao)的(de)培養壹(yi)般用(yong)V型(xing)。U型培養板亦多(duo)用於培養懸浮型(xing)細(xi)胞(bao) 。V型(xing)培養板有時(shi)用(yong)做(zuo)免疫學(xue)血凝(ning)集(ji)的實(shi)驗(yan)。

　　不(bu)同型(xing)狀的板子(zi)自(zi)然(ran)有不(bu)同用(yong)途(tu)。平(ping)底(di)的(de)什(shen)麽(me)類(lei)型(xing)的(de)細(xi)胞(bao)都(dou)可(ke)用，但當(dang)細(xi)胞(bao)數目(mu)較少(shao)，如(ru)做(zuo)克隆(long)時(shi)，就用96孔平(ping)底(di)板，另(ling)外，做(zuo)MTT等(deng)實(shi)驗(yan)時(shi)，無(wu)論(lun)貼(tie)壁(bi)和(he)懸浮細(xi)胞(bao)，壹(yi)般均用(yong)平(ping)底(di)板。

　　至於U或(huo)V型板，壹(yi)般在某些(xie)特殊(shu)要求(qiu)時(shi)才(cai)使用。如(ru)在免(mian)疫學(xue)方(fang)面(mian)，當(dang)做(zuo)兩種不(bu)同淋(lin)巴細胞(bao)混(hun)合(he)培養時(shi)，需(xu)要二者(zhe)相互接(jie)觸(chu)以(yi)刺激，因此(ci)，壹(yi)般需(xu)要(yao)U型板，因(yin)細(xi)胞(bao)會(hui)由(you)於重(zhong)力(li)的作用而(er)聚(ju)集(ji)在壹(yi)個很(hen)小(xiao)的範(fan)圍(wei)內。

　　V型(xing)板的(de)用(yong)途更少(shao)，壹(yi)般用(yong)於細(xi)胞(bao)殺(sha)傷(shang)實(shi)驗(yan)時(shi)，為(wei)了(le)使效(xiao)靶細胞(bao)緊(jin)密接(jie)觸(chu)，常(chang)使(shi)用V型板，但(dan)這(zhe)種試(shi)驗(yan)也可用(yong)U型(xing)板替(ti)代(dai)(加入細(xi)胞(bao)後，低速離(li)心(xin))如(ru)果(guo)是養(yang)細(xi)胞(bao)的(de)話，通(tong)常(chang)是選(xuan)用(yong)平(ping)底(di)的(de)。

　　圓(yuan)底的好像沒(mei)聽說過(guo)拿來養(yang)細胞(bao)。圓(yuan)底(di)的通(tong)常(chang)是拿來做(zuo)分(fen)析(xi)， 化學(xue)反(fan)應， 或(huo)是保存(cun)樣(yang)品用的， 因為(wei)圓底(di)比較好(hao)將液(ye)體(ti)吸(xi)得(de)幹(gan)凈(jing)，如(ru)果(guo)用(yong)平(ping)底(di)的(de)就不(bu)好吸(xi)了(le)。

　　(2)細胞(bao)培養常(chang)見(jian)問題與解答

　　問：我(wo)看(kan)到(dao)培養板有4、6、12、24、48、96孔幾種(zhong)規(gui)格(ge) ，但不(bu)知道(dao)到(dao)底什(shen)麽(me)實(shi)驗(yan)用(yong)哪(na)種(zhong)規格(ge)。

　　答：要(yao)根(gen)據(ju)妳(ni)具體(ti)的實(shi)驗(yan)要(yao)求(qiu)，流式壹(yi)般用(yong)6孔，MTT壹(yi)般用(yong)96孔，細胞(bao)爬(pa)片壹(yi)般用(yong)24孔等(deng)，要具(ju)體根(gen)據(ju)妳(ni)實(shi)驗(yan)來定(ding)。

　　問：我想測吸光度(du)用(yong)酶(mei)標(biao)儀，用多(duo)孔細胞(bao)培養板行(xing)嗎?請(qing)問(wen)酶(mei)標(biao)板多(duo)孔細胞(bao)培養板有什麽(me)區別(bie)?

