Elisa操作(zuo)：ELISA實驗步驟及註意(yi)事項(xiang)

　　Elisa試(shi)劑盒(he)技術(shu)指出ELISA實驗步驟及實驗需註意(yi)的(de)事項(xiang)：

　　1、固相載(zai)體選擇(ze)

　　聚苯(ben)乙烯(xi)：具有(you)較(jiao)強(qiang)的(de)吸附蛋(dan)白質(zhi)的(de)性(xing)能(neng)，抗(kang)體或抗(kang)原(yuan)吸附其(qi)上後仍(reng)保留原來(lai)的免疫(yi)學活(huo)性(xing)。

　　聚氯乙烯(xi)：聚氯乙烯(xi)對蛋(dan)白質(zhi)的(de)吸附性(xing)能(neng)比(bi)聚苯(ben)乙烯(xi)高，但空白(bai)值也略高溫(wen)物。

　　良好的ELISA板(ban)應該(gai)是(shi)吸附性(xing)能(neng)好，空白(bai)值低(di)，孔底(di)透(tou)明度(du)高，各(ge)板(ban)之間、同(tong)壹(yi)板(ban)各(ge)孔(kong)之間性(xing)能(neng)相(xiang)近。

　　2、包被(bei)

　　①板(ban)孔的(de)選擇(ze)：ELISA配套的微(wei)孔板(ban)。

　　②抗體(ti)選擇(ze)：何(he)針選擇(ze)支(zhi)持ELISA實驗的抗體(ti)，根(gen)據推薦濃度(du)稀釋或摸索最(zui)適(shi)濃(nong)度(du)。

　　③包(bao)被(bei)緩(huan)沖(chong)液(ye)：pH9.6碳酸(suan)鹽(yan)緩(huan)沖(chong)液(ye)或pH7.2磷酸(suan)鹽(yan)緩(huan)沖(chong)液(ye)。

　　④包(bao)被(bei)溫(wen)度(du)：2-8 ℃過(guo)夜(ye)包(bao)被(bei)或室溫(wen)(37℃)包(bao)被(bei)2h。

　　⑤包被(bei)濃度(du)：包(bao)被(bei)濃度(du)隨(sui)載體(ti)和包被(bei)物的性(xing)質(zhi)可(ke)有(you)很大(da)的變(bian)化(hua)。壹(yi)般包(bao)被(bei)濃度(du)為10ug/ml-20ug/ml。

　　3、封(feng)閉

　　①包(bao)被(bei)之後壹(yi)定要(yao)立(li)即(ji)封(feng)閉(封閉(bi)非特異(yi)性(xing)抗(kang)體(ti))。

　　②選擇(ze)效(xiao)果較(jiao)好的封(feng)閉(bi)劑(細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)級BSA、Tween等)。

　　4、加(jia)樣(yang)及孵育(yu)

　　①加樣(yang)時(shi)應將(jiang)所(suo)加(jia)物加在ELISA板(ban)孔的(de)底(di)部，避免加(jia)在(zai)孔(kong)壁上部，並(bing)註意(yi)不(bu)可(ke)濺(jian)出，不可(ke)產生氣(qi)泡(pao)。

　　②孵育(yu)的時(shi)間及溫(wen)度(du)參考(kao)試(shi)劑盒(he)說明書。如有(you)條件(jian)，建議加樣(yang)孵(fu)育(yu)時(shi)使(shi)用(yong)shaker震(zhen)蕩(dang)儀，推薦軌道直徑(jing)3mm，轉速(su)在500±50rpm。

　　③檢(jian)測抗(kang)體、酶(mei)標(biao)物的稀釋比(bi)例(li)、孵育(yu)溫(wen)度(du)、孵(fu)育(yu)時(shi)間嚴(yan)格根據說明書提(ti)示(shi)。

　　④洗板(ban)對於(yu)ELISA來說，是(shi)極其(qi)關鍵的壹(yi)步，保證(zheng)ELISA的特異(yi)性(xing)。

　　⑤封(feng)板(ban)膜壹(yi)定要(yao)壹(yi)次壹(yi)換，切(qie)勿二次(ci)甚(shen)至多(duo)次使(shi)用(yong)，以防交叉汙染。

　　5、顯色和終材暗(an)總止

　　①使(shi)用(yong)前需檢(jian)查(zha)，底(di)物在加入(ru)96孔(kong)板(ban)之前應為無(wu)色透(tou)明。

　　②顯色底(di)物需現配現用(yong)，避(bi)免汙(wu)染(ran)。

　　③孵(fu)育(yu)時(shi)間，說明書上為參考(kao)範圍，具(ju)體需(xu)要(yao)根據(ju)實驗條件(jian)自(zi)行摸索。可(ke)參考(kao)標(biao)曲濃度(du)孔(kong)的(de)顏(yan)色，變(bian)為藍(lan)色較(jiao)明顯時(shi)即可(ke)。

　　ELISA試(shi)劑盒(he)  BUNSEN本(ben)生 公司(si)在(zai)經營中始(shi)終秉承：遵紀(ji)守(shou)法(fa)，嚴(yan)於律(lv)己，寬(kuan)仁(ren)以待，敢於承擔的企(qi)業精(jing)神(shen)作(zuo)為標(biao)準，以過硬(ying)的(de)質(zhi)量(liang)和優(you)良的服(fu)務(wu)來維(wei)護(hu)和拓(tuo)展(zhan)市(shi)場，較(jiao)大(da)限(xian)度(du)的(de)滿(man)足(zu)客(ke)戶(hu)的需(xu)求(qiu)。與客(ke)戶(hu)的共贏(ying)，是(shi)我們的發(fa)展(zhan)目標(biao)。本(ben)生!您信(xin)任(ren)的合作夥(huo)伴。我們願與您真(zhen)誠(cheng)合作，共創美(mei)好的未來(lai)。