細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)小知(zhi)識，妳(ni)知(zhi)道嗎?

　　什麽是(shi)細胞(bao)培(pei)養(yang)呢(ne)?

　　細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)是(shi)指從動物(wu)或(huo)植(zhi)物(wu)中(zhong)取(qu)出(chu)細(xi)胞(bao)，然(ran)後(hou)使(shi)其(qi)在合(he)適(shi)的(de)人(ren)工(gong)條(tiao)件下(xia)生(sheng)長(chang)。這(zhe)些細(xi)胞(bao)可(ke)於(yu)培(pei)養(yang)前(qian)直(zhi)接(jie)從組織中(zhong)取(qu)出(chu)來(lai)並采用酶或(huo)機(ji)械(xie)方(fang)法進(jin)行(xing)解(jie)離(li)，或(huo)者也(ye)可(ke)來自(zi)已(yi)經(jing)建立的(de)細胞(bao)系(xi)或(huo)細(xi)胞(bao)株。

　　接(jie)下(xia)來(lai)我們(men)壹起跟(gen)隨(sui)BUNSEN本生(sheng)了(le)解(jie)壹些細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)中(zhong)的(de)小技巧(qiao)：

　　1、冷(leng)凍(dong)管(guan)該(gai)如(ru)何(he)解(jie)凍(dong)? 取(qu)出(chu)冷(leng)凍(dong)管(guan)後(hou)，須立即(ji)放(fang)入37°C水槽(cao)中快(kuai)速解(jie)凍(dong)，輕(qing)搖冷(leng)凍(dong)管(guan)使(shi)其(qi)在1分(fen)鐘內(nei)全(quan)部融(rong)化(hua)，並註意水(shui)面不(bu)可超(chao)過冷(leng)凍(dong)管(guan)蓋沿，否則(ze)易發生(sheng)汙(wu)染(ran)情(qing)形(xing)。另冷(leng)凍(dong)管(guan)由(you)液氮(dan)桶中(zhong)取(qu)出(chu)解(jie)凍(dong)時(shi)，必須註意安全，預(yu)防(fang)冷(leng)凍(dong)管(guan)爆裂。

　　2、細(xi)胞(bao)冷(leng)凍(dong)管(guan)解(jie)凍(dong)培(pei)養(yang)時(shi)，是(shi)否應馬(ma)上(shang)去(qu)除(chu)DMSO? 除(chu)少數特(te)別註明(ming)對DMSO 敏感(gan)的(de)細胞(bao)外(wai)，絕(jue)大(da)部分(fen)細胞(bao)株(包(bao)括懸(xuan)浮(fu)性細(xi)胞(bao))，在(zai)解(jie)凍(dong)之(zhi)後(hou)，應直(zhi)接(jie)放(fang)入含有10-15ml新(xin)鮮培(pei)養(yang)基(ji)的(de)培(pei)養(yang)角(jiao)瓶(ping)中，待(dai)隔(ge)天(tian)再置換新鮮培(pei)養(yang)基(ji)以去(qu)除(chu)DMSO 即(ji)可(ke)，如(ru)此(ci)可(ke)避(bi)免大部分(fen)解(jie)凍(dong)後(hou)細胞(bao)無法生(sheng)長(chang)或(huo)貼附(fu)的(de)問(wen)題(ti)。

　　3、可否使(shi)用與原(yuan)先培(pei)養(yang)條(tiao)件不(bu)同(tong)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)? 不(bu)能。每(mei)壹細胞(bao)株均有其(qi)特定(ding)使(shi)用且已(yi)適(shi)應的(de)細胞(bao)培(pei)養(yang)基(ji)，若(ruo)驟然(ran)使(shi)用和原(yuan)先提供的(de)培(pei)養(yang)條(tiao)件不(bu)同(tong)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)， 細(xi)胞(bao)大(da)都(dou)無法立即(ji)適(shi)應，造成細胞(bao)無法存(cun)活(huo)。

　　4、可(ke)否使(shi)用與原(yuan)先培(pei)養(yang)條(tiao)件不(bu)同(tong)的(de)血清(qing)種(zhong)類? 不(bu)能。血清是(shi)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)上(shang)壹個(ge)極為重(zhong)要的(de)營(ying)養(yang)來(lai)源，所(suo)以血清(qing)的(de)種類(lei)和(he)品質(zhi)對於(yu)細胞(bao)的(de)生(sheng)長(chang)會(hui)產(chan)生(sheng)極大的(de)影(ying)響(xiang)。來(lai)自(zi)不(bu)同(tong)物(wu)種(zhong)的(de)血清(qing)，在(zai)壹些物(wu)質(zhi)或分(fen)子的(de)量或(huo)內(nei)容(rong)物(wu)上(shang)都(dou)有所(suo)不(bu)同(tong)，血(xue)清(qing)使(shi)用錯誤(wu)常會造成細胞(bao)無法存(cun)活(huo)。