　　答：用(yong)多(duo)空細胞(bao)培養板測吸光度(du)肯(ken)定(ding)可以拉，我們(men)經(jing)常(chang)用(yong)它來做(zuo)樣(yang)品的蛋白定(ding)量(liang)和(he)MTT檢(jian)測。

　　區別(bie)：酶(mei)標(biao)板壹(yi)般要(yao)比細胞(bao)培養板貴，細(xi)胞(bao)板主(zhu)要做(zuo)細胞(bao)培養，但也可以(yi)用(yong)來測蛋白(bai)濃(nong)度(du);酶(mei)標(biao)板包(bao)括(kuo)包被(bei)板和(he)反(fan)應板，壹(yi)般不(bu)能用(yong)做(zuo)細胞(bao)培養，它主(zhu)要做(zuo)免疫酶(mei)聯反(fan)應後的蛋(dan)白檢(jian)測，它需(xu)要(yao)更高的(de)要求還(hai)需要(yao)特(te)定(ding)的酶(mei)標(biao)工作液(ye)。

　　(3)細(xi)胞(bao)培養板的(de)密(mi)閉(bi)和汙染(ran)問題

　　細(xi)胞(bao)培養板的(de)加樣(yang)和操(cao)作：細胞(bao)培養板在進(jin)行(xing)細胞(bao)操(cao)作時(shi)同(tong)樣(yang)遵循(xun)嚴格(ge)無菌(jun)的原(yuan)則，各項操(cao)作要保證規(gui)範(fan)、科學(xue)，不(bu)對細(xi)胞(bao)的(de)生(sheng)長造(zao)成(cheng)額(e)外的影(ying)響。這(zhe)其中最(zui)常(chang)見(jian)的問題就是如(ru)何保證加樣(yang)後細胞(bao)的(de)均勻(yun)和(he)盡(jin)量減(jian)少(shao)換液(ye)對細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)狀態的影(ying)響。

　　問(wen)：96，24孔培養板或(huo)培養皿的(de)蓋(gai)子(zi)都(dou)很(hen)松，這樣(yang)是方(fang)便(bian)了(le)透氣，但(dan)是細(xi)菌(jun)、黴(mei)菌等(deng)汙染(ran)物會不(bu)會也隨著(zhe)溜(liu)進(jin)去(qu)呢(ne)?

　　答：

　　1. 蓋(gai)子(zi)很松，屬於半開放(fang)培養，這樣(yang)的目(mu)的是透氣(實(shi)際(ji)上(shang)是為(wei)了(le)使培養皿外的co2能(neng)夠(gou)與培養皿充分(fen)交(jiao)換，維(wei)持培養基的pH值(zhi))。

　　2. 凡(fan)事(shi)有利(li)必(bi)有弊(bi)，這(zhe)樣(yang)當(dang)然(ran)增(zeng)加了(le)汙染(ran)的可能性。此(ci)外這樣(yang)還(hai)會使(shi)培養皿內(nei)的(de)液(ye)體(ti)蒸(zheng)發，這(zhe)對於精確定(ding)量(liang)的(de)藥(yao)物(wu)來說(shuo)就顯得(de)值(zhi)得(de)註(zhu)意了(le)。所(suo)以以(yi)下二(er)條措施(shi)是必(bi)須(xu)的：

　　a 培養箱內(nei)空氣必(bi)須(xu)清潔(jie)(定期紫外線照(zhao)，酒(jiu)精擦洗，盡(jin)量少(shao)開關培養箱);

　　b 培養箱內(nei)的(de)濕度必(bi)須(xu)始終保持為(wei)100%(培養箱內(nei)放(fang)置無菌(jun)蒸(zheng)餾水(shui)的(de)水槽(cao))。

　　就好像(xiang)培養皿，也是壹(yi)個蓋(gai)倒(dao)扣的容器，也不(bu)會汙染(ran)。主(zhu)要是因(yin)為(wei)蓋(gai)子(zi)“L"型邊(bian)緣產(chan)生(sheng)氣流負壓(ya)的(de)緣故，灰塵上(shang)面才附(fu)著(zhe)有微生物，而(er)氣(qi)流攜帶的(de)灰塵是無(wu)法(fa)通(tong)過(guo)產(chan)生(sheng)負壓(ya)的(de)蓋(gai)邊(bian)緣的。而(er)透氣作用只(zhi)是通(tong)過(guo)空氣的(de)擴(kuo)散(san)，不(bu)會產(chan)生(sheng)氣流，所(suo)以只(zhi)會(hui)透氣不(bu)會透菌。

　　問(wen)：我使用24孔板，在其中的(de)某些(xie)孔中有操作(在超(chao)凈(jing)臺(tai)內)，而(er)其它孔中還(hai)有細胞(bao)要(yao)培養，我很(hen)擔心(xin)這樣(yang)會汙染(ran)，不(bu)知道(dao)要註(zhu)意什麽(me)?大家(jia)不(bu)知道(dao)有什麽(me)好的(de)建(jian)議(yi)。

　　答：在超(chao)凈(jing)臺(tai)內如(ru)果(guo)操(cao)作規範(fan)的(de)話應該(gai)可以(yi)的，我(wo)想妳(ni)可以(yi)充分(fen)利(li)用(yong)培養版(ban)的蓋(gai)子(zi)，盡(jin)量只(zhi)暴(bao)露要(yao)操(cao)作的孔，將其它孔用蓋(gai)子(zi)蓋(gai)起(qi)來。這(zhe)是我(wo)的(de)壹(yi)點(dian)粗(cu)淺的見解(jie)，拋(pao)磚(zhuan)引(yin)玉(yu)吧(ba)!

　　(4)細(xi)胞(bao)分(fen)布不(bu)均及(ji)解決辦(ban)法

　　問(wen)：我(wo)的細胞(bao)接(jie)種(zhong)培養板，細(xi)胞(bao)總(zong)是聚(ju)集(ji)在周(zhou)邊(bian)部(bu)分(fen)，該(gai)如(ru)何處(chu)理(li)啊(a)?我(wo)看(kan)園子裏(li)有的戰(zhan)友(you)的(de)細胞(bao)卻是聚(ju)集(ji)在中(zhong)間(jian)，是不(bu)是板子(zi)的(de)質量問題啊(a)?

　　答：請(qing)問(wen)妳(ni)的細(xi)胞(bao)是如(ru)何混(hun)勻的(de)?是滴管(guan)吹(chui)打還(hai)是振(zhen)蕩(dang)培養板?如(ru)果(guo)是後者(zhe)，而(er)且(qie)是轉(zhuan)圈(quan)搖勻(yun)的話，很有可能由於離(li)心(xin)力的作用使(shi)細胞(bao)甩(shuai)到(dao)周(zhou)邊(bian)部(bu)分(fen)，導致細胞(bao)中(zhong)間(jian)少(shao)，四周(zhou)多(duo)!自己(ji)可是試(shi)試(shi)!

　　(5)6孔板接(jie)種(zhong)和(he)換(huan)液(ye)問(wen)題：

　　問(wen)：我的細(xi)胞(bao)傳(chuan)代(dai)很正常(chang)，但(dan)壹(yi)種到(dao)六孔板裏(li)(不(bu)管(guan)加藥和對照(zhao))，總(zong)有兩三(san)個(ge)孔(隨機)細胞(bao)長(chang)得(de)不(bu)好，很(hen)小(xiao)，像破(po)碎了(le)。有人遇到(dao)過(guo)這種(zhong)情(qing)況嗎(ma)?到(dao)底是啥(sha)原(yuan)因呢(ne)?請(qing)各(ge)位指點(dian)