　　5、何(he)謂FBS,FCS,CS,HS? FBS(fetal bovine serum)和FCS(fetal calf serum)是(shi)相(xiang)同(tong)的(de)意思，兩者都(dou)是(shi)指胎(tai)牛(niu)血清(qing)，FCS乃(nai)錯(cuo)誤(wu)的(de)使(shi)用字(zi)眼(yan)，請(qing)不要(yao)再使(shi)用。CS(calf serum)則(ze)是指小牛(niu)血清(qing)。HS(horseserum)則(ze)是指馬(ma)血(xue)清。

　　6、培(pei)養(yang)細(xi)胞(bao)時(shi)應使(shi)用5%或10%CO2?或(huo)根(gen)本沒(mei)有影(ying)響(xiang)? 壹般培(pei)養(yang)基(ji)中(zhong)大都(dou)使(shi)用HCO3-/CO32-/H+作為(wei)pH的(de)緩沖系統(tong)，而培(pei)養(yang)基(ji)中(zhong)NaHCO3 的(de)含量(liang)將決定(ding)細胞(bao)培(pei)養(yang)時(shi)應使(shi)用的(de)CO2濃度。當(dang)培(pei)養(yang)基(ji)中(zhong)NaHCO3含量(liang)為(wei)每(mei)公升(sheng)3.7g時，細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)時(shi)應使(shi)用10%CO2;當(dang)培(pei)養(yang)基(ji)中(zhong)NaHCO3為每(mei)公升(sheng)1.5g時，則(ze)應使(shi)用5%CO2培(pei)養(yang)細(xi)胞(bao)。

　　7、何(he)時(shi)須更換培(pei)養(yang)基(ji)? 視(shi)細胞(bao)生(sheng)長(chang)密(mi)度而定，或遵照細(xi)胞(bao)株基本(ben)數據(ju)上(shang)之(zhi)更(geng)換時間(jian)，按(an)時(shi)更(geng)換培(pei)養(yang)基(ji)即(ji)可(ke)。

　　8、培(pei)養(yang)基(ji)中(zhong)是否須添加(jia)抗(kang)生(sheng)素(su)? 除於(yu)特殊篩選(xuan)系(xi)統(tong)中外(wai)，壹般正(zheng)常(chang)培(pei)養(yang)狀(zhuang)態(tai)下，培(pei)養(yang)基(ji)中(zhong)不應添加(jia)任何(he)抗(kang)生(sheng)素(su)。

　　9、附著(zhe)性(xing)細胞(bao)繼(ji)代時所(suo)使(shi)用的(de)trypsin-EDTA濃度?應如(ru)何(he)處(chu)理? 壹般使(shi)用的(de)trypsin-EDTA濃度為0.05% trypsin-0.53mMEDTA.4 Na。*次(ci)開(kai)瓶後(hou)應立即(ji)少量分(fen)裝於(yu)無菌(jun)試管(guan)中(zhong)，保存(cun)於(yu)-20°C，避免反復冷(leng)凍(dong)解(jie)凍(dong)造成trypsin 的(de)活(huo)性(xing)降(jiang)低(di)，並可減少汙染(ran)的(de)機(ji)會(hui)。

　　10、懸(xuan)浮(fu)性細(xi)胞(bao)應如(ru)何(he)繼(ji)代處(chu)理? 壹般僅需持(chi)續(xu)加(jia)入新鮮培(pei)養(yang)基(ji)於(yu)原培(pei)養(yang)角(jiao)瓶(ping)中，稀(xi)釋(shi)細胞(bao)濃(nong)度即(ji)可(ke)，若(ruo)培(pei)養(yang)液太多時，可(ke)將培(pei)養(yang)角(jiao)瓶(ping)口(kou)端稍(shao)微擡(tai)高，直(zhi)到無法容(rong)納為止(zhi)。分(fen)瓶時取(qu)出(chu)壹部份含細(xi)胞(bao)之(zhi)培(pei)養(yang)液至(zhi)另(ling)壹新的(de)培(pei)養(yang)角(jiao)瓶(ping)，加入新鮮培(pei)養(yang)基(ji)稀(xi)釋(shi)至(zhi)適(shi)當(dang)濃(nong)度，重復前述(shu)步(bu)驟即(ji)可(ke)。

　　細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang) 本(ben)生(sheng)生(sheng)物(wu)公(gong)司(si)供應：ELISA試劑(ji)盒,動物(wu)血(xue)清(qing),熒(ying)光定量(liang)PCR耗(hao)材,移液器(qi)吸(xi)嘴,微(wei)量離(li)心管,進(jin)口(kou)凍(dong)存(cun)管,細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)皿(min),培(pei)養(yang)板(ban),培(pei)養(yang)瓶(ping),進(jin)口(kou)吸(xi)頭(tou),儀(yi)器(qi)及(ji)手(shou)套,色譜耗(hao)材,針(zhen)頭(tou)過濾器(qi)等。