　　答(da)：可能跟(gen)妳(ni)加液(ye)的(de)溫(wen)度有關。如(ru)果(guo)妳(ni)細胞(bao)剛(gang)剛(gang)拿出來換(huan)液(ye)加液(ye)，培養基也是從(cong)4度冰箱拿出來不(bu)久，很(hen)容易細胞(bao)就會凍死(si)了(le)。建(jian)議(yi)妳(ni)最好(hao)把培養基先在培養箱裏(li)邊(bian)孵(fu)育15min先(xian)。

　　(6)24孔板接(jie)種(zhong)問(wen)題：

　　問(wen)：把細胞(bao)消化接(jie)種(zhong)到(dao)24孔板之(zhi)後，已(yi)經(jing)四天(tian)了(le)，老是每孔的中(zhong)間(jian)部(bu)分(fen)長不(bu)滿，每天(tian)換(huan)液(ye)時(shi)都(dou)用(yong)PBS 清洗，第二天(tian)換(huan)液(ye)時(shi)都(dou)出現(xian)同樣(yang)的情(qing)況，每孔的邊(bian)緣長的很好(hao)，中(zhong)央大量(liang)死(si)細(xi)胞(bao)?我(wo)是選(xuan)擇(ze)孔內鋪(pu)蓋(gai)玻(bo)片，在玻(bo)片上(shang)種植(zhi)。每次換液(ye)都(dou)用(yong)PBS洗，必(bi)要(yao)的(de)步驟嗎(ma)?另(ling)外，也有可能和細胞(bao)種(zhong)類(lei)有關或者(zhe)和培養液(ye)有關?

　　答：1. 我想妳(ni)的培養液(ye)可(ke)能(neng)加的太少(shao)了(le)。由於表面(mian)張力的作用，培養板的(de)邊(bian)緣液(ye)體(ti)會(hui)向上(shang)走，造(zao)成(cheng)培養液(ye)面(mian)呈(cheng)現(xian)壹(yi)個凹(ao)面(mian)(就像量(liang)筒(tong)的液(ye)體(ti)凹(ao)面(mian)壹(yi)樣(yang))，中央的細(xi)胞(bao)正好在凹(ao)面(mian)的處(chu)，培養液(ye)少(shao)，細胞(bao)的(de)營(ying)養不(bu)夠，甚至幹涸(he)掉(diao)，空氣中(zhong)的(de)氧氣也會造(zao)成(cheng)損傷(shang)，即使有增(zeng)值(zhi)過(guo)來的(de)細胞(bao)也會死(si)掉(diao)。

　　註(zhu)：以(yi)上(shang)資訊(xun)僅(jin)供(gong)參(can)考(kao)，本公司(si) 不(bu)承(cheng)擔任何風(feng)險(xian)，產(chan)品信息具(ju)體(ti)請(qing)咨(zi)詢。

　　培養皿本生(sheng)壹(yi)直(zhi)視質量控制為(wei)企(qi)業(ye)的(de)生(sheng)命(ming)，追求企(qi)業(ye)競爭力的不(bu)斷提升(sheng)。公司(si)在經(jing)營(ying)中(zhong)始終(zhong)秉承(cheng)：遵(zun)紀(ji)守(shou)法，嚴(yan)於律(lv)己，寬(kuan)仁以(yi)待，敢(gan)於承(cheng)擔的企(qi)業(ye)精神作為(wei)標(biao)準，以(yi)過(guo)硬的質量和優良(liang)的(de)服(fu)務來維(wei)護(hu)和(he)拓(tuo)展(zhan)市(shi)場，較大限(xian)度的滿足(zu)客(ke)戶(hu)的需(xu)求。與客(ke)戶(hu)的共(gong)贏(ying)，是我(wo)們(men)的發(fa)展(zhan)目(mu)標(biao)。本生(sheng)!您信任(ren)的合(he)作夥(huo)伴(ban)。我們(men)願(yuan)與您真誠合(he)作，共創(chuang)美好的未(wei)來。